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       【摘要】 
       目的观察加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗肿瘤的减毒增效作用。方法裸鼠皮下接种S180肉瘤，环磷酰胺腹腔注射给药，合用加味当归补血汤浓缩丸高、中、低剂量，给药10 d后观察裸鼠红细胞数、红细胞压积、瘤重、瘤系数等。结果环磷酰胺能明显降低裸鼠肉瘤重量和肉瘤系数，显著减少裸鼠脾脏系数、红细胞数和红细胞压积，加味当归补血汤浓缩丸与其合用后可进一步降低荷瘤裸鼠肉瘤重量和肉瘤系数，增大脾脏系数，明显增加红细胞数和红细胞压积。病理检查显示，加味当归补血汤浓缩丸与环磷酰胺合用后可显著促进瘤细胞坏死，降低瘤细胞密度，减少瘤细胞数。结论加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗肿瘤有明显减毒增效作用。
       【关键词】  加味当归补血汤浓缩丸; 环磷酰胺; S180肉瘤
       Effects of Modified Danguibuxuetang Concentrated Pills on S180 Tumor Model in BALB/c-nu/nu Treated with CTX
       XIE Bin1,HUANG Xuejun2*,LIU Manhua1,ZEN Xiaohui2 ,HUANG Qiong1,DU Tie-liang2
       (1.Macau Kangyi Pharmaceutical Science and Technology Ltd., Macau, China;2 Institute of Traditional Chinese Medicine of Guangdong Province, Guangzhou 510095,China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the reducing toxicity and increasing effect of modified Danguibuxuetang concentrated pills(MDCP) on S180 tumor model in BALB/c-nu/nu treated with CTX.MethodsS180 cell was implanted into BALB/c-nu/nu and CTX combined with ig MDCP. The number of red blood cell,hematocrit, tumor weight, tumor factor were observed after medicating 10d.ResultsMDCP combined with CTX could further reduce the tumor weight and tumor factor, increase the number of red blood cell and hematocrit in BALB/c-nu/nu tumor model. Pathological examination revealed MDCP combined with CTX could further promote the tumor cell necrosis, reduce the number of tumor cells. ConclusionMDCP can reduce the toxicity of CTX and increase the effect of CTX.
       Key words：Modified Danguibuxuetang concentrated pills; CTX; S180 cell
       当归补血汤出自李东垣的《内外伤辨惑论》，全方由黄芪、当归组成，二药用量之比为5∶1，为经典的气血双补名方，主治劳倦内伤、气弱血虚。该方临床应用十分广泛，治疗贫血的相关药理研究十分活跃，为临床常用补血基本方之一，本方现代主要用于治疗贫血、白细胞减少症、对抗放化疗副作用等[1]。加味当归补血汤浓缩丸是在当归补血汤的基础上进行加味组方，临床用于肿瘤化疗辅助有较好功效，本文主要进行加味当归补血汤浓缩丸与环磷酰胺合用的实验动物疗效观察，为临床用药提供实验依据。
       1 材料与仪器
