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       【摘要】 
       目的在临床前研究中，建立合欢不同部位中槲皮苷的含量测定方法。方法Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm)色谱柱，流动相为甲醇-水(冰醋酸调pH 3.2)=55∶45，流速为1.2 ml·min-1，检测波长为256 nm。结果槲皮苷在2.485～24.85 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.999 8，n=7)，平均加样回收率为 101.2%，RSD为1.4%。结论该方法定量简单、准确，可用于控制槲皮苷的质量。
       【关键词】  合欢; 槲皮苷; 高效液相色谱法
       合欢花为豆科植物Albizzia julibrissin Durazz的干燥花序，性平味苦。现代医学研究表明，合欢花具有解郁安神、活血消肿之功效，用于心神不安、忧郁失眠等症[1～3]。合欢花镇静催眠作用的有效成分为槲皮苷(quercitroside)[4]。本文建立了合欢花中槲皮苷的含量测定方法，以期为临床前研究中合欢花的质量控制提供依据。
       1 仪器与材料
       美国Agilent 1100高效液相色谱仪;瑞士XT-120A电子分析天平;上海LXJ-II离心沉淀机;中国上海科学院2X-91旋转蒸发仪;上海KQ-250TDE台式数控高频超声提取仪。
       槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号111538-200302);槲皮苷样品(自制，批号：080616，081018，081214);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为超纯水。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm)色谱柱，流动相为甲醇-水(冰醋酸调pH 3.2)=55∶45，流速为1.2 ml·min-1，检测波长为256 nm，柱温30℃，满标进样20 μl。
       2.2 对照品液的制备称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮苷对照品约10 mg，精密称定，流动相溶解并转移至100 ml容量瓶中，定容，精密量取上述溶液1.0 ml，置于10 ml容量瓶中，流动相定容至刻度，即得0.01 mg·ml-1的对照品溶液。
       2.3 供试品液的制备取供试品200 mg，精密称定，加入甲醇100 ml超声提取30 min，提取液加压低温旋蒸浓缩，浓缩物以流动相溶解转移至50 ml容量瓶中，流动相定容至刻度。进样前以0.22 μm的两用微膜滤过，备用。
       2.4 检测波长的确定以对照品溶液在紫外全波段扫描，其在256 nm，351 nm处均有较强吸收。而256 nm处吸收峰呈正态分布且灵敏度较高，故选定256 nm为检测波长。
       2.5 专属性考察在上述色谱条件下，其他杂质不干扰主峰的分离和测定，槲皮苷保留时间为11.15 min。槲皮苷的有效塔板数为5 800，拖尾因子1.02。见图1。
       2.6 标准曲线的制备分别精密量取对照品液0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00 ml至10 ml容量瓶，流动相定容至刻度，漩涡震荡摇匀，取适量于具塞尖底离心管中4 000 r/min离心10 min，分别吸取上清液20 μl进样。以质量浓度(C)为纵坐标，峰面积(A)为横坐标，进行线性回归，得标准曲线方程C=0.516×10-5A-0.145，(r=0.999 8，n=7)，在2.485～24.85 μg·ml-1范围内C与A呈良好的线性关系。
       a槲皮苷对照品 b含槲皮苷样品
       图1 槲皮苷的RP-HPLC图
       2.7 精密度实验精密量取对照品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，流动相定容，按“2.6”项下同法处理，分别于0，15，30，45，60，120 min测定槲皮苷含量，计算日内精密度;测定1次/d，共6次，计算日间精密度。结果日内RSD为0.58%;日间RSD为1.56%。
       2.8 重复性实验精密量取6份供试品溶液1 ml，置于10 ml容量瓶中，流动相定容，按“2.6”项下同法处理，测得含量的RSD为0.85%。
       2.9 回收率实验以样品处理原液(33.37 μg·ml-1)为对象，分别精密量取3份2.0 ml置3支10 ml容量瓶中，各加入槲皮苷对照品溶液(23.20 μg·ml-1)1.0，2.0，3.0 ml，定容至刻度，按“2.6”项下同法处理。每个浓度平行处理3份，测定槲皮苷总含量。结果见表1。表1 回收率实验结果
       2.10 样品含量测定取各样品约200 mg，按“2.3”项下处理，余按“2.6”项下同法处理。每批样品平行处理3份。结果见表2。表2 样品的含量测定结果
       3 讨论
       以往槲皮苷的含量测定方法[5～7]普遍存在着样品前处理复杂、耗时、昂贵，流动相选择复杂，拖尾，保留时间过长等缺点，远不能适应槲皮苷的快速准确分析。而我们采用的RP-HPLC具有分析仪器普及率高、简便、价廉、快速、灵敏度高等优点，不仅可以用于在临床前研究中控制槲皮苷的质量，而且适用于含槲皮苷各种制剂产品的定量分析。
       【参考文献】
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       [7] 刘 艺，翁幼武，张 琦.HPLC法测定天山花楸枝叶中槲皮素含量[J].广西医学，2005，27(6):839.