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       【摘要】 
       目的测定氯化两面针碱在不同溶剂和表面活性剂溶液中的平衡溶解度以及在正辛醇-水/缓冲液体系中的表观油水分配系数。方法采用高效液相色谱法测定氯化两面针碱在不同溶剂和表面活性剂溶液中的浓度，用摇瓶法测定氯化两面针碱的表观油水分配系数。结果37℃下氯化两面针碱在水、甲醇、无水乙醇、60%乙醇、石油醚中的平衡溶解度分别为363.72 ，1 047.23，301.92，695.62，2.89 mg·L-1，泊洛沙姆188，吐温-80和PEG400对氯化两面针碱有较强的增溶能力；氯化两面针碱表观油水分配系数为54.61。结论氯化两面针碱的水溶解性较差，表面活性剂能提高氯化两面针碱在水中的溶解度。
       【关键词】  氯化两面针碱； 平衡溶解度； 表观油水分配系数
        氯化两面针碱(nitidine chloride)是从芸香科花椒属植物两面针的干燥根中提取的一种生物碱［1］，其原植物两面针 Zanthoxyl  nitidum (Roxb.)Dc．主要分布于广东、广西、云南、福建等南方省份，广西资源尤为丰富。氯化两面针碱（化学结构见图1）是两面针的主要有效成分，分子式为C21H18 O4NCl·2H2O［2］，是两面针及其制剂的主要质量控制指标成分。近年来研究发现两面针碱的抗肿瘤活性较强，在抗肿瘤治疗方面氯化两面针碱具有比较广泛的开发利用价值和应用前景。本实验对氯化两面针碱在不同溶剂中的溶解特性、不同表面活性剂对其增溶情况及表观油水分配系数进行测定，为开发研制氯化两面针碱靶向制剂提供参考。
       1   仪器与试药
       1.1  仪器美国Waters-1525高效液相色谱仪（Waters 1525 binary HPLC Pump；Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector；Breeze3.3工作站）；上海梅特勒-托利多PHS-2C酸度计；德国Eppenndorf 5810R型高速冷冻离心机；美国Thermo Forma orbital shaker-420恒温气浴振荡器。
       1.2  药品与试剂氯化两面针碱原料药（课题组自制，经HPLC检测含量达95%）；氯化两面针碱标准品（中国药品生物制品检定所，批号：070612）；吐温-80（Genebase Gene-Tech. Co，Ltd.，批号：242108）；聚乙二醇400（汕头市西陇化工厂，批号：060723）；泊洛沙姆188（德国SIGMA公司）；胆酸钠（德国SIGMA公司）；脱氧胆酸钠（德国SIGMA公司）；配制溶液所用水均为单蒸水；其余试剂均为分析纯。
       2   方法与结果
       2.1   色谱条件色谱柱为江苏汉邦C18(250 mm×4 mm ,5 μm)；流动相为乙腈∶0.15%磷酸=32∶68；检测波长271 nm；流速1 ml·min-1；柱温30℃；进样量10 μl。在上述色谱条件下，氯化两面针碱保留时间约为6.0 min，柱效不低于5 000。结果见图2。
       2.2 不同溶剂中氯化两面针碱平衡溶解度的测定［3，4］
       2.2.1  标准曲线的制备 
       精密称取干燥至恒重的氯化两面针碱对照品2 mg，置10 ml容量瓶中加甲醇适量，超声溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为200 mg·L -1的贮备液。分别精密量取贮备液适量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，得到1.25，2.50，5.00，12.50，25.00 mg·L -1的标准系列溶液，精密吸取各标准系列溶液10 μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以所得峰面积A对浓度C进行回归分析，得回归方程A=56 548X-2 724.7，r=0.999 5。结果表明，氯化两面针碱在1.25～25.00 mg·L -1内，浓度和峰面积之间呈良好的线性关系。
       2.2.2  供试品溶液的制备 
       配制质量浓度分别为5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，100.0 mg·ml-1的吐温-80、PEG-400、泊洛沙姆188、胆酸钠、去氧胆酸钠系列水溶液。
       2.2.3  平衡溶解度的测定
        
