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       【摘要】 
       目的观察针刺眼周穴对视网膜静脉阻塞家兔模型血浆纤维蛋白原及分子活性的影响。方法健康家兔32只，分为空白对照组、视网膜静脉阻塞模型组；针刺组、针刺对照组，取“睛明”“承泣”“球后”“攒竹”4穴进行治疗。治疗结束后检测各组家兔血浆纤维蛋白原及分子活性。结果视网膜静脉阻塞家兔模型Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax比值均明显高于空白对照组；针刺组Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax比值较模型组显著减少；而模拟针刺组中，家兔的Fg，FMPV，Amax 和FMPV／A max中，Fg，Amax与针刺组相比有显著性差异，但FMPV和FMPV／Amax则没有明显差异。结论针刺能够明显抑制视网膜静脉阻塞家兔血浆纤维蛋白原分子反应性的增加，对血液的凝聚有一定的改善作用；另外针刺时抓取等动作对家兔也有一定的影响，可能会导致血液功能的改变，这可能与应激刺激有关。
       【关键词】  视网膜静脉阻塞； 血浆纤维蛋白原； 针刺
        视网膜静脉阻塞  (retinalvenous occlusion，RVO)是我国较常见的视网膜血管病，也是致盲的主要眼病之一。纤维蛋白原与视网膜静脉阻塞的相关性研究是近年来引人注目的领域。血浆纤维蛋白原是血中含量丰富的一种糖蛋白，在凝血、止血过程中起到重要的作用。有关纤维蛋白原作为视网膜静脉阻塞的危害因素的理论已被普遍接受。目前在国内外尚未见到针灸疗法对视网膜静脉阻塞血浆蛋白影响的相关报道。为此，项目组通过测定视网膜静脉阻塞加兔模型血浆纤维蛋白原分子活性的改变以及观察针刺对其的影响，现报道如下。
       1  材料
       1.1   动物分组健康纯种新西兰白兔(吉林大学基础医学院动物实验中心提供)32只，雌雄各半，分如下4组，每组平均8只。空白对照组，家兔不作任何处理；视网膜静脉阻塞模型组；视网膜静脉阻塞模型针刺组；视网膜静脉阻塞模型针刺对照组。视网膜静脉阻塞造模后进行模拟针刺（注：模拟针刺指除不将针灸针刺入穴位外，对家兔进行和针刺足一样的抓取动作，其它所有操作均与针刺治疗相同的操作）。
       1.2   家兔视网膜静脉阻塞模型制备依据文献［1］进行模型复制。选健康纯种新西兰白兔，常规眼部检查，排除内外眼病，麻醉动物。先拍摄眼底无赤光像，然后从耳缘静脉注入3 ml 20%的荧光素钠，行荧光素眼底血管造影。放置三面镜，以氩离子激光封闭视盘两侧的视网膜静脉(光斑大小200 μm，功率700～1 000 mW。时间0.5 s)。封闭视网膜静脉后拍摄眼底无赤光像，并再行荧光素眼底血管造影以证实静脉是否完全被封闭。如视网膜静脉未被完全阻断，可再次补作数点激光光凝，术后每日均散瞳详查眼底，同时观察虹膜，详细记录每日观察情况。1个月后再次拍摄眼底无赤光及荧光素眼底血管造影像。
       2  方法
       2.1  家兔视网膜静脉阻塞模型针刺治疗方法治疗组于术后第1天开始，以30号、1寸的针灸针进行治疗，参照《实验针灸学》，取“睛明”“承泣”“球后”“攒竹”4穴，各穴交替使用。睛明、球后、承泣直刺0.5～0.8寸，攒竹斜刺0.3～0.5寸，1次/d，6次为1个疗程，疗程间隔2d，治疗期为4个疗程。
       2.2  血样采集与制备
       采集静脉血，按血液与抗凝剂(0.11 mol／L枸橼酸钠)9∶1制备抗凝血。以3 000 r／min离心血样20 min，取血浆测试，或存储于-20℃备用。血浆在56℃温育15 min，经离心除去沉淀，制成纤维蛋白原血浆。
       2.3  纤维蛋白分子功能测定
       2.3.1  纤维蛋白单体聚合反应速率测定按文献［2］方法操作。用Tris HCl(Tris 0.1 mol／L，聚乙烯二醇6000 25 g／L，CaCl2 5 mol／L，pH7.45)将中国蕲蛇毒按1∶200稀释(终浓度1.25 mg／L)制成反应混合液。在光度计比色皿中(光路1 cm)加50 μl血浆样品，25℃下平衡。加950 μl反应混合液，启动血浆纤维蛋白单体聚合反应，在340 nm观测反应液浊度变化，并将讯号输送到计算机，直观地显示在监视器上。由计算机记录的纤维蛋白单体聚合曲线经设计的软件处理后，自动求出纤维蛋白单体聚合速率(FMPV)，凝固性纤维蛋白原含量A和FMPV／Amax比值。
       2.3.2  纤维蛋白原浓度测定用加样器分别移取950 μl上述反应混合液及50 μl血浆在0.5 cm光路比色杯中充分混合，立即置入分光光度计比色室中(37℃)，在340 nm处监测。微机每隔2 s读取吸光度(ABS)，共测定2 min。每一浓度重复测定3次，取平均值。
