文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的研究鹅不食草全草的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、AgNO3硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱和葡聚糖凝胶Toyopearl HW-40F凝胶渗透进行分离、纯化。根据理化性质和现代波谱技术并辅以化学方法进行结构鉴定。结果从鹅不食草醇提取物的醋酸乙酯萃取层中得到9个化合物，分别鉴定为蒲公英甾醇（Ⅰ）；β-谷甾醇（Ⅱ）；β-胡萝卜苷（Ⅲ）；2-（1-羟基丙烷）-4-甲酚（Ⅳ）；短叶老鹳草素（Ⅴ）；2β-羟基-2，3-二氢-6-O-当归酰多梗白菜菊素（Ⅵ）；二氢堆心菊灵（Ⅶ）；堆心菊灵（Ⅷ）；豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅸ）。结论化合物Ⅳ、Ⅵ为首次从石胡荽属植物中分离得到。
       【关键词】  鹅不食草； 结构鉴定
       Study on Chemical Constituents from Ethyl Acetate Fraction of Centipeda minima
       WU Hezhen, LIU Yuyan, YANG Yanfang, XIAO Mengyuan
       Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Resource and Compound Prescription (Hubei College of TCM), Ministry of Education, Wuhan 430065，China
       
       Abstract:ObjectiveTo study the chemical constituents of Centipeda minima．MethodsIsolation and purification were carried out by silica gel column chromatography, semi-preparative reversed-phase HPLC and Toyopearl HW-40F. Compounds were identified and elucidated by spectral and chemical methods.ResultsNine compounds were obtained from ethyl acetate extract fraction. Their structures were identified as taraxasterol（Ⅰ）,β-sitosterol（Ⅱ）,β-sitosterylpalmitate（Ⅲ）, 2-（1-hydroxypropan-2-yl）-4-methylphenol（Ⅳ）,Brevilin（Ⅴ）,2β-hydroxyl-2，3-dihydrogen-6-O-angeloplenolin（Ⅵ）,11，13-dihydrohelenalin(Ⅶ),helenalin（Ⅷ）,stigmasterol -3-O-β-D-glucopyranoside（Ⅸ）.ConclusionCompound Ⅳand Ⅵ were isolated from the plants of Centipeda minima for the first time.
       Key words:Centipeda minima (L.) A. Br. et Aschers；  Structure identification
       
       鹅不食草Centipeda minima（L.）A.Br.et Aschers.系菊科(Compositae)石胡荽属植物，为传统中药，收载于《中国药典》2005版Ⅰ部，具有通鼻窍、止咳的功能，用于风寒头痛，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻渊流涕等病症［1］。《中华本草》则记载鹅不食草有祛风通窍，解毒消肿的功效，主治感冒、头痛、鼻渊、风湿痹痛、肿毒等疾患［2］。民间用于治疗百日咳、鼻炎、鼻窦炎［3］、关节扭伤、腰肌劳损、风湿疼痛［4］、偏头痛［5］等。现代药理学研究表明，鹅不食草具有较好的抗炎［6～8］和抗肿瘤活性［9～11］，但其抗肿瘤的物质基础和作用机理尚不明确。为了阐述鹅不食草抗肿瘤作用的物质基础，笔者对其化学成分进行了系统研究，从其抗肿瘤活性部位乙醇提取物的醋酸乙酯萃取层中分离得到9个化合物，运用现代波谱技术分析，确定其结构分别为蒲公英甾醇（Ⅰ）；β-谷甾醇（Ⅱ）；β-胡萝卜苷（Ⅲ）；2-（1-羟基丙烷）-4-甲酚（Ⅳ）；短叶老鹳草素（Ⅴ）；2β-羟基-2，3-二氢-6-O-当归酰多梗白菜菊素（Ⅵ）；二氢堆心菊灵（Ⅶ）；堆心菊灵（Ⅷ）；豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅸ）。其中化合物Ⅳ、Ⅵ为首次从鹅不食草及石胡荽属植物中分离得到。
       1  仪器与材料
           