       取过量氯化两面针碱置于具塞玻璃试管中，分别加入水、甲醇、无水乙醇、60%乙醇、石油醚及质量浓度分别为5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，100.0 mg·ml-1的吐温-80、PEG-400、泊洛沙姆188、胆酸钠、去氧胆酸钠系列水溶液，超声至药物不再溶解，放入恒温气浴振荡器中，温度保持为（37±1）℃，振摇24 h。将饱和的氯化两面针碱溶液以10 000 r/min的速度离心10 min，取上清液用甲醇适当稀释后，取10 μl进样，记录峰面积。氯化两面针碱在不同溶剂中的平衡溶解度结果见表1。在37℃条件下氯化两面针碱在各表面活性剂溶液中的平衡溶解度见图3。表1  37℃条件下氯化两面针碱在有机溶剂中的平衡溶解度（略）
        由图3可见37℃条件下，表面活性剂泊洛沙姆 188、吐温 80、PEG 400均能增加氯化两面针碱在水溶液中的溶解度。
       2.3  氯化两面针碱表观油水分配系数的测定［5～7］
       2.3.1  标准曲线的制备
       精密称取干燥至恒重的氯化两面针碱对照品2 mg，置10 ml容量瓶中加甲醇适量，超声溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为200 mg·L-1的贮备液。分别精密量取贮备液适量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，得到0.625，1.25，2.50，5.00，20.00 mg·L-1的标准系列溶液，精密吸取各标准系列溶液 10μl注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以所得峰面积A对浓度C进行回归分析，得回归方程A=57 476X-1 626.2，r=0.999 7。结果表明，氯化两面针碱在0.625～20.00 mg·L-1内，浓度和峰面积之间呈良好的线性关系。
       2.3.2  供试品溶液的制备 
       取适量氯化两面针碱溶解于被水饱和的正辛醇中，制成药物的正辛醇溶液，精密量取该溶液1 ml置于具塞试管中，再分别加入被正辛醇饱和的水，pH值为1.2的盐酸溶液、pH值为3.0，5. 0，6. 8，7. 4的磷酸盐缓冲液1 ml。
       2.3.3  表观油水分配系数的测定 
       将上述配制好的样品放入恒温气浴振荡器中，温度保持(37±1)℃，振摇 24 h，样品以10 000 r/ min速度离心10 min，取下层水溶液10 μl进样（超过线性范围的样品用甲醇稀释），记录峰面积。将药物的正辛醇溶液用甲醇适当稀释，取10 μl进样，记录峰面积。氯化两面针碱的油水分配系数计算公式如下：
        Papp = (C0V0-CwVw) ／ CwVw
       
       上式中Papp为氯化两面针碱的表观油水分配系数，C0为氯化两面针碱在正辛醇中的初始浓度，Cw 为药物分配平衡时在水相中测得的氯化两面针碱浓度，V0为正辛醇溶液的体积，Vw为水溶液的体积。
        氯化两面针碱在正辛醇-水中的分配系数为 54.61，在pH1.0盐酸溶液中的表观分配系数为14.92，在系列磷酸盐缓冲溶液中随着pH值的增加，其分配系数也增大。正辛醇/缓冲液分配系数受缓冲液pH值影响较大。结果见图4。
       3  讨论
        本文建立了HPLC方法测定氯化两面针碱浓度的方法，实验结果表明，该方法操作简单、精密度好、准确度高，能灵敏快速的检测样品中氯化两面针碱的含量。
        本文采用摇瓶法测定药物在油/水相中的分配系数，在测定分配系数前，应使正辛醇和水相互饱和，静置分层后两相分离，保存备用。平衡时间以药物在水相中达到平衡的时间来计。测定药物的分配系数时，选择油相和水相不互溶的有机溶剂，在处方设计中油相多选用正辛醇，因为其溶解度参数与生物膜整体的溶解度参数很接近，目前文献［8～10］也多以正辛醇作为有机相。
       
       本实验考察了5种表面活性剂对氯化两面针碱的增溶效果，发现泊洛沙姆 188、吐温 80、PEG 400具有增溶效果，其中PEG 400的增溶幅度最大，可考虑将其用于氯化两面针碱制剂处方溶出介质。
        氯化两面针碱的水溶性较差，表观油水分配系数为54.61，在pH1.0盐酸溶液中的表观分配系数为14.92，在系列磷酸盐缓冲溶液中随着pH值的增加，其分配系数也增加。
        测定氯化两面针碱在常见有机溶剂中的平衡溶解度，不仅可以为氯化两面针碱新剂型的工艺研究提供帮助，还可以为氯化两面针碱的提取、纯化、生物样品预处理等研究提供参考。
       【参考文献】
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