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       【摘要】 
       目的研究苜蓿总皂苷提取物对大鼠的长期毒性。方法苜蓿总皂苷提取物7.2，5.0，2.8 g·kg-1，相当药效学有效剂量(0.35 g·kg-1为中剂量)的20，16，8倍，连续对大鼠灌胃给药27周。给药14，27周及停药4周后，经检查动物的一般状态、血液学、血液生化学指标及主要脏器组织。结果苜蓿总皂苷提取物对大鼠的一般状况、血常规、血液生化指标、主要脏器系数、重要脏器组织结构等无明显影响。停药4周后检测上述各指标均未见明显异常。与空白对照组比较各给药组大鼠未见与药物相关的明显异常。结论大鼠长期毒性实验表明，苜蓿总皂苷提取物在2.8～7.2g·kg-1属于安全剂量范围。
       【关键词】  苜蓿总皂苷提取物； 大鼠； 长期毒性实验
        苜蓿为豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。苜蓿总皂苷提取物不仅对于高脂血症有治疗作用，且由于毒性低微，还可以作为中老年人长期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代谢紊乱和抗动脉粥样硬化方面有其独到之处。本实验主要进行苜蓿总皂苷提取物的长期毒性研究，为该新药的临床试验提供实验依据。
       1  材料与仪器
       1.1  受试药物苜蓿总皂苷提取物，批号060828，061010，由广东省中山市中健药物研究所有限公司提供。用蒸馏水配制成36%，25%，14%的溶液，分别作为高、中、低剂量组，4 ℃保存备用。
       1.2  试剂血液学检测试剂盒由济南希森美康医用电子有限公司提供，批号G7215；血液生化检测试剂盒，K，Na，Cl试剂盒由湖北中医学院药剂科自制；TCHOL(批号：70314B011)、TG(批号：2008030079)、ALP(批号：70420C021)、AST(批号：70409C024)、ALT(批号：70409C011)、TP(批号：080531)、ALB(批号：080531)、TBIL(批号：70314B023)、GLU(批号：70123L021)、BUN(批号：7031913011)、Cr(批号：2008010027)、Cr(批号：2008010027)、CK(批号：70424A211)均由北京利德曼生化技术有限公司提供。
       1.3   动物Wistar大鼠，雌雄各半，体质量90～110 g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，合格证号：SCXK(鄂)2004-0007。各组动物雌雄分笼饲养，每笼5只。适应性喂养1周，观察动物健康正常可进行实验。
       
