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       【摘要】 
       目的介绍复方岩白菜素缓释片的实验研究。方法对研究结果进行总结。结果复方岩白菜素缓释片制备工艺简单，可减少患者服药次数和给药剂量，具有镇咳、祛痰、平喘作用，且平喘作用优于复方岩白菜素片。结论复方岩白菜素缓释片设计合理，质量稳定，疗效确切，值得进一步研究。
       【关键词】  包合物； 复方岩白菜素缓释片； 药效学； 质量标准； 稳定性实验
        本课题采用包合技术解决岩白菜素溶解度小的问题，并根据普通复方岩白菜素片的用法和用量，应用药动学原理对剂型、剂量、释药时间、释药速率等加以综合设计，进行复方岩白菜素缓释片制备工艺、主要药效学（镇咳、祛痰、平喘作用）试验、急性毒性试验、质量标准的制定及稳定性试验。结果显示，复方岩白菜素缓释片制备工艺简单，可减少患者服药次数和给药剂量，具有镇咳、祛痰、平喘作用，且平喘作用优于复方岩白菜素片。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器ZRS-6型智能溶出实验仪（天津大学无线电厂）；药物稳定性试验仪（天津大学无线电厂）；UV-2450/2550紫外分光光度计（日本岛津）；402AI型超声雾化器（江苏鱼跃医疗设备有限公司）。
       1.2  材料岩白菜素（云南白药集团大理药业有限公司提供，药用，091018，）；扑尔敏（云南白药集团大理药业有限公司提供，药用，081227，）；复方岩白菜素缓释片（大理学院药剂学教研室研制，20070517）；β-环糊精（广东省郁南县环状糊精厂，药用，20050428，）；甲醇（上海化学试剂厂，AR, 071217）；硬脂酸镁（Ms）(怀南山河药业有限公司，药用，20030313）；乳糖（Latose）（上海华茂乳制有限公司，药用，20030902）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na）（西安惠安化学工业有限公司，药用，20030926）；乙醇（EtOH）（浙江遂昌惠康药业有限公司，药用，20090523）；胃蛋白酶（天津市阿托兹医药有限公司，药用， 20050905）；苯酚红（上海试剂三厂，AR，820925）；碳酸氢钠（重庆北碚化学试剂厂，AR，20060121）；氯化铵（西安化学试剂厂，901113；磷酸组织胺（上海丽珠东风生物技术有限公司，20010602；氯化乙酰胆碱（上海试剂三厂，AR，20000420）；小鼠（SPF级昆明种，由四川省人民医院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK(川)2004-15）；豚鼠体重150-250g，由大理学院动物室提供）。
       2  方法与结果
       2.1  岩白菜素-β-环糊精包合物的制备［1］我们采用岩白菜素∶β-环糊精＝1∶12 ，以甲醇为溶剂，用研磨法将岩白菜素制成环糊精包合物，包合物在水中溶解度可提高4～6倍。
       2.2  复方岩白菜素缓释片制备工艺研究根据预试验，影响复方岩白菜素缓释片的因素有4个，每个因素选择3个水平，以2，12 h和24 h的岩白菜素释放量为指标，选用L9（34）正交试验进行处方筛选，实验结果提示：复方岩白菜素缓释片最佳处方由岩白菜素包合物、扑尔敏、Latose、CMC-Na、L-HPC、Ms、EtOH组成，采用湿法制粒压片法制备，片剂质量检查合格，岩白菜素缓释度符合设计要求。
       2.3  复方岩白菜素缓释片稳定性试验根据《中国药典》2005版ⅪⅩC原料药与药物制剂稳定性试验指导原则［2］进行试验。取供试品3批，简单包装，（接近市售包装），在温度为（25±2）℃，相对湿度（60％±10％）的条件下放置12个月。每3个月取样一次，分别于0，3，6，9，12个月取样，考察复方岩白菜素缓释片性状、含量和释放度。结果与0个月比较，以确定供试品的有效期。6个月试验结果显示：复方岩白菜素缓释片性状、含量和释放度与与0个月基本相近，在简单包装的条件下，复方岩白菜素缓释片质量基本稳定，有效期还有待进一步的确定。
       2.4  复方岩白菜素缓释片质量标准研究
       2.4.1  含量测定参照2005版《中国药典》 方法［2～3］进行。取样品药10片，精密称定，研细，过80目筛，精密称取相当于平均片重的药粉置于100 ml的容量瓶中，加甲醇振摇，过滤，精密量取滤液1.0 ml置于100 ml容量瓶中，定容，摇匀，放置10 min后，在275 nm处测定其吸光度，由标准曲线方程求出样品中岩白菜素的含量。实验结果提示：复方岩白菜素缓释片中岩白菜素的含量为164.5～165.8 mg/片，与设计（175 mg/片）相比，含量偏低。可能与测定方法和投料量有关，建议采用高效液相法测定其含量，并且按105％进行投料。
