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       【摘要】 
       目的研究瓣蕊唐松草根茎中提取抗氧化性物质的最佳方法及工艺条件。方法用不同溶剂、不同条件对提取的根茎内含物进行抗氧化实验，抗氧化性的测定采用T-AOC法。结果瓣蕊唐松草根茎提取物具有抗氧化性;用乙醇与醋醇乙酯提取时抗氧化性较高;温度因素对其抗氧化性影响很大;以乙醇为提取溶剂，最佳提取条件为固液比1∶12.5，浸提时间60 min，提取温度60℃。结论瓣蕊唐松草在天然抗氧化剂开发方面有较好的应用前景。
       【关键词】  瓣蕊唐松草; 抗氧化性; 提取条件
       瓣蕊唐松草Thalictrum petaloideum为毛茛科唐松草属植物，在内蒙古自治区，主要分布于兴安盟、呼伦贝尔盟、通辽市、赤峰市、锡林郭勒盟、乌兰察布盟、大青山、蛮汗山、乌拉山;分布广，产量极多。其种子入蒙药，根及根茎入中药。蒙药主治肺热咳嗽，肺脓肿，失眠等;中药主治肠炎，赤白痢疾，黄痘型肝炎，小儿热症等[1]。最近的研究发现同属植物成分具有抗癌、抗凝等功效[2，3]。起药效作用的主要成分是生物碱和皂苷[4，5]，而研究最多的是生物碱，目前已经发现和鉴定的唐松草属植物源生物碱有十几种。此外，汪冶等[5]对偏翅唐松草化学成分做了研究，分离出皂苷与黄酮类。但对瓣蕊唐松草的抗氧化作用的研究还处于一片空白。
       生理情况下，人体有1 %～5 %的分子氧通过多种途径产生氧自由基，过多的氧自由基通过损伤生物大分子，破坏细胞的结构和功能，促使疾病的发生与发展。研究发现，氧自由基与衰老、肿瘤、炎症、动脉硬化、肝和肺疾病等发生密切相关。抗氧化剂由于能清除人体的这些自由基而具有预防癌症、心血管疾病等疾病以及抗衰老的作用。而合成的抗氧化剂如BHA等可导致DNA的损伤及动物恶性肿瘤的发生而其安全性受到质疑，因此高效、安全的天然抗氧化剂的提取及其应用无疑具有重要的意义[6，7]。
       我区瓣蕊唐松草资源丰富，以此为原料研制生产的成本较低，可创造经济及社会效益。通过研究，我们发现瓣蕊唐松草根茎含有抗氧化物，提取物的抗氧化作用与提取的溶剂、时间、温度及固液比有关。现将得出的最佳提取方案报道如下。
       1 材料与方法
       1.1 材料实验用瓣蕊唐松草采自内蒙古赤峰市克什克腾旗，采摘后自然凉干，取根茎部分粉碎后保存于阴凉干燥处。总抗氧化能力检测用T-AOC(total antioxidation competence)试剂由南京建成生物工程研究所提供。甲醇、乙醇、醋酸乙酯、正丁醇等均为分析纯。
       主要仪器有721型分光光度计，MP2002型电子分析天平，DK-600型电热恒温培养箱及TDZ4A-W5型离心机等。
       1.2 总抗氧化性的检测方法——T-AOC法浸提物总抗氧化性的检测采用T-AOC法。其原理为：样品中的抗氧化物质，能使Fe3+还原成Fe2+，后者可与非啉类物质形成稳定的橙黄色络合物，通过在520 nm比色可测出其总抗氧化能力的高低。
       1.3 溶剂对瓣蕊唐松草抗氧化物质提取率的影响 用适当的溶剂提取是最常用的提取植物成分的方法。我们用4种不同极性的溶剂分别提取瓣蕊唐松草根茎中的抗氧化物。
       分别称取根茎2.0 g，分别量取10 ml水、甲醇、乙醇、醋酸乙酯和正丁醇，35 ℃恒温培养箱中浸提60 min，6 000 r/min离心10 min，取上清液，4 ℃冰箱内保存。分别取各种上清液1 ml，加1 ml T-AOC试剂Ⅰ，2 ml T-AOC试剂Ⅱ与0.5ml T-AOC试剂Ⅲ，在37 ℃水浴中反应30 min后加试剂Ⅳ终结反应，检测520 nm处的吸光度。
       1.4 浸提时间对抗氧化物质提取率的影响选取最佳溶剂，固液比为1∶5的条件下，分别提取30，45，60，75，90及120 min。6 000 r/min离心10 min，取上清液，定容至25 ml，测1 ml溶液的总抗氧化活性，确定最佳提取时间。
