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       【摘要】 
       目的观察白术茯苓汤及其水煎液提取分离组分与组分配伍对脾气虚大鼠VIP受体的调控作用。方法以大黄厚朴枳实加饥饱失常法复制脾气虚证的动物模型，采用ELISA法检测，观察白术茯苓汤水煎液提取分离组分对脾气虚大鼠肠组织VIP受体的影响。结果与模型组比较：①白术茯苓汤组、总多糖高剂量组、白术内酯Ⅲ中剂量组、组分配伍中剂量组能降低VIPR1水平（P<0.05）；络合物高剂量组能显著降低VIPR1水平（P<0.01）。②白术内酯Ⅲ高剂量组、络合物高剂量组、组分配伍中剂量组能降低VIPR2水平（P<0.05）；白术茯苓汤组、总多糖高剂量组、络合物中剂量组能显著降低VIPR2水平（P<0.01）。结论白术茯苓汤及各提取分离组分对VIP受体皆有不同程度地下调作用。
       【关键词】  白术茯苓汤； 提取分离组分； 脾气虚证； VIP受体
        中医脾气虚证与VIP及其受体密切相关。我们前期研究表明白术茯苓汤能下调血管活性肠肽（Vasoactive Intestinal Peptide，VIP）水平［1～4］，近期研究证实白术茯苓水煎液提取分离的总多糖、总络合物、白术内酯Ⅲ亦能明显降低脾气虚大鼠VIP水平（另文发表）。为进一步探索白术茯苓汤及提取分离组分对VIP受体是否具有调节作用，课题组观察了上述组分及组分配伍对脾气虚大鼠VIP 1受体(VIPR1)和VIP2受体(VIPR2 )影响。
       1   材料
       1.1  动物 SPE级SD大鼠90只，体质量（200±20）g，雌雄各半。由成都中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0015593。
       1.2  药材厚朴、枳实、大黄药材购于成都同仁堂，白术、茯苓购于北京本草方源药业有限公司，由成都中医药大学中药鉴定教研室卫莹芳教授鉴定。
       1.3  试剂VIP受体试剂盒由美国adl公司提供。
       2  方法
       2.1  脾气虚模型的建立与分组SD大鼠90只，随机分为15组，每组6只。空白组：生理盐水4 ml灌服，隔日1次，连续42 d；脾气虚证模型组：小承气汤煎液4 ml（1 ml药液含原生药0.25 g）隔日灌胃1次，喂药当日禁食，饮水不限，次日喂饲不限，连续42天，复制脾气虚模型［1］；余为白术茯苓汤组；总多糖高、中、低剂量组；总络合物高、中、低剂量组；白术内酯Ⅲ高、中、低剂量组，上述3组分配伍之高、中、低剂量组，均于第43天分别给予相应浓度药液4 ml，1次d/，连续7 d。
       2.2  供试药物制备
       2.2.1  白术茯苓汤组白术茯苓汤：称取重量为1∶1的白术茯苓生药材饮片，混合浸泡30 min，煎煮30 min，过滤，共煎2次，合并药液，浓缩为1∶1（即1毫升药液含原生药1g）药液, 4℃冰箱保存备用。
       2.2.2  各提取分离组分配制见表1。表1  各组分药液配制浓度表（略）
       2.3  标本采集与处理各组动物在末次给药后禁食24 h，饮水不限。实验时处死大鼠，自距肛门2 cm以上取肠组织1段（300 mg），用PBS液冲洗，剪碎，加入生理盐水1 ml匀浆，加PBS液稀释成1∶10混悬液，4℃ 3 000 r/min离心15 min，取上清液，装于子弹头，-80℃保存，待测肠组织VIP受体。
       2.4  测定采用ELISA法检测，由成都中医药大学实验中心测定。
       2.5  数据统计各组数据均采用±s表示，用SPSS13.0统计软件进行数据处理，单因素方差分析，均数间两两比较。
       3  结果
       3.1  动物造模情况造模后第3天起模型大鼠开始出现饮水减少，糊状稀便，食欲下降，体重下降，倦怠、懒动，喜聚堆等体征；7 d后模型大鼠相继出现嗜卧懒动，大便溏，食欲明显下降，体质量、体温下降，毛色不荣等症状；造模15～20 d大鼠以上症状持续加重；造模35～42 d大鼠饮食量大幅度下降，身体虚弱，毛色晦暗发黄，精神萎靡。
       3.2  各组大鼠血浆及结肠组织VIP受体变化比较见表2。表2  各组VIP受体含量变化的比较（略）
       4  讨论
           
