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       【关键词】  菊花；,,高效液相色谱；,,绿原酸
       摘要：目的对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定绿原酸含量。结果菊花中绿原酸的含量按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验，样品提取方法复杂，含量有损失，误差较大。结论 将含量测定方法改进后，具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠、分离效果好、灵敏度高、稳定性好等优点，为标准的修订提供可行的依据。
       关键词：菊花；  高效液相色谱；  绿原酸
       The Improvement in Assaying of the Chlorogenic Acid in Flos Chrysanthemi by HPLC
       ZHOU Zhixiang，WEI Junde
 
　　(Hongan Hospital of Traditional Chinese Medicine in Hubei Province,  438400,China；Yichang Institute for Drug Control, 443003, China)
       Abstract：ObjectiveTo improve the method for the assaying of the chlorogenic acid in Flos Chrysanthemi. MethodsWith HPLC the chlorogenic acid was determined. ResultsAccording to CH.P(2005) the method is complicated, sample is drawn, the content has losses, the error is relatively great.ConclusionAfter improvement, it is reliable, simple,convenient, accurate, sensitive, stable for extraction, and it can offer a feasible basis for revision of the standard .
       Key words：Flos Chrysanthemi;  HPLC;   Chlorogenic Acid
   
　　菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”。本文分别对亳菊和杭菊进行了含量分析，改进后的方法（第2法）具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠等优特点。
       　　1  器材
       氯仿、磷酸均为分析纯；甲醇、乙腈均为色谱纯；Agilent 1100 HPLC化学工作站；Mettler AE240电子天平；样品由湖北省宜昌市众生医药公司和湖北省红安县中医医院提供，经宜昌市药品检验所鉴定为“杭菊”，湖北某企业提供的菊花经鉴定为“亳菊”；绿原酸对照品（由中检所提供，供含量测定用，批号为110753200212）。
       　　2  方法与结果
       2.1   第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。
       2.1.1  色谱分析条件色谱柱为Nucleosil C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；柱温25℃；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（NaH2PO4・2H2O）15.6 g，加水至1 000 ml，制成0.1 mol/L的溶液，加入磷酸适量，使pH值为2.7］甲醇（70∶30）；检测波长328 nm；进样量20 μl；流速1.0 ml/min；AUFS=0.12s。
       2.1.2  对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
       2.1.3  供试品溶液的制备  取样品粉末（过1号筛）约1 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流2 h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，蒸干，残渣加氯仿5 ml，浸渍3 min，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水适量使溶解，并转移至5 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得（应于当日测定）。
       2.2  第2法（改进后的方法）
       2.2.1  色谱分析条件 流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。
       2.2.2  对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
       2.2.3  供试品溶液的制备 取样品粉末约0.5 g［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
       2.3  系统适应性实验
       2.3.1  第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 4 495，符合《中国药典》规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为 5 753，5 748，5 747，5 750，5 747，RSD= 0.04% (n=5)。2.3.2  第2法（改进后的方法）理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 5 241，符合药典规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为5 908，5 891，5 893，5 889，5 885，RSD=0.15%(n=5)。
       2.4  样品测定结果
       2.4.1  第1法将样品依法处理。结果见表1。
       表1  3批菊花样品的测定结果(略)
       2.4.2  第2法（改进后的方法）将样品依法处理。结果见表2。
       表2  3批菊花样品的测定结果(略)
       2.5  回收率实验(第2法)   精密称取众生药业提供的菊花样品约0.5 g，定量加入适量的绿原酸对照品，下同供试品项下操作，在上述色谱条件下测定，测得平均回收率为99.9%。结果见表3。
       表3   绿原酸回收率实验结果(略)
       　　3  讨论
       3.1  菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，样品溶液的提取比较复杂，含量损失大，特别是从蒸发皿中用水洗涤定容至5 ml量瓶中，误差大， 测出的含量要比实际的含量低。
       3.2  菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，其色谱条件不是很理想，流动相的比例要改为80∶20，效果会更好，特别对质量很差的菊花更要注意。本实验的样品由于湖北某企业贮存时间太长，严重褪色，含量很低。若不改动流动相的比例，则色谱图的分离效果很差。
       3.3   改进后的方法中样品溶液的制备方法简便、损失量少、使得测定的结果更加准确可靠，测出的含量要比第1法高，为标准的修订提供可行的依据。
       （湖北省红安县中医医院  438400；  湖北省宜昌市药品检验所  443003）