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       【关键词】  21味寒水石散；,,没食子酸；,,含量测定；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定21味寒水石散中没食子酸的含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇水（5∶95）为流动相，检测波长为274 nm。结果线性范围0.020 6～0.247 2 μg，平均回收率为99.1%，RSD=1.3% (n=9)。结论该方法简便、准确，提供了21味寒水石散中没食子酸的质量控制方法。
       关键词：21味寒水石散；  没食子酸；  含量测定；  高效液相色谱法
       Determination of Gallic Acid in 21component Hanshuishi  Powder by HPLC
       LIANG Yongxin，LIN Pengcheng
       (Chemistry Department of Qinghai Nationalities College, Xi"ning 810007,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a quantitative method to determine the content of gallic acid in 21component Hanshuishi Powder. MethodsThe content of gallic acid in 21component Hanshuishi powder was determined by HPLC. The separation was performed on Kromasil C18 column with a mobile phase of methanol-water (5∶95) and detected at wavelength of 274 nm.ResultsThe linearity of the method was good at range of 0.020 6～0.247 2 μg and the average recovery of gallic acid was 99.1%,RSD was 1.3%.ConclusionThe method is convenient, accurate, and can be used for the determination of gallic acid in 21component Hanshuishi Powder.
       Key words：21component Hanshuishi powder;   Gallic acid;   Assay;  HPLC
   
　　21味寒水石散为一藏药，藏药名为“木布玉杰日布”。主要有寒水石（奶制）、诃子、余甘子、藏木香、木香、木瓜等21味药材组成，具有制酸，止痛之功效。主要用于培根木布引起的呕吐酸水，胃部刺痛，大便干燥等症［1］。没食子酸又称五倍子酸，在藏药材诃子、毛诃子、余甘子等中含量丰富，其在21味寒水石散中的含量测定未见报道。没食子酸含量测定方法有光谱法［2］、比色法［3］、薄层色谱(TLC)［4］和HPLC法［5］等，本文采用高效液相色谱(HPLC)法，制定出该制剂中没食子酸的含量测定方法。
       　1  仪器与试药
       1.1  仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent 1100色谱工作站；Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特科学仪器有限公司）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）。
       1.2  试药甲醇（色谱纯）；没食子酸对照品（由中国科学院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员提供，经归一化检测，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏医院）。
       　　2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成20.6 μg/ml的对照品溶液。
       2.2  供试品溶液的制备精密称取样品2.0 g，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声提取1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，过滤，弃去初滤液，续滤液过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液。
       2.3  空白样品溶液的制备将处方中含没食子酸的药材如诃子、余甘子等去除后，按供试品溶液的制备方法制备。
       2.4  色谱条件  色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：甲醇水（5∶95）；流速：1.0 ml/min；检测波长：274 nm；柱温：30℃；进样量：5 μl。在此条件下，没食子酸与其它峰分离效果较好，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而空白溶液则无相应的峰，证明空白样品不干扰，含量测定专属。结果见图1~3。
       2.5  线性关系实验精密吸取对照品溶液1，3，6，10，12，15，18 μl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，没食子酸进样量（μg）为横坐标，回归方程为：Y＝9 219X+6.051，相关系数r＝0.999 7。结果表明，没食子酸在0.020 6～0.247 2 μg之间呈良好的线性。
       2.6  精密度实验取对照品溶液5 μl，重复进样6次，根据测得的峰面积积分值计算，RSD为1.0％。
       图1  对照品HPLC色谱图(1.没食子酸) (略)
       图2  样品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略)
       2.7  重复性实验精密称取样品2.0 g，共6份，按2.2所述方法处理，按上述色谱条件进样测定，结果重现性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.9％。
       2.8  稳定性实验 按2.2所述方法处理样品1份，按上述色谱条件测定，间隔2 h/次，结果12 h内稳定性良好。
       图3  空白样品HPLC色谱图(略)
       2.9  回收率实验 取样品约2.0 g（n=9），精密称定，加入一定量的没食子酸对照品。按2.2所述方法处理并依法测定，计算回收率结果。见表1。
       表1  回收率实验结果(略)
       2.10  样品测定取3批成药样品，按2.2所述方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，按外标法以峰面积积分值计算，求得样品中没食子酸的含量（每批样品测3次取平均值）分别为0.074％、0.073％和0.073％。
       　　3  讨论
       3.1  检测波长确定  对没食子酸对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描，测得其在220 nm和274 nm有最大吸收，比较相同条件下样品于220 nm和274 nm波长下的色谱图，检测波长为274 nm的色谱图，分离效果好，且杂质干扰少，因此，采用274 nm为检测波长。
       3.2  提取方法确定  比较了不同提取方法对提取率的影响，考虑提取时间和方法的简便性，采用超声1 h提取。
       3.3  流动相选择   以甲醇水系统为流动相进样色谱分析，经试验研究表明，甲醇水比例为5∶95时，样品峰不拖尾，分离较好。
       3.4  本法测定藏药21味寒水石散中没食子酸的含量，分离度好，具有简便、快速、重现性好等优点。可作为21味寒水石散中没食子酸含量测定的常规方法。
       　　参考文献：
       ［1］  中华人民共和国卫生部药典委员会. 卫生部药品标准・藏药，第1册［S］.1995：139.
       ［2］  沙东旭，徐缓绪.叶下珠化学成分的研究［J］.沈阳药科大学学报，2000，17（3）：176.
       ［3］  熊皓平，杨伟丽，张友胜，等.显齿蛇葡萄多酚含量测定方法的比较研究［J］.湖南农业大学学报，2001，27（5）：381.
       ［4］  李爱群，蔡葵花，林  励.薄层色谱法测定利喉乐含片中没食子酸的含量［J］.分析测试学报，1999，18（1）：64.
       ［5］  胡晓伟，宋旭峰.RPHPLC法测定柿蒂中没食子酸的含量［J］.中国药事，2003，17（6）：371.
       (青海民族学院化学系，青海 西宁  810007)