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       【关键词】  支气管哮喘；,,石菖蒲；,,β
       摘要：目的对比研究β、α细辛醚及石菖蒲挥发油对支气管哮喘的药效作用。方法用卵蛋白（OA）雾化吸入致敏法复制豚鼠哮喘模型，造模7 d，再喷雾给药7 d后，喷入OA引喘，记录豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期；利用豚鼠离体气管片，观察记录药物对气管平滑肌的张力的影响。结果β细辛醚、α细辛醚及挥发油都有延长模型豚鼠哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期的作用；均能拮抗组胺和乙酰胆碱松驰豚鼠气管平滑肌。结论β、α细辛醚及挥发油都有一定的抑制模型豚鼠哮喘发作的作用，三者都有对抗组胺或乙酰胆碱所致气管平滑肌收缩的作用。提示β、α细辛醚及石菖蒲挥发油都有一定的平喘作用。
       关键词：支气管哮喘；  石菖蒲；  β细辛醚；  α细辛醚；  豚鼠
       Comparative Investigation on the Drug Effect of βasarone, αasarone and Volatile Oil of  Acorus tatarinowii Schott. on Bronchial Asthma
       LI  Ling，ZOU Yanyan，SHI Chen，WEI Gang，LIN Shuangfeng，FANG Yongqi
       （The First Clinical Medical College of Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China.）
       Abstract：ObjectiveTo investigate and compare the drug effect of βasarone, αasarone and volatile oil of Acorus tatarinowii Schott. on bronchial asthma. MethodsAsthma model in guinea pigs was made by inhalation with ovalbumin. Medication of spray administration was used after 7 days and treatment course was also 7 days. Then asthma was induced and we recorded the falling down latent period of induced asthma. We used the trachea pitches in vitro of guinea pigs to test the drug effect on smooth muscle of trachea. ResultsIt showed that either βasarone, αasarone or volatile oil of  Acorus tatarinowii Schott. could prolong the falling down latent period of induced asthma and could loosen smooth muscle of trachea by antagonizing histamine and acetylcholine. ConclusionEither βasarone, αasarone or volatile oil of  Acorus tatarinowii Schott. can antagonize the outbreak of asthma in guinea pigs model. All three can loosen smooth muscle of trachea by antagonizing histamine and acetylcholine. It shows that all three have asthma-reducing effect to some extent.
       Key words：Bronchial asthma;   Acorus tatarinowii Schott.;  βasarone;  αasarone;   Guinea pigs
   