       XRC-1型显微熔点仪(未校对)； INOVA 600 核磁共振谱仪（美国 Varian 公司）； TRACE MS2000 色谱质谱联用仪（美国热电 FINNIGAN公司）；硅胶为青岛海洋化工厂生产，除提取试剂乙醇为食品级以外，其他所用试剂均为分析纯或化学纯。
        
       鹅不食草药材购自湖北省药材公司，经湖北中医学院生药学教研室陈科力教授鉴定为菊科(Compositae)石胡荽属植物鹅不食草Centipeda minima (L.) A.Br.et Ascher.的全草。药材标本保存在湖北中医学院“中药资源与中药复方”省部共建教育部重点实验室。
       2  提取与分离
           
       鹅不食草干燥药材19.3 kg，适当粉碎，以80%乙醇湿润药材2 d至药材完全浸透。以80%乙醇10倍量渗漉提取，提取液减压浓缩至约5 L，浓缩液依次以石油醚（60～90℃）、醋酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液分别减压回收溶剂得到各浸膏。取醋酸乙酯萃取部分380 g，加入400 g硅胶（100～200目）拌样，充分干燥后采用硅胶柱色谱（2 kg，100～200目）分离，石油醚-丙酮梯度洗脱，以500 ml为一个流分，共收集得到219个流分。TLC检识合并类似流分，共得到Fr.1～Fr.5五个流分段。采用反复硅胶柱色谱以及半制备高效液相色谱、Toyopearl HW-40F凝胶渗透等分离纯化方法，从Fr.1中分离得到化合物Ⅰ，从Fr.2中分离得到化合物Ⅱ、Ⅲ，从Fr.3中分离得到化合物化合物Ⅳ、Ⅴ，从Fr.4中分离得到化合物Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ，从Fr.5中分离得到化合物Ⅸ。
       3  结构鉴定
       3.1  化合物Ⅰ白色无定形粉末（三氯甲烷-甲醇），mp 277～279℃。EI -MS m/z：424。Liebermann-Burchard反应呈阳性。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）高场区域δ  0.6～1.2，显示7个角甲基信号，符合三萜类成分氢谱高场区的信号特征。7个角甲基中，除δ 1.05与δ0.86为双重峰外，其余均为尖锐单峰信号，提示该化合物为乌苏烷型三萜类化合物。δ 4.62处显示一个双键质子信号，表明该化合物具有不饱和基团。13C-NMR图谱中δ 1 54.61与δ 107.12两处信号进一步提示有一个烯键。13C-NMR（150MHz，CDCl3）δ :38.7（C-1），27.9（C-2），79.0（C-3），38.7（C-4），55.3（C-5），16.3（C-6），34.0（C-7），40.9（C-8），50.0（C-9），36.0（C-10），21.3（C-11），25.8（C-12），39.0（C-13），42.3（C-14），27.3（C-15），37.0（C-16），35.2（C-17），47.6（C-18），40.0（C-19），153.6（C-20），25.2（C-21），38.8（C-22），31.0（C-23），15.3（C-24），16.3（C-25），15.8（C-26），12.8（C-27），18.2（C-28），25.0（C-29），107.4（C-30）。其13C-NMR波谱数据与文献［12,13］报道的基本一致，故化合物Ⅰ鉴定为蒲公英甾醇(taraxasterol)。
       3.2  化合物Ⅱ白色针状结晶(三氯甲烷)，mp137～138℃。 Liebermann-Burchard反应紫红色。EI-MS m/z：414。其1H-NMR数据与文献［14］报道的β-谷甾醇完全一致；与β-谷甾醇对照品共硅胶薄层色谱展开比较，两者Rf值以及色谱行为完全一致，混合点样呈现一个斑点。故化合物Ⅱ鉴定为β-谷甾醇（β-sitosterol）。
       3.3  化合物Ⅲ白色片状结晶(甲醇)，mp 298～300℃ 。Libermann-Burchard反应呈阳性，提示可能为甾体类成分；Molish反应阳性，提示分子中含有糖基；经酸水解，用薄层色谱检识苷元，其苷元Rf值与β-谷甾醇相同；经纸色谱检出糖部分显示单一斑点，且Rf值与D-葡萄糖相同。IRυmaxKBr(cm-1)：3 406（br，缔合-OH）， 2 933，2 868，1 463（双键的伸缩振动）。其NMR谱数据与文献［15］报道的β-胡萝卜苷(β-sitosterylpalmitate)基本一致，故化合物Ⅲ鉴定为β-胡萝卜苷(β-sitosterylpalmitate)。
