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       【摘要】 
       目的探讨银杏叶提取物(EGb)对血管内皮细胞的VCAM-1、ICAM-1表达的影响。方法采用不同浓度的EGb作用于人脐静脉内皮细胞，用酶联免疫细胞化学的方法检测人脐静脉内皮细胞粘附分子的表达。结果与空白对照组相比较，EGb对内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达均有下调作用(P<0.05)。结论EGb对内皮细胞有保护作用。
       【关键词】  银杏叶提取物; 人脐静脉内皮细胞; VCAM-1; ICAM-1
       内皮细胞是内皮下组织与血液携载因素相互作用的结构功能屏障和中介。内皮细胞粘附性的变化，尤其是具有选择性粘附单核细胞作用的粘附分子的异常表达，是动脉粥样硬化(AS)发生发展中的最早期变化，对AS的启动具有决定意义。因此如何控制内皮细胞粘附分子的表达在防止AS发生中是非常重要的。中药银杏叶对血管性疾病有治疗和预防作用[1，2]，对内皮细胞粘附分子的表达是否有影响尚未见文献报道。本文用银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, EGb)作用人脐静脉后检测血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的变化，进一步阐明银杏叶对内皮细胞的保护作用，为临床上用银杏叶防治AS提供理论依据。
       1 材料
       人脐静脉内皮细胞(细胞株E-304，上海细胞所);银杏叶提取物(西安奥晶科技);SABC免疫细胞化学染色试剂盒和VCAM-1、ICAM-1抗体(博士德公司)。
       2 方法
       取银杏叶提取物(EGb)5 mg用50 μl二甲基亚砜溶解，从中抽取10 μl银杏叶提取物溶液放入10 ml无血清1640培养基中，调整银杏叶提取物溶液的浓度为100 mg/L;再取10 μl二甲基亚砜放入10 ml无血清1640培养基中，调整其浓度为0.1%作为对照，两种液体经过过滤除菌后备用。
       将人脐静脉内皮细胞用含10%小牛血清RPMI1640培养基按1×105个/ml培养于96孔培养板中，在37℃5%CO2条件下培养24h后，调整无血清1640银杏叶提取物溶液的浓度，按浓度为100，50，25 ，12.5 mg/L分为1，2，3，4实验组;再分别设立二甲基亚砜对照组，其浓度为0.1%，0.05%，0.025%，0.0125%(与EGb溶解浓度相对应);空白对照组用无血清RPMI1640培养基。以上各实验组、对照组、空白组每组12孔，加入人脐静脉内皮细胞作用18h后全部弃培养液，4%多聚甲醛固定30 min，酶联免疫细胞化学染色。
       将培养的内皮细胞加入0.5%H2O2甲醇阻断内源性过氧化物酶，37℃30 min，加入正常羊血清，37℃20 min，分别入1∶300 VCAM-1和ICAM-1一抗，4℃24 h，生物素化羊抗小鼠免疫IgG, 37℃30 min，SABC,37℃20 min，DAB显色，在室温下，显微镜下控制显色时间，用2 mol/L H2SO4终止反应。用DG5031型酶联免疫检测仪自动测量吸光度值(λ=490 nm)，实验重复3次。所有数据做统计学分析，用t检验。
       3 结果
       银杏叶提取物作用内皮细胞后，对VCAM-1和ICAM-1表达的影响见表1。从表1可以看出对照组所用的二甲基亚砜对VCAM-1和ICAM-1表达有下调作用，但各对照组间不同浓度的二甲基亚砜对VCAM-1和ICAM-1表达与空白对照组相比都无显著性差异(P>0.05)，实验组银杏叶提取物对内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达均有下调作用，各组与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05)，其中50 mg/(2组)和l25 mg/L(3组)下调更明显(P<0.01)。表1 VCAM-1和ICAM-1测定结果
       4 讨论
       内皮细胞粘附分子在内皮细胞受损过程中起重要作用。在正常情况下，内皮细胞表面粘附分子呈现低表达或不表达，当受到过氧化物脂质、内毒素、病毒感染等作用时，内皮细胞粘附分子表达增加，它的高表达可引起一系列与心血管疾病相关的细胞因子的释放，在AS早期形成过程中有重要意义。银杏叶为银杏科落叶乔木银杏的叶，祖国医学认为银杏叶具有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛的功效，用于肺虚咳喘、高血脂、高血压病、冠心病、心绞痛及脑血管痉挛等病症。银杏叶能促进血液循环，降血脂,降血液粘稠,预防心血管病。在实验和临床研究中证实银杏叶对治疗中枢血管性眩晕、2型糖尿病、癫痫、糖尿病性神经病变、老年性或血管性痴呆、老年高血压病等具有实用性价值[3，4]。银杏叶提取物对培养内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达有下调作用，为银杏叶对内皮细胞的保护和心血管疾病的作用提供了新的证据，但在整体水平上对内皮细胞的作用还有待进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 刘军须，张敬各.银杏叶提取物对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用[J]. 中药药理与临床, 2007，3：52.
       
       [2] 沈建颖，孙爱军，张庆华，等.银杏叶提取物GBE50及其主成分总黄酮对缺氧致人脐静脉内皮细胞凋亡及活性氧自由基生成的作用[J].上海医学，2007，S1：173.
       
       [3] 谢丹红，盛志新，孔红娟，等. 银杏叶的临床应用[J]. 中国医院药学杂志， 2007，8：1111.
       
       [4] 裘维焰，魏克民，胡志伟，等.银杏叶口服液治疗缺血性脑血管病临床研究[J].医学研究杂志， 2007，2：114.