　　支气管哮喘(bronchial asthma)发作时，患者支气管平滑肌收缩，粘液分泌亢进等，反复发作导致支气管壁增厚、气道广泛狭窄。药物的解痉作用能直接缓解哮喘症状。石菖蒲具有宣窍豁痰、芳香化湿的作用。挥发油是石菖蒲的有效部位，主要有效单体是β细辛醚、α细辛醚等［1］。已有文献报道，α细辛醚具有一定的治疗哮喘的作用［2］。本文对比研究β、α细辛醚及石菖蒲挥发油对支气管哮喘的功效。
       　　1  器材与方法
       1.1  动物 Hartly豚鼠，购自广东省医学实验动物中心，合格证号：2004A023。
       1.2  仪器与试剂 BL310生物机能实验仪（成都泰盟电子有限公司）；AE200电子分析天平（Mettler）；磷酸组织胺，上海生物化学研究所，批号：9110291；氯化乙酰胆碱，上海三爱思试剂有限公司，批号：20030115；卵蛋白（OA），中国医药（集团）上海化学试剂公司，批号：9706；氢氧化铝，广州化学试剂厂，批号：0306012。
       1.3  药物  挥发油：石菖蒲加8倍量水，按《中国药典》Ⅰ部附录挥发油提取法甲法，提取24 h，收集挥发油，加适量吐温，制成水溶液；β细辛醚：取石菖蒲挥发油，用本室方法精制得到β细辛醚（经GC/MS，NMR，IR检测证实，成分为β细辛醚含量达99.55%）。加适量吐温，制成水溶液；地塞米松磷酸钠注射液，广东邦民制药厂有限公司，批号：040205；氨茶碱，天子福国际药业（江苏）有限公司，批号：030121；细辛脑片（α细辛醚），广西亿康药业股份有限公司，批号：030528。
       1.4  分组  在体实验分组：β细辛醚组、α细辛醚组、挥发油组、地塞米松 (阳性对照) 组、模型对照组。体外实验分组：阳性对照组为氨茶碱，其余同在体实验分组。
       1.5  方法
       1.5.1  在体平喘实验（喷雾致喘法）［3］ 豚鼠，体重180~220 g，雌雄各半。动物筛选：将豚鼠分别置于气雾装置内，用4%OA生理盐水溶液进行恒压喷雾引喘，观察豚鼠的哮喘潜伏期（即从喷雾开始到哮喘发作的时间），一般不超过150 s，超过150 s者认为不敏感，不予选用。将预选合格的豚鼠随机分组（见1.4），各组豚鼠于两侧大腿外侧肌内注射4%OA生理盐水0.2 ml，腹腔注射0.5 ml，同时腹腔注射4%氢氧化铝凝胶0.5 ml致敏。致敏第8天开始给药（模型对照组给以等体积生理盐水），给药7 d，Bid。末次给药后0.5 h，各鼠分别放入气雾装置内，按预选时的同样条件喷入OA生理盐水溶液引喘。观察并记录6 min内豚鼠的哮喘发作潜伏期及跌倒潜伏期。
       1.5.2  体外平喘实验（气管片法）［4］  豚鼠50只，体重300~400 g，雌雄各半。豚鼠击毙，立即细心分离出气管，自甲状软骨下至气管分叉处剪下全部气管，放入克-亨氏液内，在气管的腹面（软骨环面）纵行切开，再每隔3个软骨环横切，各段气管片间的纵切口处用线缝上，相互连成一串。将缝好的气管片标本放入盛有克-亨氏液（20 ml）的离体器官浴槽内，下端固定于玻璃通气钩，上端以较长的线连至拉力换能器上（负荷约1 g），以便记录反应。浴槽内温度恒定37℃，并持续供氧。标本平衡30 min，基线平稳后给药，每加一药物接触15 min，观察药物反应并用生物机能实验仪记录张力，然后更换营养液，待基线恢复后，给另一药物。给药步骤为：（1）组胺(His) 造模（0.05 mg・ml1，浴槽内浓度，下同），观察有无收缩反应，确定标本的功能状况。如标本功能正常，记录反应张力。（2）以累积法加入β-细辛醚后（0.016，0.032 ，0.064 mg・ml1），观察记录药物对气管平滑肌的张力。（3） 更换营养液。（4）用乙酰胆碱（Ach，0.1 mg・ml1）代替His造模，重复（1）至（3）步骤。模型对照组在造模后以等体积生理盐水代替待测药物。
       1.6  数据统计学处理用SPSS10.0软件对数据进行t检验。 
       　　2  结果
       2.1  药物对哮喘豚鼠的平喘作用    豚鼠造模后,出现哮喘发作并跌倒，造模成功。β细辛醚、α细辛醚、挥发油及地塞米松各组，均能延长哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期,与模型组比较有显著差异，挥发油拮抗哮喘发作的作用稍弱，与地塞米松组比较有显著性差异。结果见表1。
       表1  药物对豚鼠哮喘发作潜伏期的影响（略）
       与模型对照组比较，1）P<0.05, 2）P<0.01 , 3）P<0.001,与地塞米松组比较，4）P<0.05，n＝10