       3.4  化合物Ⅳ黄色浓稠油状液体，易溶于丙酮、甲醇，微溶于氯仿。5%的香草醛-硫酸试液显桃红色。EI-MS m/z：166，结合NMR数据推测该化合物的分子式为C10H14O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.66（1H，s，H-3），6.98（1H，d，J=7.8Hz，H-5），6.60（1H，d，J=7.2 Hz，H-6），2.22(3H，d，C4-CH3) ， 3.73（1H，q，J=6.0 Hz, H-1′a），3.63（1H，q，J=6.6Hz，H-1′b），1.25（3H，d，H-3′）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 155.8（C-1），128.7(C-2)，117.2(C-3) ，137.2(C-4)，121.0(C-5)，128.3(C-6)，20.94(C4-CH3)，68.1(C-1′)，36.8(C-2′)，16.9(C-3′)。采用chemdraw软件模拟化合物Ⅳ的结构，NMR数据与实测值基本一致。综上所述，化合物Ⅳ鉴定为2-（1-羟基丙烷）-4-甲酚［2-（1-hydroxypropan-2-yl）-4-methylphenol］。
       3.5  化合物Ⅴ无色簇状结晶（甲醇）。硫酸-乙醇溶液不显色，茴香醛－浓硫酸显黄色。EI-MS m/z：346［M+］。IRυmaxKBrcm-1：1 704（υc=o），1 777（υc= o），1 228(υo =c- o -c) ，1 148(υo =c- o -c)。其中1 704 cm-1（υc= o）为五元α，β-不饱和酮上的羰基；1 777 cm－1（υc= o）为五元内酯环上的羰基。化合物Ⅴ的NMR波谱数据见表1。其NMR波谱数据与文献［16］报道的基本一致，故化合物Ⅴ鉴定为短叶老鹳草素（Brevilin）。
       3.6  化合物Ⅵ无色簇状结晶（石油醚－醋酸乙酯），由NMR数据及文献［11,16,17］推测分子式为C20H28O6，茴香醛－浓硫酸显色为黄色。1H-NMR图谱中δ:6.06（1H，m，J＝7.2Hz），1.95（3H，dd，J=1.2，7.2 Hz），1.77（3H，d，J＝1.2 Hz）为典型的当归酸的共振信号，H-19受到H-20的高烯丙偶合以及H-18的邻位偶合作用应裂分为双四重峰，但由于仪器分辨率较低，H-19仅显示为双二重峰。分子中δ 5.38（1H，s）归属于6位碳上的质子。δ4.73（1H，t）为8位碳上的质子。δ 1.52（3H，d）、1.21（3H，d）、1.18（3H，s）分别为母核上13、14和15位三个甲基。13C-NMR图谱中δ:217.1、179.2和166.0三处信号提示有三个羰基； 139.5和127.0提示有一个不饱和烯键；73.3、79.4和67.7三处信号提示有三个-C-O-基团。比较化合物Ⅵ和Ⅴ的NMR数据，两者只是在C-1、C-2、C-3的NMR数据有区别，其余数据基本一致，具体数据见表1。采用chemdraw软件模拟化合物Ⅵ的结构，表明C-2上为-OH取代时，模拟的δ值与实测值一致。故化合物Ⅵ鉴定为2β-羟基-2，3-二氢-6-O-当归酰多梗白菜菊素（2β-hydroxyl-2，3-dihydrogen-6-O-angeloplenolin）。化合物Ⅴ、Ⅵ的结构式见图1。表1  化合物Ⅴ和化合物Ⅵ的NMR数据及其归属
       序（略）