       2.3.3  纤维蛋白原功能试验参数纤维蛋白单体聚合速率(FMPV)：是通过分析2 min内对60个点值进行最小二乘法线性回归，其直线斜率反映了纤维蛋白单体聚合速率。FMPV加快，多提示纤维蛋白原功能增强。纤维蛋白原(Fg)：反映可凝Fg含量，Fg与FMPV为正相关。Fg升高提示患者有高凝血。最大光密度(Amax)：即反应终止时的吸光度减去起始时的吸光度。功能指标(FMPV／Amax)：以FMPV与Amax的比值表示，反映血浆Fg分子功能。
       2.4  统计学处理 实验数据以±s表示，统计学分析采用F检验和Q检验。
       3  结果
       各组家兔血浆纤维蛋白分子功能测定结果见表1。表1  各组家兔血浆纤维蛋白分子功能测定结果比较（略）
       由表1可知，视网膜静脉阻塞家兔模型Fg、FMPV，Amax 和FMPV／Amax比值均明显高于空白对照组，尤其FMPV／Amax 比值是反映纤维蛋白原的分子功能的参数，该比值增加，代表纤维蛋白原反应性增强。另外视网膜静脉阻塞家兔模型在针刺后，Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax 比值均显著减少，表示针刺能够明显抑制视网膜静脉阻塞家兔血浆纤维蛋白原分子反应性的增加，对血液的凝聚有一定的改善作用，而模拟针刺组中，家兔的Fg，FMPV，Amax 和FMPV／A max 中，Fg，Amax针刺组相比有相著性差异，但FMPV和FMPV／Amax 则没有明显差异。表明针刺时抓取等动作对加兔也有一定的影响，可能会导致血液功能的改变，这可能与应激刺激有关。
       3  讨论
       视网膜静脉阻塞（RVO），属眼底出血范畴，是最常见的视网膜血管疾病，为眼部的常见病、多发病［5］。其特点是视网膜静脉迂曲扩张，受累静脉有出血，视网膜水肿、渗出［4］。这些病变与中医血瘀证颇为相符［5］。该病病程缓慢冗长，晚期多伴黄斑囊样水肿和新生血管形成，导致视力明显下降，部分患者甚至出现失明等严重症状［3］。中医称为“暴盲”“视瞻昏眇”“云雾移睛”等。唐容川在《血证论》中指出本病是由阳明燥热所发的血证，认为“少阳相火随经脉而出，冲动肝经血分”“太阳经有风热，则大眼角生血筋肉、或微渗血点”。说明眼部出血与三阳经脉痹阻，血溢络外有关。针灸可以治疗多种眼病，其理论基础是中医理论中眼与十二经脉的关系。正如《灵枢·邪气脏腑病形篇》中：“十二经脉，三百六十五络，其血气皆上于面而走空窍”。各种研究也表明，对于眼部疾病，若以缺血为主要病理改变（如动脉阻塞、缺血性视乳头病变），应以针刺以及针刺结合药物治疗，具有良好的疗效。因此也将针灸疗法作为防治因血液循环不良引起的眼部疾病的主要方法之一。
       血浆纤维蛋白原是血中含量丰富的一种糖蛋白，在凝血、止血过程中起到重要的作用。纤维蛋白原与视网膜静脉阻塞的相关性研究是近年来引人注目的领域。有关纤维蛋白原作为视网膜静脉阻塞的危害因素的理论已被普遍接受。血浆纤维蛋白原的增高，还是急性炎症反应的一个重要指标。纤维蛋白原作为急性时相反应蛋白，其水平增高可以严重影响血液凝固和血流变，其降解产物还可以直接损害血管壁［6～8］。在本实验中，家兔进行视网膜静脉阻塞模型制作后，Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax 比值均明显高于空白对照组，尤其FMPV／Amax 比值是反映纤维蛋白原的分子功能的参数，该比值增加，代表纤维蛋白原反应性增强。
       我们此前已经观察到针刺治疗后，眼底出血眶区血流图变化较大，其流入和流出道变通畅，血液灌流和排出量增加，说明针刺可有效地解除血管壁平滑肌的痉挛，恢复血管的舒缩功能，有助于出血、炎症和水肿的消退以及代谢物的传输。还有研究表明针刺可以使微循环的调节发生改变，表现在毛细血管通透性增加，紧张度降低，血流量增加，并且观察到针刺后最早发生的变化是球结膜血流速度加快。这种变化除神经系统参加外，还与体液中的许多活性物质有关。眼血循环的供应主要来自眼动脉，它是由颈内动脉分支而来。
       在本实验中，针刺取穴以眼周局部为主，我们的临床研究已经证明上述穴位可以明显改善眼周局部的血液循环，恢复血管的舒缩功能，加快血流速度，提高血氧含量，有助于出血、炎症和水肿的消退以及代谢物的传输，从而使视神经和视网膜得以滋养［9］。另外视网膜静脉阻塞家兔模型在针刺后，Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax 比值均显著减少，表示针刺能够明显抑制视网膜静脉阻塞家兔血浆纤维蛋白原分子反应性的增加，对血液的凝聚有一定的改善作用，而模拟针刺组中，家兔的Fg，FMPV，Amax 和FMPV／Amax 中，Fg，Amax针刺组相比有显著性差异，但FMPV和FMPV／Amax 则没有明显差异。表明针刺时抓取等动作对家兔也有一定的影响，可能会导致血液功能的改变，这可能与应激刺激有关，在动物实验和模型复制过程中需要引起注意。
       【参考文献】
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