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       【摘要】 
       目的建立扎冲十三味片的质量标准。方法采用TLC法对片剂中诃子肉豆蔻、丁香、麝香进行了鉴别;用溶剂萃取酸性染料比色法测定，以乌头碱为对照品，溴甲酚绿为酸性染料，用氯仿萃取，检测波长416 nm。结果乌头碱在0.72～14.02 mg/L范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=0.001 8X+0.305 1,r=0.999 5(n=5)，平均回收率为97.64%，RSD为1.75%(n=5)。结论所建立方法简便、准确、专属性强，可用于扎冲十三味片的质量控制。
       【关键词】  扎冲十三味片; 诃子; 肉豆蔻; 丁香; 麝香; 薄层色谱法; 草乌总生物碱; 酸性染料比色法; 乌头碱
       蒙成药扎冲十三味丸是蒙医临床最常用的传统方剂之一 ,又名嘎日迪十三 ,出自《蒙医经典》[1] ,由诃子、制草乌、麝香、珊瑚(制) 、珍珠(制)、沉香、禹粮土、磁石(煅) 等13 味药组成;主要功能为祛风通窍，舒筋活血，镇静安神，除“协日乌素”;主治半身不遂、左瘫右痪、口眼歪斜、四肢麻木、腰腿不利、言语不清、筋骨疼痛、神经麻痹、风湿、关节疼痛等症[2]。因此，临床广泛用于脑中风、脑偏瘫、小脑萎缩、肺心病及脑供血不足引起的眩晕、椎基动脉供血不足引起眩晕等多种心脑血管疾病的治疗，收到了较好的临床效果。但由于原生产工艺比较落后、质量标准仅有显微鉴别和理化鉴别，而本药中组方中既有毒性药材，又有贵重药材，还有矿物药，成分众多，仅靠上述标准，无法控制药品质量。为此我们对药品组方深入研究，制定出切实可行的质量标准。
       1 仪器与药品
       2450紫外分光光度计(日本岛津);PHS-3C酸度计(上海理达仪器厂)。乌头碱对照品(批号110720-200308，中国生物制品检定所);没食子酸对照品(批号0832-9501，中国生物制品检定所);丁香酚对照品(批号0725-200008，中国生物制品检定所);麝香酮对照品(批号0719-200006，中国生物制品检定所)所用试剂均为分析纯。扎冲十三味片为本公司正在研制的品种。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件吸收光谱的测定及检验波长的确定分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品适量，依法显色后，在200～700 nm波长处进行扫描，结果供试品与乌头碱对照品的吸收光谱完全一致，并在416 nm的波长处有最大吸收，而阴性对照品在此处无干扰，扫描结果见图1～3。故选择416 nm作为检测波长。
       2.2 对照品溶液的制备[2]精密称取105℃干燥至恒重的乌头碱对照品10mg，置100 ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升中含有乌头碱0.1mg)。
       2.3 供试液的制备取本品5片，研其粉末1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加1ml氨水润湿后，再加三氯甲烷10 ml浸泡过夜。滤过，残渣用三氯甲烷50 ml分次洗涤，10ml/次。合并滤液和洗液，以10%盐酸溶液10 ml提取1次后，再用1%盐酸溶液提取4次，10 ml/次。分取盐酸液，合并，用10 ml三氯甲烷洗涤，弃去三氯甲烷。用浓氨试液将盐酸提取液调至pH 9～10，用50 ml三氯甲烷分5次提取，合并提取液，蒸干，残渣置105℃加热1 h，取出，放冷，加三氯甲烷分次溶解，转移至25 ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。
       图1 乌头碱对照品光谱扫描图
       图2 阴性样品光谱扫描图
       图3 扎冲十三样品光谱扫描图
       2.4 阴性对照溶液的制备按照处方组成，取除制草乌以外的其他各药，按制备工艺要求制成阴性(缺制草乌)对照溶液，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。阴性无干扰。
       2.5 线性关系精密量取对照品溶液0.3，0.5，1.0，2.0，4.0 ml，分别置分液漏斗中，依次精密加入三氯甲烷至10.0 ml，再精密加入pH 3.0醋酸盐缓冲液(称取无水醋酸钠0.30g，加水使溶解，加冰醋酸11.2 ml，用水稀释至1 000 ml，摇匀，并在pH计上校正)5.0 ml，蒸馏水3.0 ml和溴甲酚绿溶液(取溴甲酚绿0.2 g，加0.05 mol/L氢氧化钠溶液3.5 ml使溶解，用水稀释至200ml，摇匀，静置过夜。滤过，用三氯甲烷洗涤3次，50 ml/次，洗后，即得)2.0 ml，强力振摇3 min，静置1 h，分取三氯甲烷层，用干燥滤纸滤过，以相应试剂为空白，续滤液照紫外-可见分光光度法(《中国药典》附录 V A)，分别在416 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，乌头碱量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：Y=0.001 8X+0.305 1(r= 0.999 5)。结果表明，乌头碱对照品在所试范围(28.74～383.3μg)内与吸光度值呈良好的线性关系。