       1.1 供试品加味当归补血汤浓缩丸、加味当归补血汤原处方浓缩丸由广东省中医研究所制剂研究室提供，批号均为20081022。十一味参芪胶囊，大连汉方药液有限公司，批号20080807。
       1.2 S180肉瘤株购自中山大学。
       1.3 试剂注射用环磷酰胺，山西普德药业有限公司，批号20080104。
       1.4 仪器BS224S电子天平(1/万)，德国SARTORIUS产品。KX-21全自动血球计数仪，日本东芝产品。
       1.5 动物SPF级BALB/c-nu/nu裸鼠，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，实验设施合格证号和动物合格证号分别为SCXK(粤)2008-0002和粤监证字2008A053。本实验使用SPF级动物实验室，实验设施使用许可证号为SYXK(粤)2005-0059。
       2 方法
       2.1 S180荷瘤裸鼠模型的建立无菌条件下抽取6～7d生长良好的S180小鼠的腹水，按1∶3用生理盐水稀释，反复冲打，充分混匀，在显微镜下计数，用生理盐水调整细胞数为1.5×107个·ml-1。取BALB/c-nu/nu裸鼠28只，雌雄各半，每只小鼠背部碘酊消毒后皮下接种S180瘤细胞液0.2 ml。瘤株接种前均用0.2%台盼蓝染色，计算活细胞数为95%～98%。从抽取腹水时开始，到移植完最后1只小鼠的总时间控制在1 h内。
       2.2 分组及给药接种7 d后，裸鼠背部肉瘤已生长形成块状物。取上述接种肉瘤细胞的BALB/c-nu/nu裸鼠按体重随机分为7组，分别为荷瘤对照组、环磷酰胺(CTX)组、CTX+参芪胶囊组、CTX+加味当归补血汤浓缩丸高剂量组、CTX+加味当归补血汤浓缩丸中剂量组、CTX+加味当归补血汤浓缩丸低剂量组、CTX+加味当归补血汤原方浓缩丸组，每组4只，雌雄各半。另取4只未接种肉瘤细胞BALB/c-nu/nu裸鼠作为正常对照组，雌雄各半。
       环磷酰胺腹腔注射给药，注射体积为10 ml·kg-1，1次/d，连续10 d，正常对照组、荷瘤对照组及其余各给药组同法腹腔注射生理盐水10 ml·kg-1。加味当归补血汤浓缩丸各剂量组及阳性对照药参芪胶囊组按剂量灌胃给药，给药体积为20 ml·kg-1，1次/d，连续10 d，正常对照组、荷瘤对照组及CTX组同法灌胃给予蒸馏水20 ml·kg-1。
       2.3 检测指标外周血常规：于给药后第10天，将各组裸鼠摘眼球采血于肝素抗凝管中，血细胞自动分析仪检测血常规。
       抑瘤率计算：将各组裸鼠脱颈椎处死，依次用碘酊酒精消毒操作部位皮肤，于超净工作台上，以无菌操作从背部皮下完整剥取肿瘤组织，剥离干净后于电子天平称瘤体质量，按公式计算肉瘤系数和抑瘤率。肉瘤系数=瘤体质量/体质量。抑瘤率(% )=(1-治疗组平均瘤质量/荷瘤对照组平均瘤质量)×100%
       脾脏、肝脏、肾脏系数：无菌操作取下脾脏、肝脏、肾脏，电子天平称质量并计算脏器系数。
       3 结果
       3.1 加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型瘤块外观的影响各组裸鼠外观观察表明，各组裸鼠接种S180肉瘤7d后(给药前)皮下瘤块明显触及，各组间瘤块大小无明显差异。给药5d后荷瘤对照组瘤块生长迅速，瘤块显著增大，各给药组裸鼠与荷瘤对照组相比瘤块明显增长减慢，瘤块较小。给药10d后荷瘤对照组瘤块生长更加迅速，瘤块显著增大，瘤组织扩散增生，各给药组裸鼠与荷瘤对照组相比瘤块增长显著减缓，瘤块较小。
       3.2 加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型体质量的影响表1显示，与正常对照组比较，实验开始时各组裸鼠体重无明显差异(P>0.05)。实验结束时，与正常对照组裸鼠体质量相比，荷瘤对照组裸鼠体质量明显增大(P<0.05)。与荷瘤对照组裸鼠体质量相比，各给药组裸鼠给药后体质量均显著减小(P<0.01)。与CTX组裸鼠相比，与其合用的加味当归补血汤浓缩丸高、中、低剂量组裸鼠体质量均无显著性差异(P>0.05)。表1 对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型体质量的影响
