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外燥对小鼠气道与大肠功能影响的实验研究
作者:胡利群,丁建中,张六通,王明明,贺尚荣    
作者单位:1.长江大学医学院,湖北 荆州 434023; 2.湖北中医学院,湖北 武汉 430061

《时珍国医国药》 2010年 第5期

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       【摘要】 
       目的观察外燥对小鼠气道与大肠功能的影响。方法120只无特定病原体级(SPF)昆明种小鼠随机分为常温常湿组,常温燥组,温燥组,凉燥组,每组30只。于处理后第6,12,18天检测各组气道液黏多糖(RS)、大肠液黏多糖(CS)与粪便含水率(WF)。结果温燥组第12天,第18天 RS持续下降,凉燥组第12天最为减少(P<0.05);温燥组、凉燥组CS先升高、后持续降低(第18天,P<0.05);温燥组RS与CS呈平行减少。结论外燥可致肺津生成减少与宣输失司;肺气则无津以降,而失舟楫传导之职,肠液分泌减少,其病机主在肺卫,并为研究外燥伤营卫、津血之燥提供基础资料。
       【关键词】  外燥; 气道; 大肠; 黏液分泌
       Effects on Mucus Secretion of Respiratory and Colons of Mice in Outer-Dry
       HU Liqun, DING Jianzhong, ZHANG Liutong, WANG Mingming, HE Shangrong
       (1.Medical Shool of Yangtze University,Jingzhou 434023,China; 2.Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430061,China)
       Abstract:ObjectiveTo investigate the effects on the secretion of respiratory(RS) and  Colons(CS) and the water-ratio of feces(WF) of mice in Outer-Dry.Methods120 kunming mice(SPF) were divided into group A(normal),group B(normal temperature and Outer-Dry),group C(Warm-Dry),group D(Cool-Dry),30 mice/group.RS(μg/ml),CS(μg/ml)and WF(%)were measured on the day 6,12 and 18.ResultsRS in group C reduced on the day 12 and 18, and was reduced in group D on the day 12(P<0.05) CS in group C and D on the day 6 was increased but  decreased on the day 18(P<0.05).ConclusionIn Outer-Dry the mice’secretion of respiratory and intestines are remarkably reduced and injured .
       Key words:Outer-Dry;  Respiratory;  Colons;  Mucus serection
        “诸涩枯涸,干劲皴揭,皆属于燥,”燥气清肃收引,“燥气先伤于华盖”,“燥胜则干”,为描述燥邪病机之经典。课题组报道了外燥可致小鼠气道分泌功能下降[1,2]。为了研究外燥对肺“输布肃降”功能的影响,本次实验在再次观察外燥对小鼠气道分泌功能影响的基础上研究外燥对小鼠大肠功能及粪便含水率的影响,为阐析外燥病机与特点积累资料。
       1  材料
       1.1  动物无特定病原体级(SPF)昆明种小鼠120只,体重(18±1)g,雌雄各半,湖北省实验动物研究中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-2005。
       1.2  仪器与试剂LRH-250人工智能气候箱(温度:30~65℃±1℃,相对湿度:30%~90%±3%,广东医疗器械厂);LG风扇程控仪(MASTER-K30H,韩国),紫外分光光度计(FD-TP40,上海),普通烤箱(上海)。主要试剂:咔唑(054K078,Sigam)、D-葡萄糖醛酸内酯(2711EC,Sigam)、四硼酸钠(上海),其余试剂均为分析纯。
       2  方法
       2.1  120只昆明种小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组、凉燥组,每组30只,分批置人工气候箱内常规饲养,按文献方法模拟外燥“温度-相对湿度-风”综合刺激进行造模。各组小鼠在第6天、12天和第18天分别检测各项目,小鼠实验前4 h常规禁食、禁水。
       2.2  气道液黏多糖测定(RS)咔唑比色法[3]。标本:断颈处死小鼠并暴露气管,从喉头处常规气管插管,缓慢推注37℃预温的生理盐水1 ml,回抽此液,重复2次,离心取上清液当天检测RS。每份标本测定2个稀释度,取均值。用3 mmol/L氯化钠稀释D-葡萄糖醛酸内酯储存液成25~300 μg/ml并制作工作曲线(n=9,r=0.8867)。
       2.3  大肠液黏多糖测定(CS)咔唑比色法。断颈处死小鼠后剖腹,从内直肠处向上剪取结肠6 cm并剖开,连同肠内粪便置5 ml生理盐水中搅匀,离心取上清液当天检测CS。
       2.4  剖取结肠粪便含水率测定(WF)断颈处死小鼠后,剪取结肠,“挤”出肠内成形粪便并称重(湿重),置100℃、2 h后立即称重(干重),重复3次取均值。按公式计算WF(%):
       WF(%)=[剖便湿重(mg)-剖便干重(mg)]/剖便湿重(mg)×100%
       2.5  统计学处理实验数据以±s表示,采用SPSS13.0软件,资料之间比较用ANOVA分析,显著性检验用多个样本均数间q检验(Newman-Keuls法),检验水准为双侧a=0.05。
       3  结果
       3.1  小鼠一般情况随着处理时间的延长,温燥组、凉燥组小鼠饮水量比常温常湿组增加,第12天两组动物活动度下降,毛色较粗糙,温燥组粪便较干燥。处理期间各组动物无死亡。
       3.2  外燥对小鼠气道液黏多糖(RS)的影响结果见表1。表1  外燥对小鼠气道液RS的影响(略)
       3.3  外燥对小鼠大肠黏多糖(CS)与剖便含水率的影响结果见表2。表2  外燥对小鼠大肠液黏多糖(CS)与剖便含水率的影响(略)
       4  讨论
       表1结果显示,与常温常湿组比较,第6天时与燥相关3个组RS均升高。常温燥组第12、第18天时RS升高,提示与保护性反馈有关。值得注意的是,温燥组第6天RS略升高,但第12、第18天呈下降趋势;凉燥组则是第6天略升高,第12天最低(P<0.05),第18天再升高。
        
