高效液相色谱法测定半夏厚朴泡腾片中厚朴酚及和厚朴酚的含量
作者:郑平, 王文忠, 欧英勇, 张广厚, 李婷, 郭伟
《时珍国医国药》 2006年 第11期
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【关键词】 半夏厚朴泡腾片;,,厚朴酚;,,和厚朴酚;,,高效液相色谱
摘要:目的建立半夏厚朴泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚含量的测定方法。方法以依利特C18(4.6 mm × 200 mm,5 μm) 色谱柱分离厚朴酚、和厚朴酚,流动相甲醇 水 乙腈(31.5∶38.5∶30.0),检测波长294 nm。结果线性范围:厚朴酚0.54~13.61 μg,r=0.999 7(n=7),和厚朴酚0.11~2.82 μg,r=0.999 7(n=7)。厚朴酚平均回收率100.92%,SRD=1.79%(n=6),和厚朴酚平均回收率101.23%,RSD=1.79%(n=6)。结论该方法简便易行,稳定性较好。
关键词:半夏厚朴泡腾片; 厚朴酚; 和厚朴酚; 高效液相色谱
Determination of the Content of Magnolol and Honokiol in Banxia Houpu Effervescent Tablets by HPLC
ZHENG Ping,WANG Wen zhong,OU Ying yong,ZHANG Guang hou,LI Ting,GUO Wei
(Department of Pharmaceutical Engineering,School of Biotechonology & Food Science,Tianjin College of Commerce,Tianjin 300134,China)
Abstract:ObjectiveTo establish a method for determining the content of magnolol and honokiol in Banxia Houpu effervescent tablets.MethodsMagnolol and honokiol were separated with Elite C18column(4.6 mm × 200 mm,5μm) and detected at 294 nm, using methanol acetonitrile water(31.5∶38.5∶30.0)as mobile phase.ResultsThe standard curves for magnolol and honokiol were linear in the range of 0.54~13.61μg (r=0.999 7) and 0.11~2.82 μg (r=0.999 7). The average recoveries of magnolol and honokiol were 100.92% (RSD=1.79%) and 101.23% (RSD=1.79%). ConclusionThe method is simple and quick, which is suitable for practical use.
Key words:Banxia Houpu Effervescent Tablets; Magnolol; Honokiol; HPLC
半夏厚朴汤出自汉代张仲景的《金匮要略》,由半夏、厚朴、茯苓、生姜和苏叶5味中药组成,具有行气散结、降逆化痰等功效,原用于治疗梅核气,现临床常用于治疗精神性疾病如抑郁症、焦虑症等[1]。目前半夏厚朴汤临床应用剂型仍为传统的汤剂,患者应用起来有诸多不便。鉴于此将其制成迅速溶解,吸收快、生物利用度高,便于患者服用的口服泡腾片剂型。厚朴系方中君药之一,厚朴酚、和厚朴酚是其主要成分。本文采用高效液相色谱(HPLC)法测定半夏厚朴泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器Agilent 1100高效液相色谱仪,DAD检测器,四元泵,Agilent 1100工作站;Bp211D电子分析天平(德国,sartorius);KQ218型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 试药甲醇(色谱纯,天津光复精细化工研究所),乙腈(色谱纯,天津北联精细化学品开发有限公司),水为重蒸水;厚朴酚、和厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定所);中药材(天津市中药饮片厂);样品(自制)。
2 方法与结果[2,3]
2.1 色谱条件 色谱柱:依利特C18(4.6 mm × 200 mm, 5 μm) ;流动相:甲醇 水 乙腈(31.5∶38.5∶30.0);检测波长:294 nm;流速:1.0 ml・min 1;柱温:25℃。在此条件下,对照品、阴性对照样品、厚朴药材及半夏厚朴泡腾片样品的HPLC图谱见图1。