       图4 制草乌药材光谱扫描图
       2.6 精密度实验精密量取同一供试品溶液6份，按“2.4”项下方法测定含量值。RSD=0.87%，结果表明：本法精密度较好。
       2.7 稳定性实验取显色后的同一供试品溶液，立即测定和在室温下放置，每60 min测定1次，实验结果表明，显色后室温放置6 h后测定，结果稳定。平均吸光度为0.458，RSD=0.52%。
       2.8 重现性实验取同一批号的样品5份，按供试液的制备项下制备供试液，按线性关系项下测定含量值。结果表明，本法重复性较好。平均含量为122.18，RSD=1.95%。
       2.9 加样回收实验取已知含量的样品5份，分别加入一定量的乌头碱对照品溶液，按正文含量测定方法进行测定，其平均回收率为97.64%，RSD=1.75%。
       表1 乌头碱加样回收实验结果序号样品量/g供试品含量μg对照品加入量/μg测得量/μg回收率(%)
       2.10 样品测定与含量限度的确定正文方法进行3批样品的含量测定，结果见表。表2 样品中乌头类生物碱测定结果批号样品量/g测得量/　μg含量/μg·g-1)每片中平均含量/
       2.11 扎冲十三味片鉴别[3～5]取药品4片，研碎，加甲醇10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至1 ml作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含有2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年Ⅰ部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(6∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
       取药品30片，加水50ml，提取挥发油4 h，接收油水混合物，用石油醚(30～60℃)10 ml分3次萃取挥发油，浓缩至1ml作为供试品溶液。另取肉豆蔻对照药材1 g，同法提取挥发油，得对照药材溶液0.5ml。照薄层色谱法(《中国药典》2005年一部附录VI B)试验， 吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-苯(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
       取上述供试液作为供试品溶液。另取丁香酚对照品，加乙醚制成每1 ml含16 μl的对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年一部附录VI B)试验， 吸取上述两种溶液各4 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
       取药品12片，加乙醚10 ml，冷浸过夜，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品，加乙醚制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(9∶2)为展开剂，展开，展距大于15 cm，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，晾干后，再喷1次。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
       3 讨论
       考虑到制草乌中生物碱发挥作用也是以生物总碱其作用，以乌头碱计，故酸性染料测生物总碱切实可行。
       提取方法的选择正文采用105℃加热1.0 h的方法，以除去方中其他生物碱对乌头碱试验的干扰。
       分液漏斗的活塞应选用聚四氟乙烯的，玻璃的既使通过蒸馏水试，在加氯仿时也渗漏，造成结果不准确。
       考虑到方中总挥发油中，既有比水重的，又有比水轻的，故在挥发油提取器中预先加入10 ml石油醚(60～90℃)，经鉴别效果非常好。
        
       【参考文献】
         　[1] 中国百科全书编委会. 中国医学百科全书·蒙医药[M].上海:上海科学出版社 ,1985.
       
       [2] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药标准[S].1998.
       
       [3] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1997：3.
       
       [4] 孙长荣，崔同淑.中药材理化鉴定[M].石家庄：河北科学技术出版社，1993：3.
       
       [5] 刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1990：5.