       常温常湿组CS第6、第12与第18天呈增高趋势。常温燥组第6天CS增高(P<0.01),但随后则降低。温燥组则为“升高-再升高-降低”,凉燥组也呈同样趋势,温燥组、凉燥组第18天CS下降最为显著(P<0.05)。第6、第12天常温常湿组的WF保持稳定,常温燥组、温燥组第6天WF略升高,凉燥组则下降,但第12天则升高;与凉燥组相比,常温燥组、温燥组第12天WF下降(P<0.05)。
        课题组前期研究中发现,温燥组第7、第14天气道液RS连续下降。为了进一步观察其变化特点,本次采用第6、第12、第18天动态观察外燥对小鼠气道液RS的影响,在温燥组中再次呈现“升高-降低-再降低”、凉燥组“升高-降低-再升高”的前期研究结果[1,2]。
       结肠能分泌碱性的黏液以润滑黏膜,其主要功能是吸收水分,储存和排泄粪便,也能吸收葡萄糖、无机盐和部分胆汁酸等。与燥相关的三个组大肠液黏多糖含量是先升高、后下降,第18天温燥组、凉燥组显著降低。我们注意到,温燥组第6天RS升高时,CS也升高;第18天RS下降时,CS也同为下降,提示外燥致肺津生成不足时,也致肺肃降之功能障碍。凉燥组第6天RS与CS均增加,第12天RS下降最为明显,但第18天RS增高之时,CS则下降,其WF也增加,提示凉燥之邪同样可伤肺津生成与肃降功能,其机理与温燥有异[4],并影响大肠分清泌浊之功。
       肺气肃降,“行气于腑”,通调气机,下助大肠润而不燥以传导糟粕。肺主肃降是大肠传导功能之动力,故曰“肺上窍开于鼻,下施于魄门”。而大肠传导正常,腑气通畅,气机调顺,启闭有度,则有助于肺的宣降功能正常。喻嘉言引《内经》“逆秋气则太阴不足,肺气焦滿”之后,提出:“肺气不燥,则诸气禀清肃之令,而周身四达,亦胡致膹郁耶?……肺气逆而喘鸣,食难过膈而呕出,三者皆燥证之极也。”指出了秋、燥、肺三者之间的内在关系,继则燥伤肺胃阴津,少数者邪入下焦耗伤肝肾阴精之症。本次实验条件与结果再次证实,温燥之邪可致气道液分泌障碍而肺津减少,二则卫受邪郁,肺津宣输失司;肺气则无津以降,而失舟楫传导之职,腑气不通,肠液减少而便结,实验结果证实其病机主在肺卫,以“干”为主。本结果为研究外燥伤营卫、津血之燥提供基础资料。  
       本文采用剖取结肠粪便含水率测定法,可作为辅助量化检测大肠分泌功能,更可克服常规方法收集实验小鼠粪便易受环境、条件限制和被污染等困难,方法简便,宜于一般实验室之用。
       【参考文献】
           [1]丁建中,张六通,邱幸凡,等.外燥对小鼠气管上皮纤毛运动与呼吸道液分泌的影响[J].中医杂志,2006,47(8):607.
       
       [2]丁建中,张六通,龚 权,等.温燥致病机制的实验研究[J].中医杂志,2007,48(11):1024,1032.
       
       [3]徐叔云,卞如濂,陈 修.药理学实验方法,第3 版[M].北京:人民卫生出版社,2002,1360.
       
       [4]丁建中,张六通,龚 权,等.凉燥致病机制的实验研究[J].时珍国医国药,2007,18(11):2636.

经典中医古籍

中药学教材(附图片)

穴位数据库(附图片)