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       【摘要】 
       目的探讨丹参对高同型半胱氨酸血症(Hhcy)兔动脉粥样硬化的干预作用。方法随机将40只家兔分成对照组(A)，蛋氨酸组(B)，高脂组(C)，丹参+蛋氨酸组(D)，分别于实验0，4，8周检测各组血浆同型半胱氨酸 (Hcy)改变和病理学观察腹主动脉血管病理变化。结果B组第4，8周时血浆Hcy含量显著高于同时段A组(P<0.01);D组与B组比较，4周水平接近，8周末时低于同时段B组(P<0.01)。说明随用药时间延长,丹参干预组血浆Hcy含量上升幅度明显小于同时段蛋氨酸组。病理学变化：B组、C组腹主动脉大体观察有明显粥样斑块形成;D组与正常组比较无明显差异。结论HHcy可致动脉粥样硬化的形成，丹参具有延缓或干预其动脉粥样硬化形成的作用。
       【关键词】  动脉粥样硬化; 丹参; 高同型半胱氨酸血症
       本研究分别采用高L-蛋氨酸建立兔Hhcy血症模型和高脂饮食方法建立兔高脂血症模型，通过与对照组、丹参+蛋氨酸组形成动脉粥样斑块的比较，及各组血浆同型半胱氨酸 (Hcy)含量的比较，观察Hhcy致AS形成机制;检验丹参对Hhcy引起AS病理过程的干预效果，为Hhcy的防治、延缓或防治AS的形成，降低心、脑血管病的发生风险拓宽新思路，提供新靶点。
       1 材料与仪器
       1.1 动物筛选健康雄性中国家兔40只(由武汉万千嘉禾实验动物养殖有限公司提供)，月龄3～5个月，体质量在1.5～2.0 kg。
       1.2 药品与试剂丹参中草药购于河南省南阳市医药公司，由南阳医学高等专科学校药理教研室按比组方，经煎制、过滤、浓缩为1 g/ml (以生药汁) 丹参口服液，高压灭菌，0℃冰箱保存备用。高L-蛋氨酸购自张家港市华昌药业有限公司。Hcy试剂盒由北京九强生物技术有限公司提供。
       1.3 仪器美国GELg-9彩色多普勒超声诊断仪(TOSHIBA生产)，TBA-120FR生化分析仪，TU-1810紫外分光光度计，Bio-rad680酶标仪，(2/2)VI普通Ⅰ类B型脱水机，孝感宏业TS-12L，日本原装进口(1/2)JVCTK-C921EC显微镜摄像机，日本原装进口OLYMPUSCX31显微镜，德国原装进口mICROMGMBH Hm200切片机，CS-摊片机。
       2 方法
       2.1 动物分组实验动物以标准饲料适应性喂养1周后，随机分为4组，即：对照组(A)，蛋氨酸组(B)，高脂组(C)，丹参+蛋氨酸组(D)。每组10只。A组：喂标准饲料+等量的生理盐水灌胃;(B)组：喂蛋氨酸饲料，即标饲+蛋氨酸0.1 g/(kg·d)用蒸馏水稀释灌胃;(C)组：喂高脂饲料(标饲+2%胆固醇+5%猪油)+等量的生理盐水灌胃;D组：所喂饲料同蛋氨酸组,同时给予丹参口服液3.3 g/(kg·d)灌胃。各组动物饲料按每天100 g/只计算，分笼喂养，自由饮水，隔周称重，调整给药量，连续喂饲8周。上述各组兔均限食量,每兔每日100 g。
       2.2 Hcy含量检测分别于喂药的第0，4，8周末时，自兔耳缘静脉采血2 ml，离心后用循环酶法检测血浆Hcy含量。
       2.3 病理观察实验第8周末,颈动脉放血处死动物。立即取降主动脉至腹主动脉分叉处血管， 10%甲醛固定、取材、脱水、血管横断包埋、石蜡切片、HE染色、光镜观察。
       2.4 统计学分析各组数据用±s表示,并用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间进行F检验判定，P<0.05有统计学意义。
       3 结果