       1.5 浸提温度对抗氧化物质提取率的影响 选取最佳溶剂，固液比为1∶5，最佳提取时间条件下，分别在25，35，45，60，90 ℃时进行浸提。6 000 r/min离心10 min，取上清液，定容至25 ml，测1 ml溶液的总抗氧化活性，确定最佳提取温度。
       1.6 固液比对抗氧化物质提取率的影响选取适当溶剂，在最佳提取温度、时间条件下，分别以1∶ 5，1∶7.5，1∶10，1∶12.5，1∶15的固液比进行提取。6 000 r/min离心10 min，取上清液，定容至25 ml，测1 ml溶液的总抗氧化活性，确定最佳提取固液比。
       1.7 正交实验根据单因素的实验结果设计提取瓣蕊唐松草根茎抗氧化物质的正交表，进行提取正交试验，以达到优化提取条件的目的。
       2 结果
       2.1 溶剂的选择由图1中可见，乙醇、醋酸乙酯提取物的抗氧化作用显著，甲醇提取物抗氧化作用最低。因醋酸乙酯沸点高，后续度增大，故以乙醇作为适合的溶剂进行进一步的提取实验。
       2.2 浸提时间对抗氧化物质提取率的影响由图2可见，20～45 min，吸光值增长显著，45 min后，吸光值增长不再有明显变化 ，所以，提取时间以45 min为佳。
       图1 溶剂对提取物抗 图2 浸提时间对搞氧化性
       氧化性的影响 物质提取率的影响
       2.3 温度对抗氧化物质提取率的影响由图3可见，提取温度从15 ℃升到45 ℃，吸光值增大，当提取温度高于45 ℃时吸光值开始降低，可能温度升高导致溶剂和提取物的极性变化及两者之间亲和力变弱，导致提取率降低，提取物活性下降。因此，提取温度以45 ℃为佳。
       2.4 固液比对抗氧化物质提取率的影响固液比对抗氧化物质提取率的影响结果见图4。由图4可见，固液比在1∶5～1∶10时，吸光值逐渐增大，当固液比小于1∶10时，吸光值开始降低。因此，提取固液比以1∶10为佳。
       图3 温度对抗氧化性物质 图4 固液比对提取物
       提取率的影响 抗氧化性的影响
       2.5 正交实验分别选取最佳时间、温度、固液比及上下各一梯度，乙醇作为溶剂进行正交实验。见表1～2。
       由表2可见，影响提取率的各因素中，影响程度的排序为C>A>B，即温度因素对抗氧化物质的提取影响最大。经计算每个因素水平的K值，综合直观图比较得出，理论上抗氧化物质的最佳提取条件为A3B2C3，即固液比1∶12.5，浸提时间60 min，提取温度为60 ℃。表1 乙醇提取瓣蕊唐松草根茎抗氧化含物正交实验表2 正交实验及结果
       3 结论
       氧自由基和脂质过氧化关系到衰老和许多疾病包括癌、糖尿病、高血压病与高血脂等的病因[8～10]。所以，寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂已成为各国生物、医学工作者共同的目标。
       瓣蕊唐松草作为民间草药，其药理价值逐渐被引起重视。最近的研究发现同属植物具有抗癌，抗凝作用[2，3]，而癌症与体内自由基的产生有密切关系。因此，研究和开发抗氧化剂及防治与自由基有关的疾病有重大意义。
       通过本研究发现，瓣蕊唐松草根茎具有抗氧化性，用乙醇与醋酸乙酯提取时抗氧化性较高;温度因素对其抗氧化性影响很大;以乙醇为提取溶剂，最佳提取条件为固液比1∶12.5，浸提时间60 min、提取温度60 ℃。
       综上所述，瓣蕊唐松草具有抗氧化作用，分布广泛，产量极高，因此进一步加强其抗氧化性和药理研究，使其得到有效的开发和利用，对社会和经济发展具有重大意义和价值。但具体是哪种物质对抗氧化起主要作用，尚需进一步的研究。
       【参考文献】
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