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       【关键词】  苦参；,,生物碱；,,,高效液相色谱
       摘要：目的建立反相液相色谱法测定苦参药材中4种生物碱的含量测定方法。方法使用 hypersil BDS（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.1%氨水梯度洗脱，检测波长210 nm。结果苦参碱在0.25~2.00 μg（r=0.999 7），槐定碱在0.28~2.24 μg（r=0.999 5），氧化苦参碱在0.244－1.953 μg（r=0.999 1），氧化槐果碱在 0.262－2.096 μg（r=0.999 2）范围呈良好的线性关系，回归方程分别为 y=2 602.6x-72.031,y=1 558.8x+17.381,y=1 755.8x+162.59, y=2 219.55x-21.119，加样回收率分别为99.24%，98.31%，101.28%，100.59%，RSD分别为1.248%，1.517%，1.412%，1.638%。结论该法简便，快速，专属性好，可用于苦参药材中生物碱的含量测定。
       关键词：苦参；  生物碱；   高效液相色谱
       Determination of 4 Kinds of Alkaloids in Sophora flavescens Ait. by HPLC
       LIU Qian，LIU Yonggang，ZHENG Yusheng, ZHANG Honggui*
       (Pharmac eutical College of Jilin University,  Changchun, Jilin 130021,China;Beijing University of Traditional Chinese Medicine,  Beijing 100029 ,China）
       Abstract:ObjectiveTo develop an HPLC method to determine the content of 4 alkaloids in Sophora flavescens Ait.MethodsHypersil BDS（150 mm×4.6 mm，5 um）phase column was used with mobile phase methanol-0.1% ammonia water gradient elution ,the wavelength of determination was 210 nm. ResultsThe linear concentration range of matrine 、sophoridine、oxymatrine and oxysophocarpine were 0.25~2.00μg（r=0.999 7），0.28~2.24μg（r=0.999 5），0.244~1.953μg（r=0.999 1），0.262~2.096μg（r=0.999 2），regression equation .were:y=2 602.6x-72.031,y=1 558.8x+17.381,y=1 755.8x+162.59,y=2219.55x-21.119,average recovery were 99.24%，98.31%，101.28%，100.59%，RSD were 1.248%，1.517%，1.412%，1.638%, respectively.ConclusionThis method is simple,rapid,sensitive,specific,and can be used for determination of the content of alkaloids in Sophora flavescens Ait
       Key words:Sophora  flavescens  Ait.;   Alkaloid;  HPLC
   
　　苦参为豆科植物苦参Sophora  flavescens  Ait. 的干燥根，具有清热燥湿，杀虫，利尿的功能［1］，近年来研究发现其具有抗寄生虫、抗菌、抗病毒、抗心率失常、抗肿瘤、抗过敏和平喘及抗肝损伤等作用［2］，受到广泛关注。苦参类生物碱是苦参中具有广泛生物活性的一类重要化合物［3］。本文同时测定了苦参药材苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱4种生物碱，对苦参进行质量控制。
       　1  仪器和试药
       1.1   仪器 Agilent1100HPLC系统,含在线真空脱气机、高压二元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、HPChemstationRevA0.803色谱工作站。
       1.2   试药苦参碱对照品（批号110805－200306），氧化苦参碱对照品（批号110780－200405），槐定碱对照品（批号110784－200303），氧化槐果碱（批号111652-200301）均购自中国药品生物制品鉴定所，甲醇(色谱纯),氨水(分析纯),水为二蒸水。3种产地的苦参药材，经鉴定为豆科植物苦参的干燥根。
       　　2  方法
       2.1  提取条件的选择精密称取苦参粉末（40目）0.5 g，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.6 ml，氯仿30 ml，超声30 min，滤过，挥干，残渣加甲醇溶解，定容于100 ml容量瓶中，摇匀，过0.45 um微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液1。精密称取苦参粉末（40目）0.5 g，加入30 ml甲醇（pH=5），超声30 min，滤过，滤液挥干，残渣加水10 ml溶解，加氨水1 ml，氯仿萃取3次，合并氯仿液，挥干，加甲醇溶解，定容于100 ml容量瓶中，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液2。结果表明供试品溶液1的各生物碱浓度均明显高于供试品溶液2，故选择前者进行提取。
       2.2  对照品溶液的制备 精密称取苦参碱，氧化苦参碱，槐定碱，氧化槐果碱对照品10 mg，加甲醇溶解，定容于100 ml，制成苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱混合储备液。
       2.3  色谱条件及分析方法色谱柱：Hypersil BDS(150 mm×4.6 mm,5 μm); 流动相：A：0.1%氨水,Ｂ：甲醇；梯度洗脱：0.01 min：A：B(80:20),30 min：A：B(60：40),50 min：A：B(80：20),记录时间：60 min ;流速：0.5 ml/min ；柱温：25℃；检测波长：327 nm。进样量：10 μl。
       2.4  标准曲线依次精密吸取储备液1，2，4，6，8 ml，置10 ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20 μl进样，以峰面积为横坐标，进样量（μg）为纵坐标进行线性回归。结果见表1。
       表1  标准曲线(略)
       2.5  精密度实验精密度实验取同一供试品溶液，重复进样6次，计算相对标准偏差，则苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱 RSD分别为0.821%，0.958%，1.081%，0.924%。
       2.6  重现性实验 取同一苦参药材5份制备供试品溶液，按［含量测定］项下的方法测定苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱的含量，苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱的RSD分别为1.201%，1.417%，1.776%，1.358%。
       2.7  稳定性考察分别取放置4，8，12，16，20，24 h的供试品溶液，测定4种生物碱的含量，以考察其稳定性。RSD值为1.617%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。
       2.8  加样回收率精密称取苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱对照品适量，加入到一定量已知苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、氧化槐果碱含量的苦参粉末中，制备供试品溶液，按样品测定方法进行测定，代入回归方程计算平均回收率分别为99.24%，98.31%，101.28%，100.59%，RSD分别为1.248%，1.517%，1.412%，1.638%。
       2.9  样品测定取3种产地苦参药材制备成供试品溶液，注入液相色谱仪，外标法侧得苦参中苦参碱，槐定碱，氧化苦参碱，氧化槐果碱的含量结果见表2。
       表2  3种产地苦参药材生物碱含量(略)
       　　3  讨论
       苦参是一种常用的中药材，《中国药典》只规定了苦参碱、氧化苦参碱的含量测定方法，而苦参药材中含有多种生物碱，槐定碱、氧化槐果碱是苦参中的有效成分，并且含量都高于苦参碱。本法用反相高效液相色谱，BDS色谱柱，甲醇-0.1%氨水为流动相梯度洗脱，方便，灵敏，准确，同时测定苦参中4种生物碱的含量，可以作为苦参质量控制的方法。
       　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005..
       ［2］  苗抗立，张建中，董  颖，等.苦参的化学成分及药理的研究进展［J］.天然产物研究与开发，2001，13（2）：69.
       ［3］  丁  懿，许  磊，潘卫三,等.苦参类生物碱的研究进展［J］.辽宁药物与临床，2001，4（4）：182.
       ［4］  韩  刚，翟  丽，王炳强.高效液相色谱法测定不同产地苦参中生物碱的含量［J］.华北煤炭医学院学报，2005，7（2）：140.
       （吉林大学药学院，吉林 长春   130021；北京中医药大学，北京   100029）