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       【摘要】 
       目的建立以高效液相色谱法测定乳舒片中咖啡酸含量的方法。方法色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为（A）乙腈，（B）0.05％磷酸水溶液，梯度洗脱（0～10 min，0％A～15％A，100％B～85％B；10～40 min，15％A～30％A，85％B～70％B），流速0.8 ml·min-1，检测波长323 nm。结果咖啡酸浓度在2.1～21.0μg·ml－1范围内具有良好的线型关系（r＝0.999 9），平均加样回收率为97.48％，RSD为1.91％（n＝6）。结论实验方法简便、准确、重现性好，可用于控制乳舒片的质量。
       【关键词】  高效液相色谱法； 乳舒片； 咖啡酸；
        乳舒片是由丹参、黄芪、路路通、当归、夏枯草和白花蛇舌草等制成的复方中药片剂，具有舒肝理气、消肿散结、活血化瘀、益气养血、解毒抗瘤的功能，主治乳腺增生及乳腺肿瘤。方中夏枯草所含咖啡酸具有抗菌、抗病毒、心血管保护、抗诱变、抗癌、降脂、降血糖、止血及抗氧化等作用［1］。本实验建立了以高效液相色谱法测定乳舒片中咖啡酸含量的方法，为乳舒片的质量控制提供依据。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦），含在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器、化学工作站；CPA124S型电子天平（德国赛多利斯）；CQ-80型超声波清洗机。
       1.2  试药咖啡酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110885-200102）；乳舒片及阴性对照品（由本院制剂室提供）；甲醇、乙腈为色谱纯，注射用水（四川科伦药业股份有限公司，批号：H090519），其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为（A）乙腈，（B）0.05％磷酸水溶液，梯度洗脱（0～10 min，0％A～15％A，100％B～85％B；10～40 min，15％A～30％A，85％B～70％B），柱温30℃；检测波长323nm；流速0.8 ml·min-1；进样量10μl。在此色谱条件下，咖啡酸和前后色谱峰可达到基线分离。见图1。
       2.2  对照品贮备液的制备精密称定咖啡酸对照品5.25 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液（咖啡酸浓度为0.21 mg·ml-1）。
       2.3  供试品溶液的制备取乳舒片50片（每片约0.4 g），研细，混匀，称取粉末约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 m，称定重量，超声提取45 min（功率50 W，频率42 kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
       2.4  线性关系考察分别精密量取对照品贮备液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液。精密吸取上述6种溶液各10 μl，按上述色谱条件，分别进样，测定。以对照品浓度X（μg/ml）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y＝72.35X－0.19（r＝0.999 9），线性范围为2.1～21.0 μg·ml－1。
       2.5  重复性实验取同一批样品（样品3）6份，按“2.3”项下制备并进样测定。结果，咖啡酸含量的RSD为1.47％，表明本方法重现性好。
       2.6  稳定性实验取“2.5”项下同批样品在0，1，2，3，4，5 h分别进样测定，结果5h内咖啡酸色谱峰面积无明显变化，RSD＝0.35％，表明被测样品在5 h内稳定性良好。
       2.7  精密度实验精密吸取对照品溶液（浓度为12.6 μg·ml－1），在上述色谱条件下连续进样6次。结果，咖啡酸峰面积的RSD＝0.47％，表明本方法精密度良好。
       2.8  加样回收率实验取已知含量的样品（样品3，含量：264.3μg·g－1）适量，约1 g，共6份，精密称定，分别精密加入对照品贮备液1.0 ml，按上述方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果表1。表1  加样回收率实验结果（略）
       2.9  样品含量测定分别取不同批次乳舒片样品按供试品溶液制备法制备并进行进样、测定。乳舒片中咖啡酸的含量测定结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
        乳舒片为一种复方制剂，超声提取物成分复杂，采用固定比例流动相［2，3］均无法实现样品中咖啡酸的分离测定，经比较试验，采用梯度洗脱可实现样品中咖啡酸和其他成分的分离。
        本方法操作简便、快捷，结果可靠，为乳舒片的质量控制提供了依据。
       【参考文献】
         　　［1］苏美英，周婷婷，周 茂．咖啡酸在大鼠体内的药动学研究［J］．中国药房，2008，19（16）：1220.
       
       ［2］方建和，熊胜泉，颜冬梅，等．高效液相色谱法测定消炎退热颗粒中咖啡酸的含量［J］．时珍国医国药，2007，18（5）：1134.
       
       ［3］邓君丽，王兆霞．HPLC测定消炎片中咖啡酸的含量［J］．中成药，2007，29（4）：615.