2.2 线性关系 精密称取厚朴酚对照品17.01 mg、和厚朴酚对照品3.52 mg于同一25 ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容,摇匀。精密吸取0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml对照品溶液,分别加入至5 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得到7组不同浓度的对照品溶液。按上述色谱条件,分别吸取每组对照品溶液20 μl进样,测定峰面积积分值,以峰面积积分值(y)对进样量(μg)(x)进行回归,得回归方程:厚朴酚:y=1152.8x+67.2(r=0.999 7),线性范围为0.54~13.61μg;和厚朴酚:y=1 335.6x+14.9(r=0.999 7),线性范围为0.11~2.82 μg。
2.3 样品测定液的制备 取样品研成细粉,混匀,精密称取1.5 g,置25 ml具塞锥形瓶中,用移液管吸取甲醇25 ml加入具塞锥形瓶中,称定重量,超声处理15 min,放冷至室温,再称定重量,用甲醇补足重量,摇匀。用微孔滤头(45 μm)滤过即得。
2.4 精密度实验精密吸取某一浓度的对照品溶液20μl进样,并连续重复6次,记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值,计算RSD分别为0.92%和1.01%。
2.5 稳定性实验取样品测定液,按0,2,4,8,24 h不同时间间隔进样,测定厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值,计算RSD分别为0.58%和1.64%,结果表明样品测定液中厚朴酚、和厚朴酚在24 h内稳定。
2.6 阴性对照实验 取阴性对照样品(处方中缺厚朴药材,按照半夏厚朴泡腾片制备工艺制备),按样品测定液制备方法制备供试液,进样测定。结果其色谱在厚朴酚、和厚朴酚相应保留时间无峰出现,说明处方中其他成分对测定结果无干扰。
2.7 厚朴药材实验 取厚朴药材研成细粉,按样品测定液的制备方法制备药材供试品溶液。进样测定。
2.8 重复性实验 取同一批样品6份,按上述样品测定液制备方法分别制备供试液,按上述条件测定6次,记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值,计算RSD分别为1.14%和1.62%。
2.9 加样回收率实验 精密吸取已知含量的同一批6份样品测试液0.1 ml,分别精密加入0.1 ml的对照品溶液(厚朴酚:0.628 1 mg・ml 1,和厚朴酚:0.128 7 mg・ml 1),混匀,进样20 μl,测定峰面积积分值,计算回收率。结果见表1~2。
表1 厚朴酚回收率测定结果(略)
2.10 样品测定取3批样品,研细,混匀,分别精密称取1.5 g,按样品测定液的制备方法制备供试液,20 μl进样,测定峰面积积分值。结果见表3。
表2 和厚朴酚回收率测定结果(略)
表3 样品含量测定结果(略)
a 对照品 b 阴性对照 c 厚朴药材 d 和半夏厚朴泡腾片样品
图1 HPLC图谱
3 讨论
3.1 制备测定液时采用了超声提取的方法[3]。为检验该方法的提取效果[4],在按上述方法提取后的残渣中,再加甲醇25 ml,超声处理15 min,过滤,滤液蒸干,加甲醇2 ml溶解,微孔滤头(45 μm)滤过,进样20 μl 。结果其色谱在厚朴酚、和厚朴酚相应保留时间无峰出现,说明样品测定液的制备方法能将样品中的厚朴酚、和厚朴酚基本提取完全,方法简便易行,稳定性较好。
3.2 选择流动相时,参考有关文献[2,3],比较了不同比例的甲醇-水、乙腈 水 冰醋酸、甲醇 水 乙腈等溶剂系统,结果以甲醇 水 乙腈(31.5∶38.5∶30.0)条件下分离效果最好,杂质干扰较小,厚朴酚的保留时间约为23 min,和厚朴酚的保留时间约为15 min。
参考文献:
[1] 丁德正. 半夏厚朴汤在精神疾病中的应用[J].陕西中医,1992,13(9):412.
[2] 国家药典委员会. 中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:176.
[3] 干国平,熊 丽,陆海涛,等. 高效液相色谱法测定香砂养胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中国医院药学杂志,2002,22(12):734.
[4] 周羽琪,章建民,高家鉴. HPLC法测定开胸顺气胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].中成药,2002,24(2):93.
(天津商学院生物技术与食品科学学院制药工程系,天津 300134)