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       【摘要】 
       目的研究止消通脉宁颗粒对糖尿病肾病大鼠的治疗作用。方法采用高糖高脂饲料刺激加链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型，评价止消通脉宁颗粒对糖尿病肾病大鼠血糖、尿素氮、肌酐及肾脏结构和功能的影响。结果与模型组相比，止消通脉宁颗粒能剂量依赖性地显著降低血糖、尿素氮、肌酐水平，减轻肾脏组织的结构和功能病变。结论止消通脉宁颗粒能改善大鼠糖尿病症状，较好地保护肾脏结构和功能。
       【关键词】  止消通脉宁颗粒； 大鼠； 实验性糖尿病； 肾脏病变
        糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy, DN）属糖尿病(diabetes mellitus, DM)微血管病变，是糖尿病临床常见的严重并发症之一。随着糖尿病发病率的逐年上升，DN已成为终末期肾功能衰竭的首位病因。因此，防治DN的发生发展成为目前研究的热点和重点之一［1］。止消通脉宁颗粒是在总结北京中医药大学吕仁和教授治疗糖尿病肾病三十多年临床经验方剂的基础上，改进制剂工艺而得［2,3］。处方主要由黄芪、大黄、瓦楞子等组成，具有益气培元、补肾健脾、化瘀散结、泄浊解毒的功效，临床用于糖尿病肾病、高血压肾损害、慢性肾炎、肾囊肿等各种原因引起的肾功能不全和脾肾虚损兼血瘀、湿浊邪毒内停者。临床应用证明，止消通脉宁具有延缓糖尿病肾病病人肾功能衰竭和改善病人生存质量的功效［2～4］，且未发现与药物相关的副反应。在此基础上，将其开发成符合国家新药标准的中成药具有重要的经济和社会价值。
        根据止消通脉宁颗粒的主治与功能，本研究观察其对链脲佐菌素诱导的糖尿病肾病大鼠的治疗作用，为其临床应用与开发提供药理学依据。
       1   材料与仪器
        Wistar大鼠，清洁级，动物合格证号：SCXK（沪）2002-0010。止消通脉宁颗粒（1 g浸膏粉相当于生药7.37 g，上海清风阁医药科技有限公司，批号20051011）；链脲佐菌素（USA，Sigma公司出品）；卡托普利（中美上海施贵宝制药有限公司，批号0603031）；二甲双胍 (昆山培力药品有限公司，0602004) ；透射电镜 ( 日立H-600型 )。
       2  方法
       2.1  DM模型制备选取血糖在4.2～7.0 mmol/L范围的清洁级Wistar大鼠90只，雌雄各半。从入选大鼠中随机挑选10只，雌雄各半，作为正常对照组，给予普通饲料，其余大鼠全部给予高糖、高脂、高胆固醇饲料（含蔗糖10%，猪油10%，胆固醇5%），参照郭啸华等［5］方法，饲养1个月后，随机抽取15只大鼠，眼眶取血，分离血清，放免检测血清胰岛素含量。同时取10只正常组作为对照。根据检测胰岛素结果，判断高糖、高脂、高胆固醇饮食的大鼠是否已经产生胰岛素抵抗。对产生胰岛素抵抗的大鼠腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素，1周后测血糖，将血糖低于11.2 mmol/L的大鼠弃去。
       2.2  动物的给药及饲养
       高血糖大鼠随机分为5组：模型组、卡托普利组（8 mg/kg）、止消通脉宁颗粒高剂量组(28.8 g/kg)、止消通脉宁颗粒中剂量组(14.4 g/kg)、止消通脉宁颗粒低剂量组(7.2 g/kg)，给药量为1.0 ml/100 g大鼠体质量。每天均给药1次，正常组和模型组大鼠每天给予等量的饮用水灌胃。连续用药8周。4 周后取模型组和正常组大鼠的尿液，进行尿液常规分析，判断模型组肾功能是否受到损害，以进一步确认动物模型。
       2.3  指标测定一般观察： 包括大鼠的活动、形态、精神状态，每两周将大鼠用代谢笼饲养，测定24h饮水量、进食量、尿量、体质量。生化指标测定：用血糖试纸与血糖仪测定大鼠血糖水平；各组大鼠在最后1次测定体质量、摄食量、饮水量、尿量和血糖后，立即以毛细管从眼球后静脉丛取血3 ml左右，常温下放置1h，4℃冰箱静置6 h后，以2 500 r/min离心15 min，分离血清，采用自动生化分析仪检测血清尿素氮、血肌酐含量；检测各组大鼠最后1次尿样尿微量白蛋白含量。肾脏病理学超微电镜检查：每组随机抽取3只大鼠，取大鼠左肾皮质部约0.2 cm×0.2 cm×0.2 cm大小组织块，用2.5%戊二醛固定，在透射电镜上进行显微结构的病理学检查。
