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       【摘要】 
       目的选择一种准确、稳定、简便的松茸多糖含量测定的方法。方法对硫酸-蒽酮法和苯酚-硫酸法测定松茸子实体多糖的含量进行比较。结果硫酸-蒽酮法和苯酚-硫酸法分别在1.2～12 mg·L-1(r=0.999 3)和1.5～15 mg·L-1(r=0.999 1)范围内呈线性关系；精密度实验RSD分别为0.13%和0.31%；硫酸-蒽酮法在3h内稳定，苯酚-硫酸法在6h内稳定；含量测定结果分别为4.28%和4.95%。结论苯酚-硫酸法测定松茸多糖含量显色灵敏，颜色稳定，操作简便，可作为测定松茸多糖含量测定的方法。
       【关键词】  松茸； 多糖含量； 蒽酮-硫酸法； 苯酚-硫酸法
       Comparison of 2 Determination Methods for  Polysaccharide Content in Tricholoma matsutake Sing
       LIU Qian, HE Falin, JIANG Chunhua1, BAI Shufen, WANG Huifang, LA Wanying
       1.North China Coal Medical University, Tangshan , 063000, Hebei, China;2. Beijing Hospital, Beijing, 100730, China
       Abstract：ObjectiveTo select a more accurate, stable and convenient method for detemination of Polysaccharide content in Tricholoma matsutake Sing. MethodsPolysaccharide content in Tricholoma matsutake Sing was determined by two methods: athranone-sulfuric acid method and phenol-suifuric acid method. ResultsThe standard curve of athranone-sulfuric acid method and phenol-suifuric acid method was respectively linear in the ranges of 1.2～12mg·L-1(r=0.999 3) and 1.5～15mg·L-1(r=0.999 1) , athranone-sulfuric acid method was stable within  3 h, phenol-suifuric acid method. was stable within 6 h; the content was 4.28% and 4.95% respectively. ConclusionPhenol-suifuric acid method is sensitive，stable and convenient and can be used for determination of polysaccharide content in Tricholoma matsutake Sing.
       Key words：Tricholoma matsutake Sing；  Polysaccharide content;  Anthranone-sulfuric acid method;  Phenol-suifuric acid method
        松茸Tricholoma matsutake Sing.是赤松、台湾松等树木的活体共生菌，又称松茸、松蕈、松蘑、鸡丝菌,属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属［1］。子实体味道鲜美，有很高的营养价值和特殊的药用效果，被誉为“蘑菇之王”［2］。现代研究表明，松茸有治疗糖尿病、抗癌、镇咳、祛痰、平喘等作用［3］。松茸多糖含量的测定，有采用苯酚-硫酸法［4］，有采用硫酸-蒽酮法［5］。本文对松茸多糖的两种测定方法进行了比较研究，以选定一种方便快捷的适合松茸多糖含量测定的方法。
       1  仪器
       1.1  仪器722分光光度计；水浴锅，电子天平，干燥箱、循环水真空泵。
       1.2  试药葡萄糖（中国药品生物制品检定所）;95%乙醇、浓硫酸、蒽酮、苯酚均为分析纯，水为双蒸水。松茸购自吉林省博苑长白山特产科技有限公司。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的配制精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品10 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成每毫升中含无水葡萄糖0.1 mg的对照品溶液。
       2.2  样品溶液的制备精密称取60℃干燥至恒重的松茸细粉0.5g，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 ml，加热回流1 h，趁热滤过，残渣用80%乙醇洗涤3次，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 ml，加热回流1 h，趁热滤过，烧瓶及残渣用热水洗涤3次，合并滤液与洗液，转移至250 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
       2.3  硫酸-蒽酮法测定松茸多糖的含量
       2.3.1  标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1 ml，分别置10 ml具塞刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，在冰水浴中缓慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，摇匀，冷却后置沸水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在620 nm波长处测定吸光度。以吸光度(Y)为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线［6］，建立回归方程：Y=0.035 7 X+0.022 2(r=0.999 3)。结果表明：浓度在1.2～12 mg·L-1范围内线性关系良好。
       2.3.2  空白溶液的制备取水约2.0 ml，置10 ml具塞干燥试管中，在冰水浴中缓慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，摇匀，放冷后置沸水浴中反应10 min，立即取出置冰水浴中冷却10 min，即得空白溶液。
       2.3.3  精密度实验分别精密量取对照品溶液1 ml，按“2.3.1”项下的方法重复测定6次，吸光度的RSD为0.13%，结果表明仪器精密度良好。
       2.3.4  稳定性考察精密吸取按“2.2”项下方法制备的样品溶液1.0 ml，自“加水至2.0 ml”起，按照“2.3.1”项下方法每隔0.5 h测定吸光度，连续6 h，考察其稳定性。结果表明，样品溶液在3 h内显色稳定，可进行测定。RSD为2.94%。
       2.3.5  松茸多糖含量测定精密量取样品溶液1 ml，置10 ml具塞刻度试管中，照“2.3.1”项下的方法测定，自“加水至2.0 ml”起，依法测定吸光度，计算，即得。松茸多糖的含量为4.28%。
       2.4  苯酚-硫酸法测定松茸多糖的含量
       2.4.1  标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1 ml，分别置10 ml具塞刻度试管中，各加水至2.0 ml，摇匀，各精密加入5%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，放置10 min，置40℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品溶液质量浓度为横坐标，得回归方程：Y = 0.046 7 X-0.022 1，r=0.999 1,结果表明，无水葡萄糖在1.5～15mg·L-1范围内，其质量浓度与吸收度线性关系良好。
       2.4.2  空白溶液的制备取水约2.0 ml，置10 ml具塞干燥试管中，精密加入5%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5 ml，摇匀，放置10 min，置40℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，即得空白溶液。
       2.4.3  精密度实验分别精密量取对照品溶液1 ml，按“2.4.1”项下的方法重复测定6次，吸光度的RSD为0.31%，结果表明仪器精密度良好。
       2.4.4  稳定性考察精密吸取按“2.2”项下方法制备的样品溶液1.0 ml，加水至2.0 ml，按照“2.4.1”项下方法每隔0.5 h测定吸光度，连续6 h，考察其稳定性。结果表明，样品溶液在6h内显色稳定，可进行测定。RSD为2.15%。
       2.4.5  松茸多糖含量测定精密量取样品溶液1 ml，置10 ml具塞刻度试管中，照“2.4.1”项下的方法测定，自“加水至2.0 ml”起，依法测定吸光度，计算，即得。松茸多糖的含量为4.95%。
       2.5  硫酸-蒽酮法与苯酚-硫酸法的比较结果见表1。表1  硫酸-蒽酮法与苯酚-硫酸法比较（略）
       3  结论
           