       脾虚证是中医临床的常见证候，病变涉及到消化吸收功能障碍,自主神经功能紊乱，内分泌功能失调，免疫功能低下，以及血液系统,运动系统和能量代谢等方面的诸多异常。其中，脾气虚证内分泌激素尤其是胃肠道激素分泌异常是近年来研究的重要内容［1～5］。已有研究证实脾气虚证时机体胃肠功能呈紊乱状态与脑肠肽的调节密切相关，临床观察到脾气虚证患者血浆及乙状结肠粘膜VIP含量明显增加［6～8］。我们的前期研究也表明脾气虚大鼠血浆和肠组织VIP明显升高［1～4］。本次研究则发现脾虚大鼠尚存在VIP受体水平的升高。可见，VIP及其受体水平的变化可能是中医脾气虚证的基本病理变化之一。
         VIP是肠神经系统中最具代表性和研究得最深入的神经肽，是最重要的脑肠肽和肽类神经递质之一。VIP在体内分布十分广泛，以消化道的分布最为广泛，尤其是结肠和十二指肠含量最多，主要分布在粘膜的内分泌细胞和粘膜下的细微神经纤维、肠肌神经丛。VIP受体是一种与G蛋白偶联的7次跨膜糖蛋白。VIP受体广泛分布于多种组织器官上。根据受体的分布及受体与配体亲和力的差异，将其分为两大类：分别为VIPR1和VIPR2。VIP在消化道的生理作用为松弛消化道平滑肌，刺激肠道及胰腺的分泌，参与调节胃肠运动。VIP需与其受体结合后,通过一系列信号传递途径才能发挥其生理作用［9］。
       白术、茯苓二药配伍应用，始见于《伤寒论》，明代徐春甫用以专治湿泻，并命名为白术茯苓汤而载入《古今医统大全》。脾主运化，其性喜燥恶湿，脾失健运与水湿停滞是脾胃气虚证的主要病理改变。白术苦温，益气健脾而善燥湿,茯苓甘淡而善健脾渗湿,合而用之,一燥一渗,一补一泻，相辅相成，益气健脾除湿，尤能兼顾脾之病理特点，因此白术茯苓汤是古今治疗脾气虚证及脾虚夹湿泻泄的经典小方与常用药对。临床应用也显示以白术、茯苓为主药的健脾除湿方剂治疗一些脾虚湿滞腹泻为主要症状的疾病，如肠易激综合征、功能性消化不良、炎症性肠炎多有效验。
        
       复方配伍规律是方剂理论的核心，也是近年来中医基础理论研究的热点和难点。而中药复方的研发中最为重要的环节是确定该复方中产生药效的物质基础。近年来国内外对复方物质基础的研究多以证候—药效—药化相结合为主要思路，运用植化分离方法对复方中复杂化学物质进行系统提取［10］。本研究根据这一思路和方法方法，以原方剂临床疗效为导向，以中药复杂化学物质基础为研究目标，以药效为标准追踪复方活性部位与有效成分，采用系统溶剂法萃取白术茯苓汤各部位，从白术茯苓汤水煎液提取分离得到白术茯苓总多糖、总络合物、白术内酯Ⅲ。从物质结构特性分析白术内酯Ⅲ是中药白术中萜类内酯的一种，具有抗炎、抑制胃肠运动的药理作用［11］。络合物是本研究首次从白术茯苓汤水煎液中分离得到的化合物，经过结构解析，我们判断主要由5个含镁配合物组成的混合物，表明在复方中存在有由有机成分和微量元素相互作用组成的配合物，这种配合物，既别于有机物，也异于无机物，因为水溶解性好，易被组织吸收而发挥药效。
        