       2.2  药物对豚鼠离体气管平滑肌的松弛作用    豚鼠离体气管平滑肌加入His造模后张力升高为（1.24±0.68） g，加入Ach造模后升高为（1.58±0.70） g，与空白组比较都有显著性差异(P<0.001)，证明用His或Ach造模成功。加入药物后，各药物组均能松弛气管片平滑肌，与模型对照组比较有显著差异；β细辛醚、α细辛醚、挥发油的松弛气管片平滑肌的作用弱于氨茶碱，与氨茶碱比较有显著差异，因三者较氨茶碱的给药剂量低，本结果并不表示各药物组的药效作用弱于氨茶碱。结果见表2。
       表2  药物对豚鼠离体气管平滑肌的影响（略）
       与模型对照组比较，1）P<0.05, 2）P<0.01 , 3）P<0.001，与氨茶碱组比较，4）P<0.05，5）P<0.01，n＝10
       　　3  讨论
       支气管哮喘是一种临床常见病、多发病。中医认为, 哮喘是宿痰内伏于肺,复加外感、饮食、体虚病后等因素,导致痰阻气道、肺气上逆所致。病发时His通过其特异性的His之H1受体起作用，受体数量增加,致功能相对亢进［5］,故治疗时既要松弛呼吸道平滑肌、抗炎,又要抗过敏，可通过抑制His释放或阻断His与受体结合防治哮喘。近年该病在世界范围内发病率和病死率呈上升趋势,越来越引起国内外的重视，而目前西药主要以抗炎解痉为主,毒副作用较大。中药的治疗作用越来越受到重视。β细辛醚、α细辛醚、石菖蒲挥发油是从中药中提取出来的有效物质.有研究表明，α细辛醚具有很强的药理活性，临床用于治疗哮喘有一定疗效［6］，β细辛醚具有一定的平喘作用［7］， 石菖蒲总挥发油有明显的拮抗气管平滑肌收缩的作用［8］。以往少有对三者治疗哮喘作用的比较研究，本文通过在体动物及离体气管片两种实验模型，对比观察上述药物的作用。在体动物的实验显示，三者干预哮喘豚鼠后，均有延长哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期的作用。β细辛醚与α细辛醚的剂量相当，而作用效果前者好于后者，挥发油的剂量虽然高于β细辛醚与α细辛醚1倍以上，但作用却较后二者弱，可能β细辛醚和α细辛醚的分子量比挥发油小，结构简单，更易于渗透吸收起效，而挥发油中的复杂成分相互作用，使在体动物的整体药效表现不如β-细辛醚和α细辛醚单体。β细辛醚和α细辛醚是顺反异构体，二者的作用效果有一定差异，可能由于药物空间结构不同，对药物的吸收利用有一定的影响。在离体气管片实验中，β细辛醚、α细辛醚和挥发油均能对抗His和Ach引起的离体气管片的痉挛性收缩，没有明显的差异，显示在本实验剂量下三者对离体模型的药效作用基本相当。由于三者与阳性对照药氨茶碱的剂量差异较大，作用明显弱于氨茶碱并不代表药效作用弱，是否存在药效上的差异，我们将做相关的实验进行研究。由于Ach作用于Ｍ受体、His作用于H1受体引起平滑肌收缩,β细辛醚、α细辛醚和挥发油的作用机理如何？是否直接与受体结合或部分阻断Ach及His与受体结合，是否降低Ach及His与受体结合率及兴奋作用，有待今后实验的进一步研究。
       　参考文献：
       ［1］  柯雪红，方永奇.RP-HPLC测定石菖蒲、水菖蒲药材中β细辛醚、α细辛醚的含量［J］.中国中药杂志，2004，29（3）:279.
       ［2］  严  健，徐淑娟，张寿斌.α细辛脑佐治喘息性支气管炎的疗效观察［J］.儿科药学杂志，2002，8(14):52.
       ［3］  陈  奇，邓文龙，张世玮，等.中药药理研究方法学，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，1994：649.
       ［4］  陈  奇，邓文龙，张世玮，等.中药药理研究方法学，第1版［M］.北京：人民卫生出版社,1994:648.
       ［5］  Hey JA , del Prado M, Egan RW, et al. (R)-alpha- methylhistamine augments neural, cholinergic bronchospasm in guinea pigs by histamine H1 receptor activation ［J］. Eur J Pharmacol,1992,211:421.
       ［6］  叶子,张世珍.细辛脑注射液合维生素C治疗儿童支气管哮喘［J］.浙江中西医结合，2004，14（6）:384.
       ［7］  Keller K, Spamolytische wirkung des Isoasaronfreien kalmus ［J］.Planta med, 1985,(1):6.
       ［8］  杨社华,王志旺,胡锦官.石菖蒲及其有效成分对豚鼠气管平滑肌作用的实验研究［J］.甘肃中医学院学报，2003，20（2）：12.
       基金项目：广东省科技计划项目（No.2005B33001014）
       （广州中医药大学第一临床医学院，广东 广州  510405）