       动物饲料：纯系鼠料，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，主要成分：水分9.7%，灰分8.5%，氨基酸14.1%，粗蛋白20.3%，粗脂肪4.1%，粗纤维4.7%，钙1.2%。
        动物饲养条件：室温20～25℃，湿度40%～60%，笼具及垫料定期清洗更换。
       1.4  仪器BC-3000血液分析仪，日本产；TBA-120生化分析仪，日本东芝公司产品；SE20203A1型电子天平，美国产；TB-718E组织自动包埋机，湖北泰维医疗科技有限公司提供；TC-120S组织自动脱水机，湖北泰维医疗科技有限公司提供；RM2135石蜡切片机，德国Leica公司产品；HM525冰冻切片机，德国Microm公司产品；数码显微系统，宁波舜宇仪器公司产品。
       2  方法［1,2］
       2.1  剂量设计本品大鼠灌胃最大耐受量为14.4 g·kg-1，为药效学有效量41倍以上，药效学最小有效剂量为0.35 g·kg-1；综合药效及急毒试验剂量，并经预试验，确定大鼠长期毒性高剂量组为7.2 g·kg-1，中剂量组为5.0 g·kg-1，低剂量组为2.8 g·kg-1。
       2.2  动物分组及给药方法取Wistar大鼠120只，按体质量随机分为4组，每组30只。苜蓿总皂苷提取物高、中、低剂量组，剂量分别为7.2，5.0，2.8 g·kg-1，给药体积均为10 ml·kg-1；空白对照组，灌服等体积的蒸馏水。定时灌胃2次/d，给药6 d/周。于第14周各组随机处死6只动物，第27周各组随机处死14只动物，余10只动物停药4周，观察恢复期情况，并于停药第4周末处死。
       2.3  检测指标检测指标及时间见表1。表1  检测指标及时间(略)
       3  结果
       3.1  对大鼠一般状况及体质量的影响各组动物无一死亡，生长发育良好，外观正常，皮毛润泽，行为活动无异常，大小便正常，眼、鼻无异常分泌物，粘膜无充血，饮食正常。停药4周后无异常表现。各组随着实验时间延长，体质量逐周增加，经统计分析增长过程，各组间无统计学差异；给药14，27周及停药4周，各给药组大鼠的进食量与空白对照组比较未见显著差异。结果见表2～5。表2  苜蓿总皂苷提取物对雄性大鼠体质量的影响(略)表3  苜蓿总皂苷提取物对雌性大鼠体质量的影响(略)表4  苜蓿总皂苷提取物对雄性大鼠进食量的影响(略)表5  苜蓿总皂苷提取物对雌性大鼠进食量的影响(略)
       3.2  血液学检查给药14，27周及停药4周，各项指标均在正常值范围内，给药组与空白对照组比较无显著性差异。结果见表6～8。表6  苜蓿总皂苷提取物对给药14周大鼠血液学指标的影响(略)表7  苜蓿总皂苷提取物对给药27周大鼠血液学指标的影响(略)表8  苜蓿总皂苷提取物对给药14周大鼠血液学指标的影响(略)
       3.3  血液生化检查给药14、27周及停药4周，各组动物血液生化检测均在正常值范围内，组间比较无显著性差异。结果见表9～11。表9  苜蓿总皂苷提取物对给药14周大鼠血液学指标的影响(略)表10  苜蓿总皂苷提取物对给药27周大鼠血液生化指标的影响(略)表11  苜蓿总皂苷提取物对恢复期大鼠血液生化指标的影响(略)
       3.4  脏器重量及脏器系数的检查系统尸体解剖，各脏器的形态、大小、颜色均未发现肉眼可见的变化。给药14，27周及停药4周，各给药组动物的重要器官的脏器系数与空白对照组比较无统计学差异。结果见表12～17。表12  苜蓿总皂苷提取物对给药14周雄性大鼠脏器系数的影响(略)表13  苜蓿总皂苷提取物对给药27周雄性大鼠脏器系数的影响(略)表14  苜蓿总皂苷提取物对恢复期雄性大鼠脏器系数的影响(略) 表15  苜蓿总皂苷提取物对给药14周雌性大鼠脏器系数的影响(略) 表16  苜蓿总皂苷提取物对给药27周雌性大鼠脏器系数的影响(略) 表17  苜蓿总皂苷提取物对给药27周雌性大鼠脏器系数的影响(略)
       3.5  病理组织学观察［3］病理检查结果显示，本品给药13，26周，各给药组大鼠的主要脏器组织心、肝、脾、肺、肾、脑（大脑、小脑、脑干）、垂体、脊髓（颈、胸、腰段）、骨髓、肾上腺、甲状腺、甲状腺旁腺、胸腺、唾液腺、食管、气管、主动脉、胃肠（大肠、小肠）、胰、膀胱、子宫、卵巢、淋巴结、坐骨神经、乳腺、睾丸、附睾、前列腺等脏器的肉眼和组织学检查未见明显的与受试物相关的病理性损伤；停药4周后，未见迟发性病理性改变，与对照组比较无显著性差异。
       4  讨论
        苜蓿总皂苷提取物以7.2，5.0，2.8 g·kg- 1的剂量，连续灌胃给药14，27周，相当于药效学有效剂量的(0.35 g·kg- 1为中剂量)20，16和8倍，对大鼠的一般状况、血常规、血液生化指标、主要脏器系数、重要脏器组织结构等无明显影响。停药4周后检测上述各指标均未见明显异常。大鼠长期毒性试验表明，苜蓿总皂苷提取物在2.8～7.2 g·kg- 1属于安全剂量范围。
       【参考文献】
         　　［1］中国国家食品药品监督管理局.中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则［S］.2005.
       
       ［2］国家食品药品监督管理局.中药新药研究指南［S］.2004:123.
       
       ［3］张玉军,陈 英.抗菌消炎片对大鼠长期毒性的研究［J］.中国药房,2008, 19(21):1612.