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       【摘要】 
       目的探讨鸭掌散传统汤剂中甘草酸的含量是否与方中白果与麻黄有关，为鸭掌散组方提供科学依据。方法对甘草酸含量测定进行方法学考察；将鸭掌散方中的白果及麻黄分别从方中拆除后制备成传统汤剂，并测定其甘草酸含量，对实验数据进行数理统计分析。结果拆方后甘草酸含量经数理统计分析有明显差异。结论鸭掌散传统汤剂中甘草酸含量不受方中白果有无的影响；麻黄的缺失会导致鸭掌散传统汤剂中甘草酸含量显著下降。
       【关键词】  鸭掌散； 甘草酸； 传统汤剂； 颗粒汤剂； 高效液相色谱
       Study on the Influence of Decomposing on the Glycyrrhizic Content of Acid in Yazhangsan
       WU Kongyun， LIANG Guangyi， YANG Na， YE Shiyun， JIN Fengyun， HE Zhuying
       1.The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences, Guiyang 550002, China; 2.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China;3.Guiyang College.,Guiyang 550005, China
       Abstract：ObjectiveTo investigate the relationship between the content of glycyrrhizic acid and Semen Ginkgo and Herba Ephedrae in the traditional decoction, and to provide a scientific basis for the composition of Yazhangsan Decoction. MethodsWe conducted this study by determining the content of glycyrrhizic acid with the treatment of removing Semen Ginkgo or Herba Ephedrae, leaving it as the traditional decoction. After that, we conducted the statistic analysis on the empirical data.ResultsAfter decomposing the recipes, the content of glycyrrhizic acid significantly changed.. ConclusionThe content of glycyrrhizic acid in the traditional decoction is not influenced by Semen Ginkgo, and the contents of glycyrrhizic acid in the traditional decoction is not influenced by Herba Ephedrae.
       Key words：Yazhangsan;   Glycyrrhizic acid;   Traditional decoction;   Granule decoction;   HPLC
       
       鸭掌散出自张时彻《摄生众妙方》，处方由麻黄、甘草、白果组成，主治敛肺定喘，兼化痰等之功效。我们在研究鸭掌散传统汤剂与配方颗粒汤剂中甘草酸含量时，发现其甘草酸的含量有着极显著的差异，鸭掌散汤传统汤剂中甘草酸在一个复方中的量为105.22 mg，而其配方颗粒汤剂中甘草酸在一个复方中的量为116.03 mg。这一结果说明传统汤剂的混煎与配方颗粒汤剂的单煎有着本质区别，表现在一些有效成分含量的差异较大。为了研究鸭掌散中每味药材对甘草酸溶出的影响情况，我们对鸭掌散进行了拆方研究。此工作对阐明复方配伍原理有一定的意义。现报道如下。
       1  仪器与材料
           
       美国惠普HP1100 型高效液相色谱仪，DAD 检测器，HP1100/ WIND3D 化学工作站。 麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎(产地：河北)；白果为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥成熟种子（产地：贵州）; 甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch的干燥的根及根茎(产地：内蒙)。以上3味药材经贵阳中医学院周汉华教授鉴定。甘草酸单铵盐对照品(批号：0731-9704，中国药品生物制品检定所); 甲醇为色谱纯，醋酸胺、冰醋酸为分析纯，水为自制重蒸馏水。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件［1］色谱柱：Diamonisl C18柱 (5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-0.2 mol/L醋酸胺溶液-冰醋酸（67∶33∶1）；流速1 ml/min；检测波长为250 nm。柱温25℃。色谱图见图1。
       2.2  溶液的制备方法
       2.2.1  对照品溶液精密称取甘草酸单铵盐对照品10 mg，置50 ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得甘草酸对照品溶液（每毫升甘草酸单铵盐对照品0.239 2 mg，折合甘草酸为0.221 mg）［2］。
       2.2.2  传统汤剂(传统煎煮法)称取麻黄15.0g，甘草12.0g，白果10个加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min, 倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮两次，20 min/次,合并3次煎液,减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉, 置50 ml量瓶中，用开水溶解定溶至刻度。精密吸取2 ml，置25 ml容量瓶中，加流动相约20 ml，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）20 min，取出，放冷，加流动相定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
       2.2.3  阴性对照液的制备分别按上法制备不含甘草的传统汤剂对照液。
       2.2.4  拆方传统汤剂
        