       3.3 加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗裸鼠S180肉瘤瘤重、瘤系数的影响表2表明，与荷瘤对照组比较，CTX组裸鼠肉瘤重量和肉瘤系数均显著减小(P<0.01)。与CTX组比较，与其合用的加味当归补血汤高、中、低剂量组裸鼠肉瘤重量、肉瘤系数均有所减小，抑瘤率有所增高，但均无显著性差异(P>0.05)。表2 对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型瘤重、瘤系数的影响
       3.4 加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型脾脏系数、肝脏系数、肾脏系数的影响表3表明，与正常对照组相比，荷瘤对照组裸鼠脾脏系数显著增大(P<0.01)。与荷瘤对照组比较，CTX组裸鼠脾脏系数均显著减小(P<0.01)。与CTX组比较，加味当归补血汤高、中、低剂量组裸鼠脾脏系数均有所增大，但均无显著性差异(P>0.05)。各组间肝脏系数和肾脏系数经统计学处理均无显著性差异(P>0.05)。表3 对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠脾脏、肝脏、肾脏系数的影响　　表4 对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型红细胞数血红蛋白含量、红细胞压积的影响
       3.6 加味当归补血汤浓缩丸对环磷酰胺化疗S180肉瘤裸鼠模型肉瘤组织病理学检查的影响将所获取的裸鼠瘤组织甲醛固定包埋后切片，HE染色后观察其组织形态上的改变。图1～7表明，瘤组织病理形态学观察显示荷瘤对照组瘤细胞生长旺盛，细胞较密集或呈大片状，细胞排列紧密，核分裂数多，浸润较深，血管较丰富。CTX组裸鼠瘤细胞密度降低，瘤巨细胞减少，细胞间质显著增多，坏死严重。CTX+加味当归补血汤高、中、低剂量组裸鼠瘤细胞坏死较严重，有大量淋巴细胞、巨噬细胞浸润。
       图1 荷瘤对照组(HE，400×) 图2 CTX组(HE，400×)　图3 CTX+参芪胶囊组 图4 CTX+加味当归补血汤(HE，400×) 高剂量组(HE，400×)
       图5 CTX+加味当归补血汤 图6 CTX+加味当归补血汤中剂量组(HE，400×) 低剂量组(HE，400×)
       4 讨论
       当归补血汤出自金元时期李东垣《内外伤辨惑论》,组成为炙黄芪一两、当归二钱,功效补气生血,为治疗血虚的名方。近些年来对其抗肿瘤研究报道较多。孙玉敏[2]研究提示:①在接种肿瘤的当天应用当归补血汤可延长小鼠成瘤时间并延缓肿瘤的生长;②在肿瘤生长的早期应用也可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长;③预防及早期应用可显著延长肿瘤小鼠生存时间;④肿瘤长到一定大小单独应用当归补血汤无明显抑制肿瘤生长的作用。研究表明补益中药的抗癌作用可能在不同环节、不同程度上增强机体的抗肿瘤免疫反应，通过增强免疫细胞和免疫因子的活性，而达到间接抗肿瘤的目的。陈鹊汀[3，4]报道当归补血汤能增强5-Fu、CTX对H22小鼠的抑瘤活性,并可对抗化疗药物5-Fu、CTX所致的脾脏和胸腺的萎缩以及白细胞、血小板和骨髓有核细胞的减少等毒性反应,提示当归补血汤对免疫器官和造血系统有保护作用。汪群红[5]研究指出当归补血汤含有一定抗肿瘤成分,能有效地抑制肿瘤生长和延长荷瘤鼠的生命,有效的剂量范围在0.06 ～0.21 mg/(g·d)之间。图7 CTX+加味当归补血汤原方组(HE，400×)
       【参考文献】
         　[1] 童延清，侯火明.当归补血汤治疗贫血机制研究进展[J]. 江西中医药，2006，37(2):62.
       
       [2] 孙玉敏，宋福成，吴晓光. 当归补血汤抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的作用[J].现代生物医学进展，2006，6(9):31.
       
       [3] 陈鹊汀，刘智勤，蒋玉凤. 当归补血汤对化疗药物5-Fu增效减毒的实验研究[J].北京中医药大学学报，2007，30(11):757.
       
       [4] 陈鹊汀，刘智勤，朱惠学. 当归补血汤联合环磷酰胺抗肿瘤实验研究[J]. 第三军医大学学报，2008，30(16):1568.
       
       [5] 汪群红，项雪燕. 当归补血汤抑瘤作用的实验研究[J]. 海峡药学，2009，21(5):41.