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       【摘要】 
       目的建立蒲公英中阿魏酸含量的测定方法。方法色谱柱为Hypersil ODS2 C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，检测波长为322 nm。结果阿魏酸在0.019 24～0.240 5 μg范围内峰面积与进样量呈良好线性关系（r =0.999 9），平均加样回收率为98.60%。结论该方法简便、准确、专属性强、重复性好，可作为蒲公英的质量控制标准。
       【关键词】  蒲公英； 阿魏酸
        蒲公英为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand．-Mazz．碱地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag．或同属数种植物的干燥全草，具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效。临床用于乳痈、瘰疬、目赤、咽痛、肺痈、肠痈、热淋涩痛等症［1］。蒲公英中含有多种成分，主要有倍半萜烯内酯、三萜类、酚酸类、黄酮类、类固醇等，而其中以咖啡酸、绿原酸、阿魏酸为主的酚酸类化合物含量最丰富。药理研究表明阿魏酸具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗突变、抗血小板凝集和血栓、增加免疫功能等作用 ［2］。但有关蒲公英中阿魏酸的含量测定，研究报道较少。本实验采用RP-HPLC法对蒲公英中阿魏酸进行含量测定，以期为蒲公英药材及中成药制剂的质量控制提供依据。
       1  仪器与试药
       DIONEX 高效液相色谱仪包括DIONEX P-680泵、ASI-100自动进样器、PDA-100检测器、CHROMELON工作站(美国DIONEX公司)；YUPING FA2004b型电子天平（上海越平科学仪器有限公司）；LDZA-0.8型低速自动平衡微型离心机（北京医用离心机厂）。
       
       阿魏酸对照品(批号：0773-9809)中国药品生物制品检定所提供。蒲公英药材为2009-04采集于河南省内不同地区，经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.的干燥全草。甲醇为色谱纯(天津四友)，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为Hypersil ODS2  C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，(大连依利特科学仪器有限公司)；流动相为甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)；流速1.0 ml/min；检测波长322 nm；柱温30 ℃；进样量：10 μl。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品1.202 5 mg于5 ml容量瓶中,用70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置25 ml量瓶中，加70%的甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含阿魏酸9.62 μg）。对照品色谱图见图 1。
       2.3  供试品溶液的制备取本品粗粉1 g，精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中,加1% NaOH溶液20 ml,密塞，摇匀，避光，放置48 h。离心，取上清液，用1 mol/L的盐酸调pH 3～5，有沉淀生成。离心，取上清液，用乙醚萃取3次，每次10 ml。干燥沉淀，加乙醚振摇3次，每次10 ml，滤过，合并滤液，避光，低温干燥，用70%甲醇定容至10 ml，过0.45 μm的滤膜，即得。供试品色谱图见图2。
       2.4  线性关系考察 取上述对照品溶液，分别进样 2，5，10，15，20，25 μl测定阿魏酸的峰面积，以阿魏酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=121.68X-0.68,r=0.999 9，阿魏酸在0.019 24～0.240 5 μg范围内具有良好的线性关系。
       2.5  精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样6次，记录峰面积。结果阿魏酸峰面积的RSD为1.35%，表明精密度良好。
       2.6  重复性实验称取同一产地的蒲公英药材粉末6份，每份1 g，精密称定，按“2.3”项下的方法制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得样品中阿魏酸峰面积的RSD为1.60%。
       2.7  稳定性实验按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，于0，2，4，6，8，12 h分别进样10 μl，依照上述选择的色谱条件测定，结果阿魏酸峰面积的RSD为1.30%，表明样品在室温下12 h内稳定。
       2.8  加样回收率实验精密称取样品1 g，共6份，各精密加入阿魏酸对照品溶液适量，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表 1。表1  蒲公英中阿魏酸的加样回收率测定结果（略）
       2.9  样品的含量测定精密称取河南省内不同产地的蒲公英药材粉末（过24目筛）1 g， 按“2.3”项下的方法分别制备供试品溶液，进样10 μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图，用外标法进行计算样品中阿魏酸的含量。结果见表2。表2  蒲公英中阿魏酸的含量测定结果（略）
       
       3  讨论
       3.1  提取溶剂的选择有文献报道［3］用5%的甲酸甲醇作溶剂超声提取阿魏酸。但由于蒲公英中阿魏酸含量较低，采用上述溶剂阿魏酸含量迅速降低且杂质较多，易污染色谱柱，难以获得准确的测定结果。该实验分别用水、5%的甲酸甲醇溶液、1%氢氧化钠溶液对药材提取，考察不同溶剂对阿魏酸含量的影响。结果：用水作溶剂提取，阿魏酸含量较低，用5%的甲酸甲醇溶液作溶剂提取，杂质含量较大，而采用1%氢氧化钠溶液作溶剂提取，杂质较少，阿魏酸的含量最高。故本实验选用1%氢氧化钠溶液作为该样品的提取溶剂。 
       3.2  流动相的选择实验中曾采用甲醇-冰乙酸-水(30∶3∶67)，甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)， 甲醇-冰乙酸-水(30∶1∶69)流动相进行色谱分析，结果甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)分离效果好，峰形理想。故本实验采用甲醇-冰乙酸-水(30∶2∶68)为流动相。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典［S］. 北京：化学工业出版社，2005:244.
       
       ［2］胡益勇，徐晓玉. 阿魏酸的化学和药理研究进展［J］.中成药，2006，28(2):253.
       
       ［3］乔 明，向纯明. HPLC法对当归不同药用部位中阿魏酸含量测定［J］.中医药学刊,2005,23(10):1892.