       缺白果汤剂：称取麻黄15.0 g、甘草12.0 g，加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min, 倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮两次，20 min/次,合并3次煎液,减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉, 置50 ml量瓶中，用开水溶解定溶至刻度。精密吸取2 ml，置25 ml容量瓶中，加流动相约20 ml，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）20 min，取出，放冷，加流动相定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
        
       缺麻黄汤剂：称取甘草12.0 g，取白果10个加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min, 倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮两次，20 min/次,合并3次煎液,减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉, 置50 ml量瓶中，用开水溶解定溶至刻度。精密吸取2 ml，置25 ml容量瓶中，加流动相约20 ml，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）20 min，取出，放冷，加流动相定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
       2.3  线性关系考察标准曲线的绘制：分别精密称取甘草酸单铵盐对照品，用流动相稀释配制浓度分别为0.044 2，0.088 2，0.132 4，0.176 2，0.221 1，0.266 4 mg/ml的甘草酸单铵盐系列对照品溶液，精密吸取甘草酸单铵盐系列对照品溶液10 μl，按上述色谱条件依次测定，以峰面积积分值（A）对进样量（C）进行线性回归，得回归方程：A= 710.033 046 1C +2.966 756 1，r =0.999 9，甘草酸在0.442～2.664 μg间浓度与峰面积的线性关系良好。
       2.4  精密度实验精密吸取同一对照品溶液10 μl，重复进样6次, 测定相应峰面积, RSD = 0.2 %。表明精密度良好。
       2.5  稳定性实验取供试品溶液,分别于0，2，4，6，8 h 测定, 合煎液RSD = 1.1 %; 分煎液RSD = 1.1 %, 表明两种供试品溶液在8 h 内稳定。
       2.6  重复性实验分别取同一样品各6 份,按样品测试条件测定,结果合煎液RSD = 0.4% ,分煎液RSD = 1.2%，重复性好。
       2.7   回收率实验按供试品制备项下制备鸭掌散传统汤剂及其配方颗粒汤剂各9份，精密按表1～2的加入量加入3个不同浓度的甘草酸单铵盐对照品，按上述条件各制备各9份供试液，稀释到25倍进行加样回收，过0.45 μm滤膜，并按色谱条件项下进样，同法测定。结果见表1。表1  传统汤剂甘草酸加样回收率测定结果（略）
       2.8  对鸭掌散复方汤剂进行汤剂的拆方研究［3，4］
       2.8.1  含量测定按上述“2.2”项的制备方法同法平行制备传统汤剂、缺白果汤剂、缺麻黄汤剂各3份。按上述汤剂中甘草酸含量测定方法对3种汤剂（每种3份）进行甘草酸含量测定，记录色谱，分析处理。结果见表2。表2  3种汤剂的甘草酸含量（略）
       2.8.2  数据处理采用DPS进行单因素方差分析，比较传统汤剂、缺白果汤剂、缺麻黄汤剂间甘草酸含量的差异。处理结果见表3～4。表3  方差分析（略）表4  字母标记表示结果（略）
       3  结论
           
       表3中处理间P值为0.0000，说明传统汤剂、缺白果汤剂及缺麻黄汤剂之间甘草酸含量差异及其著性，说明白果及麻黄会影响鸭掌散方中的甘草酸含量。表4进一步说明白果不影响鸭掌散传统汤剂中甘草酸的含量；麻黄在1%水平上对鸭掌散传统汤剂中甘草酸的含量有极显著影响，缺少麻黄会导致甘草酸含量大幅度降低。
        
       实验结果表明，白果不影响鸭掌散传统汤剂中甘草酸的含量，说明甘草与白果中的化学成分在煎煮过程中不会与甘草酸发生化学反应，也不存在助溶和沉淀现象。麻黄极显著地影响鸭掌散传统汤剂中甘草酸的含量，而方中甘草与麻黄中的甘草酸、麻黄碱经我们研究证实，均以盐的形式存在于原药材中，不可能酸碱成盐而溶出。因此，什么原因导致这一结果有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：60.
       
       ［2］孙秀英，黄莉娟.中药甘草化学成分分析［J］.中医药学报，1994，23（5）∶40.
       
       ［3］祈大庆, 胡秀波. HPLC法测定痰咳净片中甘草酸的含量［J］.浙江化工,2005,36(7):33.
       
       ［4］曹佩雪，梁光义,徐必学,等.HPLC法测定麻黄汤分煎及合煎汤剂中甘草酸含量［J］.中草药，2001，32（11）：981.