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       【关键词】  苦参片；,,氧化苦参碱；,,苦参碱；,,高效液相色谱
       摘要：目的建立苦参片中氧化苦参碱和苦参碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，使用Thermo色谱柱，以乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36ｇ,加1 ml三乙胺,加水至1000 ml,用磷酸调节pH5.5）（3∶97）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为220 nm。结果氧化苦参碱在0.005 5～0.088 mg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.999 8）,平均加样回收率99.41％，RSD为1.28％；苦参碱在0.106～0.170 mg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.999 9）,平均加样回收率99.35%，RSD= 1.25%。结论该法灵敏、准确、专属性强，重现性好，可作为苦参片的质量控制方法。
       关键词：苦参片；  氧化苦参碱；  苦参碱；  高效液相色谱
       Determination of Oxymatrine and Matrine in Kushen Tablets by HPLC
       JIANG Yanling，ZHANG Shanyu L Huizi
       (College of Pharmacy，Yanbian University ，Yanji 133000, China )
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for simultaneous determination of the content of matrine and oxymatrine in Kushen Tablets. MethodsHPLC method was carried out through Thermo C18 column, using acetontrile- phosphate buffer solution (contained 1.36 g potassium dihydrogen phosphate and 1 ml triethylarmine, add water to 1000 ml, adjusted to pH 5.5 with phosphate acid)（3∶97） as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min with detective wavelength of 220 nm. ResultsThe calibration curve of oxymatrine content was linear within the range of 0.0055～0.088 mg/ml (r=0.999 8),the average recovery of oxymatrine was 99.41%, RSD was 1.28%；the calibration curve of matrine content was linear within the range of 0.170～0.0106 mg/ml  (r=0.999 9),the average recovery of Matrine was 99.35%, RSD was 1.25%. ConclusionThe method is simple, fast and accurate, it can increase the quality control index of Kushen Tablets.
       Key words：Kushen Tablets；  Oxymatrine；  Matrine；  HPLC
   
　　苦参片是由苦参经加工制成的纯中药制剂。具有清热燥湿、杀虫的功能，主要用于湿热蕴蓄下焦所致的痢疾、肠炎、热淋及阴肿阴痒、湿疹、湿疮等症。苦参具有清热燥湿、抗炎、抗肿瘤等作用，其主要活性成分为苦参碱和氧化苦参碱。苦参片原标准（部颁标准WS3-B-1953）中仅对苦参片进行了显微鉴别和薄层色谱鉴别，为提高产品的定量控制水平，本文对苦参片中氧化苦参碱和苦参碱的含量同时进行测定。
       　　1  仪器与试药
       美国惠普HP1100高效液相色谱仪，HP1100色谱工作站；氧化苦参碱对照品（批号：0780-200004）、苦参碱对照品（批号：110805-200306）等均由中国药品生物制品检定所提供；苦参片，按部颁标准WS3-B-1953收载的制备方法自制（批号：050801，050802，050803，050804，050805）乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：Thermo色谱柱（规格4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36 g,加1 ml三乙胺,加水至1 000 ml,用磷酸调节pH 5.5）（3∶97）为流动相；流速：1 ml/min；检测波长：220 nm。
       2.2  对照品溶液的制备  分别精密称取氧化苦参碱对照品4.4 mg，苦参碱对照品8.5 mg，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液（浓度分别为氧化苦参碱0.088 mg/ ml和苦参碱0.17 mg/ ml）。
