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       【摘要】 
       目的研究微波炮制方法和传统炮制方法对广西莪术中牻牛儿酮含量的影响。方法采用HPLC法，色谱柱为大连依利特Hypersil ODS2 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：35℃；流动相为乙腈-水（35∶65）；紫外检测波长为210 nm。结果牻牛儿酮在0.095～0.95 μg范围内具有良好的线性关系，r=0.999 9；加样平均回收率101.86%，RSD为2.2%（n=6）；含量测定结果为0.735 6～1.166 mg/g。结论不同的微波炮制热力学参数条件对广西莪术中牻牛儿酮含量有明显影响，选择适当的微波热力学参数的微波炮制品2号与传统炮制方法醋制品中牻牛儿酮含量基本相同，为筛选莪术微波炮制工艺提供了有一定价值的实验参考数据。
       【关键词】  广西莪术； 微波炮制品； 牻牛儿酮； 高效液相色谱法
       广西莪术为姜科植物广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang的干燥块茎，性辛、苦、温，归肝脾经，具有行气破血、消积止痛功能，用于癥瘕痞块，瘀血经闭，食积胀痛，早期宫颈癌，是临床上较为常用的活血化瘀药［1］。近年来研究发现，其挥发油具有抗肿瘤、抗早孕、保肝、抗肝纤维化、抗病毒、抗菌等功用，目前已从中分离出有桉油精、樟脑、异龙脑、β-榄香烯、莪术烯、牻牛儿酮、α-松油醇等三十多种成分［2～4］。本文研究微波炮制方法和传统炮制方法对广西莪术中牻牛儿酮含量的影响。
       1 仪器与试药
           
       Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括：四元泵，真空脱气机，自动进样器，VWD检测器（可变波长检测器），Agilent 1100 LC化学工作站；B3500S-MT型超声波清洗器(上海必能信仪器有限公司)；赛多利斯BP211D电子天平；G80W23YSP-Z型微波炉。乙腈、甲醇为色谱纯（美国Fisher），水为超纯水，其它试剂均为分析纯。牻牛儿酮对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：111665-200401，供含量测定用,含量为94.96%），药材由广西中医学院药用植物教研室王建副教授在南宁郊区五合种植基地提供，经广西中医学院药用植物教研室韦松基教授鉴定为姜科植物广西莪术Curcuma Kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang。
       2 方法与结果
       2.1 样品制备 
       3种传统炮制品的制备均参照《中国药典》2005年版Ⅰ部关于炮制的有关规定及各地炮制规范［2］。生莪术：取药材除去根须杂质，略泡，洗净，切片（3 mm左右），低温干燥。水煮莪术：将净制后莪术加水浸没，煮至透心（恒温100℃，时间20 min），取出放冷，切片（3 mm左右），低温干燥。醋莪术：将净制后莪术加陈醋（100∶20）拌匀浸没，煮至透心（恒温100℃，时间20 min），取出放冷，切片（3 mm左右），低温干燥。微波炮制品1：将净制后莪术约0.7 kg，经微波加热（功率800 W， 频率2 450 MHz，时间6 min），取出放冷，切片（3 mm左右），低温干燥。微波炮制品2：将净制后莪术约0.7kg，经微波加热（功率800 W， 频率2 450 MHz，时间7 min），取出放冷，切片（3 mm左右），低温干燥。微波炮制品3：将净制后莪术约0.7 kg，经微波加热（功率800 W， 频率2 450 MHz，时间8 min），取出放冷，切片（3 mm左右），低温干燥。
       2.2 色谱条件 
       色谱柱为Hypersil ODS2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（35∶65），流速为1.0 ml·min-1；紫外检测波长为210 nm；柱温35℃；进样体积10 μl。
       2.3  对照品溶液的制备
       精密称取牻牛儿酮对照品4.75 mg，用乙醇溶解并定容至10 ml量瓶中，作为储备液。精密吸取1 ml，定容至10 ml，配制成1 ml含0.047 5 mg牻牛儿酮的溶液。
       2.4   供试品溶液的制备 
       称取样品莪术粉末（过2号筛）1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25 ml，密塞，超声处理30 min，放冷，补重，滤过，滤液过0.45 μm滤膜备用。
       2.5   线性关系考察
       分别精密吸取对照品溶液（0.047 5 mg/ml） 2，6，12，14，20 μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积（mAU）对应牻牛儿酮进样量μg（X）进行线性回归，得回归方程Y=3 043.5X+3.196，r=0.999 9（n=6），表明牻牛儿酮在0.095～0.95 μg范围内具有良好的线性关系。
       2.6  精密度实验
       分别精密吸取上述牻牛儿酮对照品溶液10 μl，连续进样6次。测峰面积，结果RSD为0.14%（n=6），表明精密度良好。
       2.7  重复性实验
       按上述样品液溶制备方法和色谱条件，对同一批样品平行实验6份，得平均含量为0.733 7 mg/g，RSD为0.92%（n=6），表明本方法有较好的重复性。
       2.8  稳定性实验
       精密吸取同一供试品10 μl，按上述色谱条件，分别在0，2，4，6，8，12，24 h测定峰面积，结果RSD为1.14%（n=6），表明24 h内稳定。
       2.9  回收率实验
       称取水煮莪术号样品6份各0.5 g，精密称定，精密加入牻牛儿酮对照品（0.475 mg/ml）储备液1 ml。按供试品溶液制备项下操作，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，得平均回收率为101.86%，RSD为2.2%（n=6）。结果见表1。表1  加样回收率考察结果（略）
       2.10  样品测定
       分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。结果见图1。计算含量见表2。表2  广西莪术不同炮制品牻牛儿酮含量（略）
       3  讨论
           
       提取溶剂的选择  分别选用甲醇、乙醇为溶剂，进行超声提取，结果表明两种溶剂的提取含量差异性不大，由于乙醇为无毒性溶剂，故选用乙醇为提取溶剂。
       提取时间的选择：分别进行了超声提取时间15，30，45 min的比较，结果表明30 min和45 min提取含量较高且差异性不大，故选用超声提取30 min。
        
       通过使用HPLC方法对广西莪术的3种传统炮制品和3种微波炮制品中牻牛儿酮含量的测定，实验结果表明不同的炮制方法和不同的微波炮制热力学参数对广西莪术中牻牛儿酮含量有明显的影响，选择适当的微波炮制热参数条件的微波炮制品与传统炮制方法醋制品中牻牛儿酮含量相同，为筛选莪术微波炮制工艺提供了有一定价值的实验参考数据，其药效作用比较有待下一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:194.
       
       ［2］邓家刚,韦松基.广西道地药材［M］.北京：中国中医药出版社，2007:364.
       
       ［3］刘 雯,王 建,张 炜,等.广西不同产地莪术挥发油的含量测定及其GC-MS分析［J］.广西中医学院学报,2006,9(3)：73.
       
       ［4］王 建,刘 雯,张 炜,等.广西不同产地莪术中吉马酮的含量比较［J］.时珍国医国药,2009,20(5):1091.