       2.4.2  释放度测定按《中国药典》2005版溶出度测定第一法（转篮法）［2］进行测定。参照溶出度测定法（附录XC第一法），以人工胃液为溶出介质，温度（37±0.5）℃，转速50 r/min，依法操作，经0.5，1，2，4，6，8，10，12，24 h，取溶液10 ml滤过，每次取样后补加溶出介质10ml；精密量取续滤液2 ml置10ml的容量瓶中,用人工胃液定容,摇匀后在275 nm波长测定吸光度。2，12 h和24 h，复方岩白菜素缓释片中岩白菜素释放度分别为标示量的20%～40%和75%～95％，应符合规定。实验结果显示：复方岩白菜素缓释片2h的释放度为39.1%，12 h的释放度为82.5%，24 h的释放度为97.6%，符合设计要求。
       2.5  复方岩白菜素缓释片急性毒性试验
       2.5.1  半数致死量（LD50）测定《中药药理研究方法学》［4］中急性毒性试验方法进行。将60只小鼠随机分成5组，每组12只，雌雄各6只，动物隔夜禁食12 h后分别将浓度为260，182，127.4，89.2，62.4 g/100ml复方岩白菜素缓释片混悬液给不同组别的动物灌胃1次，灌胃剂量为0.25 ml/10g，给药后禁食2 h，然后观察7日内动物反应及死亡情况。结果显示，7日内全部实验动物一般状态良好，无任何毒性反应症状，未见有动物死亡，需进行最大耐受量测定。
       2.5.2  最大耐受量测定方法同半数致死量（LD50）测定。将60只小鼠随机分成5组，每组12只，雌雄各6只，动物隔夜禁食12小时后分别将浓度为62.4，89.2，127.4，182，260 g/100ml，复方岩白菜素缓释片混悬液给不同组别的动物灌胃，灌胃剂量为0.4 ml/10g，2次/d，间隔6 h，等容积，不同浓度，此后观察7 d内动物反应及死亡情况。结果显示：小鼠口服复方岩白菜素缓释片的最大耐受量大于4.16 g/20g（208 g/kg），动物一般状态良好，活动、进食、大小便正常，皮毛均好，无任何毒性反应症状，说明复方岩白菜素缓释片无明显急性毒性作用和其它副作用，是一种安全性较高的制剂。
       2.6  复方岩白菜素缓释片主要药效学试验［4～8］ 
       2.6.1  祛痰实验（小鼠气管酚红法）取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，每组10只，即生理盐水组；氯化铵组（1 000 mg/kg）；复方岩白菜素片组（40 mg/kg）；岩白菜素缓释片低（18mg/kg）、中（36 mg/kg）、高（72 mg/kg）剂量组。各组分别灌胃（i.g.）相应的药物，给药量均为0.2 ml/10g，2次/d，连续7 d，末次给药后30 min，腹腔注射0.5%酚红生理盐水溶液0. 5 ml/只，注射30 min后，处死动物，背位固定，分离气管，用5%NaHCO3溶液lml冲洗气道3次，合并冲洗液于事先装有2 ml 5%NaHCO3的试管内。在546 nm处测吸收值，比较吸光度。实验结果提示，岩白菜素缓释片能增加气管酚红分泌量，具有明显的祛痰作用。其中低剂量组效果显著（P＜0.01），祛痰作用明显高于氯化铵组和复方岩白菜素片组。
       2.6.2  整体引喘实验取健康的豚鼠于实验前4 d分别置于4 L密闭玻璃中罩内，用402AI型超声雾化器喷入0.1%组胺和2%乙酰胆碱等体积混合液，持续15 s，记录“引喘潜伏期”（从喷雾开始至出现惊厥的时间），潜伏期在120 s内为合格的敏感动物。筛选合格的豚鼠48只，随机分为6组，即生理盐水组，氨茶碱组（70 mg/kg），复方岩白菜素片组（40 mg/kg）；岩白菜素缓释片低（18 mg/kg）、中（36 mg/kg）、高（72mg/kg）剂量组。各组分别i.g.相应的药物，给药量均为0.5 ml/100g，2次/d，连续3 d，末次给药后1 h，按前述进行引喘实验，记录“引喘潜伏期”，若超过6 min仍未出现哮喘者以6 min计。结果提示，岩白菜素缓释片能延长“引喘潜伏期”，具有明显的平喘作用，其中低剂量组效果显著（P＜0.01），其平喘作用明显高于氯化铵组。
       3  讨论
        初步研究结果显示，用药剂学的方法和手段，将普通复方岩白菜素片改为复方岩白菜素缓释片，设计合理。复方岩白菜素缓释片是一个安全、有效、质量稳定的制剂，值得进一步深入研究。
       【参考文献】
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       ［4］陈 奇.中药药理研究方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2006：630.
       
       ［5］方春生，王建超，陈 根，等.蓝布正祛痰平喘作用的研究［J］.云南中医中药杂志，2007，28（2）：36.
       
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       ［8］刘晓波，方春生，王成军. 岩白菜素缓释片祛痰平喘作用的实验研究［J］.大理学院学报，2008,7(4): 5.