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       【摘要】 
       目的对不同产地和不同培养基蛹虫草进行生药学研究。方法采用性状鉴别、显微鉴别、水分及灰分测定的方法，并用高效液相色谱法对其主要成分虫草素进行含量测定。结果除柞蚕蛹为寄主者外，大米为培养基者性状及显微方面无明显差异；不同产地及不同培养基者，其水分均＜6%，灰分均≤5%；虫草素含量差异明显，柞蚕蛹为寄主者，其含量为4.26 mg/g，大米为培养基者，沈阳产含量为3.24 mg/g，山东产含量为1.69 mg/g，吉林产含量为1.41 mg/g。结论实验结果可为蛹虫草的生药鉴定、质量标准制定及进一步开发利用提供依据。
       【关键词】  蛹虫草； 生药学； 产地； 性状鉴别；
        蛹虫草Cordyceps militaris (L.ex Fr.)Link生于半埋伏于林地土壤中的鳞翅目昆虫的死蛹上［1］，又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草，主要含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、氨基酸、维生素及多种微量元素等化学成分，主产于吉林、辽宁、陕西、广东等地［2］。
       1  材料与仪器
       1.1  材料虫草素对照品，中国药品生物制品检验所提供。
        以大米为培养基的蛹虫草3种，产地分别为吉林、沈阳、山东；以柞蚕蛹为寄主的蛹虫草1种，产地为吉林。
       1.2  试药
       KH2PO4、水合氯醛等均为分析纯,北京化工厂生产;甲醇（色谱纯）Dikmapure methanol；水为纯净水。
       1.3  设备101-1A型数显电热鼓风干燥箱；超声波清洗器AS3120A； XSP-18B显微镜； LC-10Avp高效液相色谱仪（日本岛津），LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，7725i手动进样阀；AT-330柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；色谱柱（Aichombond-AQC18，5 μm，250 mm×4.6 mm）；N-2000色谱工作站（浙江大学智达信息工程有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  性状鉴别取不同产地的蛹虫草，分别观察其性状。
       2.1.1  以柞蚕蛹为寄主的蛹虫草产地：吉林
        性状鉴别：虫体黑色，广椭圆形，长2～4 cm，直径约2 cm。外表黑褐色或附有金黄色物质，粗糙，环纹明显，全身共有12～14条环纹，头尾环纹不明显，以中央5～6条最为明显；质脆体轻，易折断，断面略平坦，呈灰白色；子座多数，金黄色，细长，圆柱形，顶端稍膨大，一般比虫体长，长约4～8 cm，直径约3 mm，表面有细小的纵皱纹；质脆易折断，断面淡黄色。气微腥，味淡。
       2.1.2  以大米为培养基的蛹虫草
        ①产地：吉林
        性状鉴别： 子实体细长，圆柱形或扁条形，弯曲；长约6～8 cm，直径约2 mm；黄褐色或金黄色。表面有纵皱纹，顶部稍膨大。质脆，易折断，断面平坦，淡黄色；气微腥，味淡。
        ②产地：沈阳
        性状鉴别：子实体细长，圆柱形或扁条形，弯曲；长约4～6 cm，直径约1 mm，黄色，表面有细小的纵皱纹，顶部稍膨大；质脆，易折断，断面平坦，黄褐色；气微腥，味淡。
        ③产地：山东
        性状鉴别：子实体细长，圆柱形或扁条形，弯曲。长约3～8 cm，直径约2 mm，土黄色，表面有细小的纵皱纹或横皱纹，顶部膨大。质脆，易折断，断面平坦，黄白色。气微腥，味淡。
       2.2  显微鉴别［3］
       2.2.1  样品处理取不同产地蛹虫草样品各2 g，研成粉末（过4号筛）。取粉末约0.5 g，置试管中，加入5%KOH约5 ml，水浴加热30 min，取出静止，弃去上清液，装片观察。
       2.2.2  结果①产地 ：吉林（寄主为柞蚕蛹）
        粉末特征：表皮有网格样纹理及小尖突，尖突较密集；毛窝圆形或类圆形，褐色，直径35～75 μm；刚毛浅棕色，中部直径10～20 μm，表面光滑（见图1～2）；横纹肌棕色，隐约可见明暗相间的横向波状纹理（见图3）；菌丝体近无色，细长，直径2～5 μm，可见横隔，相互盘缠交织（见图4）。
        ②粉末特征（10×40倍）：菌丝体近无色，细长，直径1～3 μm，隐约可见横隔，相互盘缠交织。
        产地 ：吉林、沈阳（大米培养基）
        ③产地 ：山东（大米培养基）
        粉末特征（10×40倍）：菌丝体近无色，细长，直径2～4 μm，横隔清晰可见，多平行排列。
       2.3  水分测定
       2.3.1  实验方法（烘干法）［4］
        取供试品2 g，平铺至干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5 h，将瓶盖盖好移至干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在上述温度干燥1h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（％）。
       2.3.2  结果产地为吉林（寄主为柞蚕蛹）: 水分含量5.09％；产地为吉林（大米培养基）：   水分含量5.66％；产地为沈阳（大米培养基）：   水分含量5.97％；产地为山东（大米培养基）：   水分含量5.83％。