       2.3  供试品溶液的制备取本品10片，除去糖衣，研细，称取0.1 g精密称定, 置三角瓶中，加甲醇50 ml，氨试液4滴，称定重量，超声提取1 h，冷却，称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
       2.4  系统适用性实验分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μl，注入液相色谱仪，依法测定。结果见图1。理论塔板数：按氧化苦参碱峰及苦参碱峰计算，均不低于3 000。
       2.5  线性关系考察精密吸取储备液一定量，加甲醇分别准确配制含氧化苦参碱0.088 0，0.044 0，0.022 0，0.011 0，0.005 5 mg/ml的对照品溶液和含苦参碱0.170 0，0.085 0，0.042 5，0.021 2，0.010 6 mg/ml的对照品溶液，按“2. 1”项的色谱条件下进行测定，进样量20 μl，以氧化苦参碱、苦参碱进样量（mg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，分别得回归方程:氧化苦参碱:Y = 739.26 X + 35.429，r=0.999 8；苦参碱: Y =516.42 X + 11.264，r=0.999 9。说明氧化苦参碱在0.005 5～0.088 mg/ml范围内，苦参碱在0.010 6～0.170 mg/ml范围内，与峰面积积分值呈良好的线性关系。
       2.6  精密度实验分别精密吸取氧化苦参碱对照品溶液（0.022 0 mg/ml）和苦参碱对照品溶液（0.042 5 mg/ml）20 μl，重复进样5次，依法测定峰面积积分值，结果苦参碱峰面积积分值分别为455.861 55，456.387 56 ，457.047 26，451.457 16，465.006 73，RSD＝1.07％；氧化苦参碱峰面积积分值分别为198.254 76，196.052 37，199.651 49，197.542 79，194.567 91，197.213 864，RSD＝1.00％。表明本实验所使用仪器精密度良好。
       2.7  稳定性实验取同一供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，12 h后，精密吸取5 μl，依法测定，氧化苦参碱峰面积积分值分别为335.438 02，337.353 42，340.379 61，339.510 44，340.865 064，RSD＝1.86％；苦参碱峰面积积分值分别为89.02641，86.33057，90.42332，88.39580，92.35009，RSD＝2.52％。表明本方法处理得到的样品溶液在12 h内稳定。
       2.8  重现性实验取同一批样品，制备5份供试品溶液，依法测定，计算苦参碱和氧化苦参碱的含量，结果表明氧化苦参碱含量的平均值为41.32 mg/g，RSD＝2.07％，苦参碱含量的平均值为14.61 mg/g，RSD＝2.65％。表明本方法重现性良好。
       2.9  加样回收率实验精密称取已知含量的样品(050802)，共5份，分别精密加入氧化苦参碱和苦参碱对照品适量，制备5份供试品溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。
       表1  回收率实验结果(略)
       a苦参碱  b氧化苦参碱  c样品
       图1  高效液相色谱图(略)
       2.10  样品含量测定对5批样品，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各5μl，依法测定并计算含量。结果见表2。
       表2  样品中苦参碱和氧化苦参碱含量测定(略)
       　　3  讨论
       3.1  取苦参碱和氧化苦参碱对照品甲醇溶液, 照紫外分光光度法，在200~500 nm 进行扫描，结果均在215 nm 附近有最大吸收，因流动相的吸收随着波长减少而增加，并且杂峰也相应增加，故选择220 nm为其检测波长。
       3.2  曾采用盐酸溶液提取→调成碱性→氯仿萃取的方法和甲醇回流提取法进行样品处理，比较提取效果，结果以本实验方法提取率较高，且简便易行。
       3.3  曾选用甲醇-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36 g，加1 ml三乙胺，加水至1 000 ml，用磷酸调节pH5.5 ）（35∶65）［1］、以甲醇-0.2%三乙胺溶液(45：55) ［2］；乙腈-0.025 mol/L磷酸(4∶96，用三乙胺调pH 3)；乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36 g，加1 ml三乙胺，加水至1 000 ml，用磷酸调节pH5.5）（3∶97）等系统作为流动相进行实验，结果乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36 g，加1 ml三乙胺，加水至1发000 ml，用磷酸调节pH5.5）（3∶97）可使苦参碱和氧化苦参碱同时进行较好地分离，达到同时测定二者含量的目的。
       3.4  结果方法简便、快速准确，可为该制剂定量控制提供新方法和指标。
       　　参考文献：
       ［1］  曾令高.HPLC测定苦参碱葡萄糖注射液中苦参碱的含量及有关物质［J］.华西药学杂志，2004，19（2）：290.
       ［2］  江维克，王  丽. HPLC同时测定复方石韦片和苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的含量［J］.中成药，2005，27（1）：45.
       (吉林省延边大学药学院，吉林 延吉  133000)