       2.4  统计学处理
       所有数据以±s表示，组间差异采用SPSS10.0软件进行分析。
       3  结果
       3.1  止消通脉宁颗粒对糖尿病大鼠的体征的影响造模后的各组大鼠体质量明显减轻，形体消瘦，精神萎靡，进食量和尿量显著增加，各治疗组大鼠在用药4周后精神好转，进食量、尿量也逐渐减少。治疗组大鼠在用药8周后较模型组大鼠毛色明显好转，有光泽，体重显著增加，自发活动较模型组显著多且自如。
       3.2  止消通脉宁颗粒对大鼠血糖水平的影响各造模组大鼠在造模后血糖迅速升高，一直持续至用药后第4周，之后一直维持在25.0 mmol/ml以上。在用药4周后，止消通脉宁颗粒组大鼠血糖显著低于模型组，但高于正常对照组，卡托普利对血糖没有显著性影响。结果见表1。表1  止消通脉宁颗粒对大鼠血糖的影响（略）
       3.3  止消通脉宁颗粒对大鼠血清尿素氮、血清肌酐含量的影响模型组大鼠血尿素氮和血清肌酐水平非常显著高于正常对照组；止消通脉宁颗粒高剂量组大鼠血清尿素氮、血清肌酐含量显著低于模型组；中剂量组与卡托普利组大鼠血清肌酐含量显著低于模型组；低剂量组大鼠血清尿素氮、血清肌酐含量虽然比模型组低，但没有显著差异。结果见表2。表2  止消通脉宁颗粒对大鼠血尿素氮、血肌酐含量的影响（略）
       3.4  超微病理组织学检查正常组肾小球基底膜清晰，均匀一致，未见明显增宽，触突清晰，排列整齐。模型组细膜基质增生，截断增生，有些水管袢显著增生。基底膜均匀增厚，上皮轴突未见融合。肾小管间质轻度增生，或不明显；部分小管上皮细胞糖原颗粒增多，少数细胞空泡变性。止消通脉宁各剂量组及卡托普利组都有类似的改变，但病变较轻。结果见图1～6。
       4  讨论
       糖尿病属中医“消渴病”范畴，糖尿病肾病则为消渴病继发病证，中医学将其归属于消渴病继发“水肿”“尿浊”“关格”“肾衰”等范畴。据统计，我国住院糖尿病病人DN的发生率达33.6%［6］。在其辨证和治疗方面，前人积累了丰富经验。古人多从肾虚立论，而现代医家普遍重视其血瘀病机，常用补肾活血法、益气养阴、活血化瘀法、益气活血、健脾除湿法等治疗糖尿病肾病，在改善症状、保护肾功能等方面，皆有一定疗效。
       现代药理研究认为，黄芪主要含有三萜皂苷、黄酮类、氨基酸、多糖类等成分，研究表明其具有免疫调节、抗炎降压、镇静镇痛、保肝、护心、清除多种自由基等作用；瓦楞子是方中佐药，主要成分是碳酸钙，常用于治疗胃炎、消化性溃疡的复方制剂中；大黄是方中使药，主要含有蒽醌类、二苯乙烯苷类、色酮类、鞣质等成分，具有泻下、抗菌、抗炎、镇痛、降压、降血脂等药理作用。
        吕仁和教授对糖尿病肾病各期临床证候学进行研究，研制出止消通脉宁等适合糖尿病肾病不同阶段的中药验方，取得了良好疗效。长期毒性实验显示止消通脉宁颗粒在临床推荐剂量下使用对人体是安全的［7］。本研究结果表明，止消通脉宁颗粒能明显改善糖尿病肾病大鼠的一般状况，动物表现为皮毛光泽，体质量稳定，“三多一少”症状明显减轻，显著降低血糖、尿素氮、肌酐等水平，较好地保护肾脏组织的结构和功能，通过本次实验，初步证明止消通脉宁对糖尿病肾病的治疗作用，其作用机制仍待进一步深入研究。
       【参考文献】
         　　［1］王 霞. 糖尿病肾病的中西医治疗进展［J］.时珍国医国药，2005，16(2):166.
       
       ［2］孙军. 止消通脉宁治疗早期糖尿病肾病的临床研究［J］. 北京中医，1999，4：50.
       
       ［3］吕仁和. 糖尿病及其并发症中西医治疗学［M］. 北京：人民卫生出版社，1998：147.
       
       ［4］赵进喜，牟 新，王世东，等. 止消通脉宁颗粒治疗糖尿病肾病肾功能不全代偿期33例疗效观察［J］. 河南中医，2004，24(8):20.
       
       ［5］郭啸华，刘志红，李 恒，等. 实验性2型糖尿病大鼠模型的建立［J］. 肾脏病与透析移植杂志，2000，9：351.
       
       ［6］畅新燕，白辉辉，郑 栓，等. 糖尿病肾病中医药治疗研究述评［J］. 光明中医，2008，23(13)：2053.
       
       ［7］王青，王征，郑清明，等. 止消保肾宁颗粒的毒理学研究［J］. 药学服务与研究，2007，7(4):298.