       本文采用硫酸-蒽酮法和苯酚-硫酸法对松茸粗多糖进行了含量测定。硫酸-蒽酮法测定多糖的原理是依据多糖经浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，与蒽酮试剂起缩合反应，生成蓝绿色化合物；苯酚-硫酸法测定多糖的原理是依据糖经浓硫酸处理后脱水产生的糠醛或其衍生物，再与苯酚缩合生成橙黄色物质于490nm处比色［7］。从表1数据的比较可以看出，在精密度、相关系数上，硫酸-蒽酮法优于苯酚-硫酸法；在稳定性方面，苯酚-硫酸法较硫酸-蒽酮法稳定；在含量测定中，硫酸-蒽酮法测定粗多糖的含量比苯酚-硫酸法低。虽然硫酸-蒽酮法在测定方面也具有一定优势，但由于苯酚-硫酸法测定松茸多糖含量显色灵敏，颜色稳定，操作简便，因而苯酚-硫酸法是测定松茸多糖含量较为理想的方法。
       4  讨论
           
       在测定松茸多糖的试验中，与苯酚-硫酸法相比，硫酸-蒽酮法稳定性较差，含量测定结果较低，可能是由于松茸中的蛋白质［8］对蒽酮-硫酸法的显色反应有一定干扰所致。
       【参考文献】
         　　［1］魏铁铮,许广波,傅伟杰,等.不同培养基对松口蘑菌丝生长的影响［J］.食用菌学报,2000,7(3):48.
       
       ［2］李 云.珍稀共生食用菌松口蘑研究进展［J］.安徽农业科学,2007,35(15):4468.
       
       ［3］吴映明,陈爱葵,曾小龙,等.松口蘑的镇咳、祛痰、平喘作用研究［J］.中国食用菌, 2003,22(4): 37.
       
       ［4］廖丽娟,李英姬,金光洙. 松茸多糖提取工艺及质量测定［J］.延边大学医学学报,2008,31　(3):172.
       
       ［5］吴 漾,李婷婷,李永乐.等.松茸、蛹虫草混菌共酵菌丝体多糖提取工艺的优化研究［J］.食品研究与开发，2008,29(5):24.
       
       ［6］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2005：130.
       
       ［7］夏秀华,王海鸥.银杏叶多糖两种测定方法的比较［J］.食品研究与开发,2007,28(11):124.
       
       ［8］周选围,林 娟.不同地区四种松茸子实体可溶性蛋白的电泳分析［J］.食用菌学报,2002,9(2):1.