       3.1 各组家兔血浆Hcy含量的变化0周时各组血浆Hcy含量分布符合正态分布，其95%的可信区间为16.67～22.44 μmol/L(即正常参考值)，超过此值上限确定为兔高同型半胱氨酸血症(Hhcy)。B组在第4周、8周末时Hcy均显著高于同期对照组(P<0.01);C组两时段Hcy含量均与A组接近无显著差异;D组与B组比较, 4周Hcy水平接近，8周末时低于同时段B组(P<0.01)。说明随用药时间延长,丹参干预组血浆Hcy含量上升幅度明显小于同时段蛋氨酸组。实验期间各组家兔一般情况良好，B组有2只，C组1只死亡。结果见表1表1 各组家兔血浆Hcy含量比较
       3.2 各组家兔腹主动脉血管病理变化大体观察：沿腹主动脉管壁剪开，A组、D组动脉内膜无明显斑块形成，B组、C组可见内膜不规则隆起斑块。
       镜下观察：A组无粥样斑块形成;血管内膜薄而光滑，与外膜平行，连续性好，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁厚薄均匀(见图1)。B组：血管内膜明显增厚，斑块突出于内膜面，内膜下大量排列不规则平滑肌细胞，中层结构紊乱，斑块深部的泡沫细胞有变性坏死、崩解，形成细颗粒状粥糜状物质，中膜变浅，浅层肌纤维分离断裂(见图2);C组腹主动脉血管形成典型粥样斑块病变,由富含大量泡沫细胞的表层及相对纤维化的内层构成(见图3);而D组血管内膜光滑，有轻度增厚，内膜下有少许含脂质的泡沫细胞，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁厚薄均匀(见图4)。
       4 讨论
       4.1 HHcy兔模型制备成功本研究给家兔喂食高蛋氨酸饲料，实验第0，4，8周时测定血清Hcy水平，4，8周时蛋氨酸组血清Hcy含量均显著高于同时段对照组，表明兔Hhcy模型制备成功。腹主动脉组织学观查，血管内膜明显增厚，中层结构紊乱，有细颗粒状粥糜样物质及斑块形成，均为动脉硬化的改变，进一步证实，Hhcy可引起动脉血管发生病理改变，是致动脉粥样硬化的独立危险因素。图1 A组血管(HE染色，40×) 图2 B组血管(HE染色，40×)图3 C组血管(HE染色，40×) 图4 D组血管(HE染色，40×)
       4.2 Hhcy致动脉粥样硬化的机制Hhcy致动脉粥样硬化的机制目前尚未完全阐明，可能与血管内皮损伤和功能失调、刺激血管平滑肌增殖、促进血小板聚集、破坏体内凝血与纤溶之间的平衡等因素有关[1,2]。实验结果提示，Hhcy家兔体内氧化应激增强，Hcy是多功能损伤因子，其分子中含自由的巯基，在自身氧化生成同型胱氨酸的同时，生成多种强氧化产物(如H2O2、氧自由基等)，造成血管内皮细胞的损伤和强烈的毒性作用，而且Hcy的升高可抑制SOD的表达和分泌，导致内皮细胞抗氧化机制受损，并加强了超氧自由基介导的NO灭活作用，引起内皮细胞功能失调，破坏细胞的完整性，使血管内皮细胞骨架结构发生变化，Hcy还能促进脂蛋白的沉积，并被巨噬细胞吞噬形成泡沫细胞，加速低密度脂蛋白氧化，损伤血管内皮细胞，引起动脉粥样硬化斑块形成。
       4.3 丹参能干预Hhcy兔动脉粥样硬化的形成本研究丹参+蛋氨酸组病理观察无明显斑块形成，考虑机理一是可能是丹参能增强纤溶酶的活性，促进纤维蛋白溶解，调节Hhcy兔体内凝血与纤溶之间的平衡等因素有关;二是丹参有消除有害自由基，防止或减轻脂质过氧化反应[3]。
       【参考文献】
         [1] 吴军民，王彤歌.同型半胱氨酸血症和脑卒中[J].医学综述，2001,7(11)：677.
       
       [2] 刘 娜，张书平，曹治寰，等.高同型半胱氨酸血症对老年人血管疾病的影响[J].临床荟萃，2003，18(19)：1139.
       
       [3] 董春桃.丹参药理作用与临床应用进展[J].山西医药杂志，2007，1(1)：54.