       3.7  化合物Ⅶ无色块状结晶（氯仿），茴香醛－浓硫酸显色为黄色。由NMR波谱数据可推测分子式为C15H20O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ: 3.13(1H，dd，J=2.4 ，6.6 Hz，H-1)，7.72(1H，dd，J=1.8，6.0 Hz，H-2), 6.07(1H，dd，J=3.0，6.0 Hz，H-3) ，4.37(1H，br，s，H-6)，2.98(1H，d，J=6.6 Hz，H-7)，4.78(1H，dd，J=4.2，6.0 Hz，H-8) ，2.42(1H，dq，J=2.4，6.0 Hz，H-9α)，1.74(1H，dd，J=1.8，2.4 Hz，H-9β)， 2.17(1H，m，J=2.4，3.6，4.2 Hz，H-10)，3.05(1H，dd ，J=4.8，7.8 Hz，H-11)， 1.36(3H，d，J=7.8 Hz，H-13)，1.21(3H，d，J=3.6 Hz，H-14)，0.98 (3H，s，H-15)。 13C-NMR（150M Hz，CDCl3）δ: 52.1(C-1)，163.8(C-2)，129.6(C-3)，212.8(C-4)，57.5(C-5)，69.1(C-6)，50.9(C-7)，80.0(C-8)，40.4(C-9)，25.7(C-10)，40.2(C-11)，179.1(C-12)，19.7(C-13)，17.9(C-14)，11.4(C-15)。以上波谱数据与文献［18］报道一致，故化合物Ⅶ鉴定为二氢堆心菊灵（11，13-dihydrohelenalin）。
       3.8  化合物Ⅷ无色簇状结晶（石油醚-醋酸乙酯），茴香醛-浓硫酸显色为黄色。由13C-NMR和1H-NMR波谱数据可推测分子式为C15H18O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ: 3.06(1H，dd，H-1)，7.69(1H，dd， H-2), 6.09(1H，dd， H-3) ，4.46(1H，br，s，H-6)，3.56(1H，dd，H-7)，4.99(1H，dd，H-8) ，2.25(1H， H-9α)，1.83(1H，dd，H-9β)， 2.06(1H，m，H-10)， 6.38(2H，H-13)，1.27(3H，H-14)，0.98 (3H，s，H-15)。 13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ: 52.1(C-1)，163.8(C-2)，129.6(C-3)，212.8(C-4)，57.5(C-5)，69.1(C-6)，50.9(C-7)，80.0(C-8)，40.4(C-9)，25.7(C-10)，40.2(C-11)，179.1(C-12)，19.7(C-13)，17.9(C-14)，11.4(C-15)。以上波谱数据与文献［10］ 报道基本一致，故化合物Ⅷ鉴定为堆心菊灵（helenalin）。
       3.9  化合物Ⅸ白色无定形粉末(吡啶)。1H-NMR（600 MHz，C5D5N）δ：5.36（1H，m，H-6），0.68（3H，s，H-18），0.90（3H，s，H-19），1.00（3H，d，J=6.63 Hz，H-21），5.20（1H，m，H-22），5.10（1H，d，J=7.64Hz，C1′-H），4.59～3.97（7H，m，H-3及C2′～6′-H）。13C-NMR（150 MHz，C5D5N）δ：38.1（C-1），30.9（C-2），77.4（C-3），38.8（C-4），139.9（C-5），120.7（C-6），31.0（C-7），33.0（C-8），50.2（C-9），36.3（C-10），22.2（C-11），39.6（C-12），41.3（C-13），55.8（C-14），24.5（C-15），29.1（C-16），55.1（C-17），11.4（C-18），20.1（C-19），41.2（C-20），22.2（C-21），137.7（C-22），128.3（C-23），50.2（C-24），33.0（C-25），18.8（C-26），20.1（C-27），24.5（C-28），11.0（C-29），101.4（C-1′），74.2（C-2′），77.3（C-3′），70.5（C-4′），76.9（C-5′），61.7（C-6′）。其数据与文献［19,20］报道基本一致，故化合物Ⅸ鉴定为豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(stigmasterol -3-O-β-D-glucopyranoside)。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典［S］.北京:化学工业出版社, 2005:241.
       