       2.4  灰分测定［4］
       2.4.1  方法取不同产地的蛹虫草药材约5 g，粉碎，过20目筛，混合均匀。取供试品约3 g，置炽灼至恒重的坩锅中，称定重量（准确至0.01 g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。
       2.4.2  实验结果产地为吉林（寄主为柞蚕蛹）：   灰分含量为4.42％；产地为吉林（大米培养基）：灰分含量为4.62％；产地为沈阳（大米培养基）：灰分含量为5.00％；产地为山东（大米培养基）：灰分含量为3.97％。
       2.5  含量测定［5～8］
       2.5.1  色谱条件色谱柱以KH2PO4缓冲液（pH6.5）-甲醇（80∶20）为流动相，柱温30℃，检测波长为260 nm。理论塔板数按虫草素峰计算应不低于2 000。
       2.5.2  对照品溶液的制备精密称取虫草素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.053 15 mg的溶液，摇匀，即得。
       2.5.3  供试品溶液的制备取样品粉末（过80目筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50 ml,称定重量，超声处理40 min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 ml蒸干，残渣加水适量溶解并定量转移到10   ml容量瓶中至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       2.5.4  线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液2，6，10，14，18 μl，注入液相色谱仪中，测定，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。表1  虫草素对照品标准曲线测定结果（略）
        回归方程:Y=1 762 525.392X-7 783.479 582，r=0.999 5。线性范围在0.106 3～0.956 7 μg之间。
       2.5.5  精密度实验对样品(寄主为柞蚕蛹)供试液，分别重复测定5次，以测定结果的相对标准偏差来反映测定结果的精密度。结果见表2。表2  精密度实验测定结果（略） 
        结果表明精密度较好。
       2.5.6  稳定性的实验对同一样品(寄主为柞蚕蛹)供试液，分别放置0，4，8，12，18 h，依法测定，以测定结果的相对标准偏差来反映供试液的稳定性。结果见表3。表3  供试液稳定性考察（略） 
        结果表明供试液在18h内稳定性好。
       2.5.7  重复性实验分别称取样品(寄主为柞蚕蛹)5份，依法进行5次独立测定，以测定结果的相对标准偏差反映测定结果重复性。结果见表4。表4  重复性实验测定结果（略） 
       2.5.8  回收率实验取样品(寄主为柞蚕蛹)，已知含量为4.15 mg/g，取本品约0.25 g，精密称定，精密加入对照品溶液5.2 ml（浓度为0.212 5 mg/ml），依法测定，计算回收率。结果见表5。表5  虫草素回收率测定结果（略）
        结果表明本方法重复性良好。
        结果表明本方法虫草素回收率RSD<2%，说明用该方法测定蛹虫草中的虫草素含量稳定可靠。
       2.5.9  样品中含量的测定依以上方法对来自不同产地的蛹虫草样品中虫草素含量进行测定，结果见表6及图5～6。表6  不同产地蛹虫草虫草素含量（略） 
       3  讨论
        对不同产地及不同培养基的蛹虫草进行了性状鉴别、显微鉴别，结果除吉林柞蚕蛹为寄主者外，其余3种在性状及显微方面无明显差异。
        不同产地及不同培养基的蛹虫草水分均＜6%，灰分均≤5%。
       
       利用高效液相法对其特征性成分虫草素进行含量测定，结果不同培养基的蛹虫草的虫草素含量差异较大，以吉林产柞蚕蛹为寄主者虫草素含量最高。
       【参考文献】
         　　［1］李茹光.吉林省有用及有害真菌［M］.长春：吉林人民出版社，1980：86.
       
       ［2］都兴范，李亚杰，王林华，等.北冬虫夏草的研究发展现状［J］.辽宁农业科学，2003，4：26.
       
       ［3］徐国钧.中药材粉末显微鉴定［M］.北京: 人民卫生出版社，1986：758.
       
       ［4］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京:化学工业出版社， 2005 ：附录 47.
       
       ［5］夏敏. 高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷的含量［J］.淮阴师范学院学报（自然科学版），2004，3（3）：226.
       
       ［6］陈千良，甘志杰，孙文基.HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素［J］.西北大学学报，2003，33（5）：569.
       
       ［7］马丽颖，张 铭，李润文，等.人工蛹虫草子实体虫草素的含量测定［J］.辽宁中医杂志 ，1998，25（10）： 489.
       
       ［8］王英娟，李多伟，王义潮，等.蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究［J］.西北植物学报，2005，25（9）：1863.