       我们相关实验表明，上述3组分高剂量不仅对脾虚大鼠血浆及肠组织VIP水平均具有不同程度的下调作用，且对肠组织VIPR1和VIPR2水平也均具有不同程度的下调作用（P<0.05，P<0.01）。由此，可初步确定总多糖、总络合物、白术内酯Ⅲ为白术茯苓汤下调脾虚大鼠VIP及受体的有效组分。中医方药对VIP的调控已有大量报道，但对VIP受体的影响尚未见报道。我们研究提示白术茯苓汤治疗脾虚湿滞之泄泻机理不仅与下调VIP有关，还与下调VIP受体水平有关，其治疗效应可能是对VIP及其受体调控的综合效应所致，其物质基础可能与上述3组分有关。3组分中，络合物、白术内酯Ⅲ含量甚微，但其效应显著，提示中药中一些微量成分具有较强的生物活性和药理作用。3组分低剂量时对肠组织VIPR1和VIPR2影响皆不明显，但络合物中剂量对VIPR2的影响反较高剂量更明显，以及白术内酯Ⅲ高剂量对VIPR1的降低没有统计意义，而中剂量对VIPR1的降低反而有统计学意义，需进一步研究探讨。
       【参考文献】
         　［1］贾 波，李小红, 梁 煜, 等.白术茯苓汤对脾虚大鼠胃肠激素的影响［J］.成都中医药大学学报，2001，24（4）：47.
       
       ［2］魏 华，贾 波，文跃强，等. 白术茯苓汤分煎、合煎及醇提对脾虚大鼠血管活性肠肽的比较研究［J］.中药药理与临床，2007，5（7）：65.
       
       ［3］贾 波，刘 岩，张丰华，等. 白术、茯苓、白术茯苓汤对脾虚大鼠VIP及VIPR2的基因表达的影响［J］.四川中医，2008，26（9）：14.
       
       ［4］文跃强，彭 藤，贾 波，等. 白术茯苓汤各萃取部位对脾虚大鼠VIP的影响［J］.江苏中医药，2009，26（5）：356.
       
       ［5］陈天娥, 王秀琴, 张 华, 等.大鼠脾气虚胃溃疡证病结合模型胃肠粘膜局部免疫-神经-内分泌网络的变化［J］.解剖学报, 2003 34（4）：441.
       
       ［6］张忠兵，张学庸，陈希陶，等.脾虚泄泻肠粘膜中SP和VIP初步探讨［J］.中国中西医结合杂志，1991，11（3）：144.
       
       ［7］毛 炯, 李艳嫦, 朱伟淑, 等.脾阴虚与脾气虚血浆血管活性肠肽水平比较研究［J］.中医药学刊, 2003，21（5）：693.
       
       ［8］时 宇, 张启元, 侯 雪, 等. 实验性脾虚动物结肠组织中血管活性肠肽含量的变化［J］.中华消化杂志, 1989，9（3）：174.
       
       ［9］徐 伟,赵亚华,孔 洁.血管活性肠肽研究进展［J］.药物生物技术，2002 ,9 (6) :364.
       
       ［10］王艳萍 ，丰加涛 ，金 郁，等.中药物质基础的研究思路和方法［J］.中国天然药物,2009， 7（1）：13.
       
       ［11］张奕强，许实波，林永成.白术内酯系列物的胃肠抑制作用［J］.中药材,1999，22（12）：636.