       ［2］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草,第7册第21卷［M］.上海:上海科学技术出版社,1999:770.
       
       ［3］相鲁闽,刘添秀.石胡荽滴剂治疗鼻窦炎［J］.中国民间疗法,2001,9(8):58.
       
       ［4］卢顺满.石胡荽的药用资源开发应用［J］.时珍国医国药,2005,16(3):260.
       
       ［5］吕善云,于风波. 鹅不食草为主配合西药治疗89例偏头痛［J］.中华综合医学杂志,2001,2(7):640.
       
       ［6］覃仁安,沈映君.鹅不食草挥发油抗炎作用及机理研究［D］.成都:成都中医药大学, 2001.
       
       ［7］覃仁安,陈 敏.鹅不食草挥发油抗炎作用的初步实验报告［J］.贵州医药,2001,25(10):909.
       
       ［8］覃仁安,师晶丽,宛 蕾,等.鹅不食草挥发油对急性肺损伤大鼠支气管上皮细胞CD54表达的影响［J］.中华中医药杂志,2005,20(8):466.
       
       ［9］刘建文.中医药抗肿瘤的药效学基础研究［C］.上海:首届国际中西医肿瘤研究论坛，2008.
       
       ［10］Taylor Robin S.L.,Neil Towers G.H.Antibacterial Constituents of The Nepalese Medicinal Herb,Centipeda minima［J］.Phytochemistry,1998,47(4):631.
       
       ［11］Ferdinand Bohlmann,Chen Zhongliang.New Guaianolides From Centipeda minima［J］.KeXue TongBao,1984,29(7):900.
       
       ［12］于德泉,杨峻山.分析化学手册（第七分册：核磁共振波谱分析）［M］.北京:化学工业出版社, 2000.
       
       ［13］汪六英,段金廒,钱士辉,等.茅苍术化学成分的研究［J］.中草药,2007,38(4):499.
       
       ［14］邹建华,杨峻山.天葵及短瓣金莲花的化学成分研究［D］.北京:中国协和医科大学,中国医学科学院,2004.
       
       ［15］熊 婕，刘焱文.鹅不食草抗肿瘤活性成分及其指纹图谱研究［D］.武汉:湖北中医学院，2007.
       
       ［16］Yu H.W.,Wright C.W., et al.Antiprotozoal Activities of Centipeda minima［J］.Phytotherapy Research, 1994, 8:436.
       
       ［17］Jin-Bin WU, Yui-To CHUN, Yutaka EBIZUKA, and Ushio SANKAWA.Biologically Active Constituents of Centipeda minima:Sesquiterpenes of Potential Antiallergy Activity［J］.Chem.Pharm.Bull, 1991, 39(12):3272.
       
       ［18］蒲首丞,郭远强,高文远.鹅不食草化学成分的研究［J］.中草药,2009,40(3):363.
       
       ［19］苏艳芳,邸利芝,吕 敏,等.花木蓝根的化学成分研究［J］.中草药,2008,39(11):1626.
       
       ［20］肖海涛,李 铣.半枝莲化学成分研究［D］.沈阳:沈阳药科大学, 2006.