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       【关键词】  砂仁；,,去甲肾上腺素；,,氯化钾；,,胸主动脉
       摘要：目的研究砂仁提取液对兔离体胸主动脉血管条的作用。方法采用家兔离体胸主动脉血管条，以不同浓度去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)为刺激剂，观察砂仁提取液对其量效曲线的影响；以NE为血管收缩刺激剂，观察砂仁提取液对内钙释放与外钙内流的影响。结果砂仁提取液使NE与KCl的量效曲线明显右移，最大反应性降低，对KCl量效曲线的抑制作用强于NE；在无钙Kerbs液中，砂仁提取液浓度依赖性抑制NE诱导的内钙释放所诱导的血管收缩反应，对复钙后NE所致的血管持续收缩具有抑制作用的趋势。结论 砂仁提取液可舒张兔主动脉条，该作用可能与钙离子拮抗有关，且对主动脉依内钙性收缩的敏感性大于依外钙性收缩；对电压依赖钙通道的拮抗作用强于受体操纵的钙通道。
       关键词：砂仁；  去甲肾上腺素；  氯化钾；  胸主动脉
       Effects of Amomum Villosum Extraction on the Contraction of Rabbit Thoracic Aorta in vitro
       FENG Guangwei, TAO Ling, SHEN Xiangchun*, HAO Ming, PENG Jiao
       （Guiyang Medical College, Guiyang 550004 ，China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate effects of Amomum villosum extraction (AVE) on contraction of rabbit thoracic aorta in vitro.MethodsThe isotonic contraction of the thoracic aorta strips in rabbits was recorded, and the effects of AVE on the concentrationresponse curves of noradrenalin, high potassium was observed. The procedure of freeCa2+ kerbs and Ca2+ addition were designed to indirectly observe the effects of AVE on intracellular free Ca2+ stimulated by NE.ResultsAVE shifted the concentration-response curves of NE and KCl, and the maximum responses decreased. In Ca2+- free medium, AVE concentration-dependently inhibited the transient induced by NE and it was tended to inhibit the longlasting contraction induced by addition of Ca2+.ConclusionAVE has significant relaxing effect on the contraction of thoracic aorta strips. The effect may be due to the inhibition of the calcium channel of aortic smooth muscle. AVE shows relatively less effect on the extracellular Ca2+dependent. than that on the intracellular Ca2+dependent contraction, and more against effects on potential dependent Ca2+ channel than receptors operated channel.
       Key words：Amomum Villosum Extraction；  Noradrenalin；  KCl；  Thoracic aorta
   
　　中药砂仁为姜科植物阳春砂 Amomum villosum Lour.，绿壳砂 Amomum villosun Lour.var. xanthioides T.L. Wu et Senjen 或海南砂 Amomum longiligulare T.L.Wu的干燥果实，目前《中国药典》收载的砂仁共有3种，具有化湿开胃，温脾止泻，理气安胎的功效［1］；同时砂仁也是我国民间常用的重要香料物质。国内外对砂仁进行了大量的研究，但砂仁化学及药理活性成分研究并不同步。目前研究多集中于挥发油的药理作用［2，3］以及砂仁对胃肠道的作用［4］，由于中药临床多以水煎煮入药，其挥发油摄入量很难达到成分研究时的控制水平。现代的研究资料提示，理气药大多具有一定的心血管活性，其活性成分与黄酮类或异黄酮类物质相关［5］。吴师竹［6］研究发现，砂仁水煎液对花生四烯酸、胶原与肾上腺素混合剂所诱发的小鼠急性脑缺血具有显著的保护作用，孙兰等［7］从砂仁水溶液成分中提取出黄酮醇与黄酮苷类化合物、Kitajima由70%甲醇提取物中得到3个单萜类化合物与1个辛烷呋喃［8］，此外亦有砂仁中含有皂苷与有机酸的报道［9］，而这些成分的活性未见明确文献报道。因此，本研究主要目的是研究砂仁水提取物对离体家兔主动脉平滑肌的作用。
       　　1  材料与方法
       1.1  动物   新西兰大耳白兔，体重2.5～3.5 kg，雌雄兼用，由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)20022001。
       1.2   砂仁提取液制备 砂仁种子团40 g，破碎，加入500 ml的水，浸泡3 h，水浴回流提取3 h，放置过夜，滤纸过滤除去不溶物质，用无菌滤器除菌后作为砂仁提取液，4℃冰箱放置(砂仁提取液浓度为4 g/ml)。
       1.3   主要试剂  去甲肾上腺素(NE，上海禾风制药有限公司)；Kerbs液成分(mmol/L)： NaCl 118.2，KCl 4.7，KH2PO4 1.3，MgSO4 1.2，NaHCO3 25，CaCl2 2.5，葡萄糖 11.7，(pH=7.4)，无钙Krebs液(不含CaCl2，并加入EGTA 0.5 mmol/L)，其它同正常Krebs液。其余试剂均为国产分析纯。
       1.4   标本制备2.5～3.5 kg的家兔，雌雄不拘，用木锤将其击昏并经颈动脉放血后，迅速取出胸主动脉，剥去周围结缔组织，并用棉签擦去内皮，剪成约长2 cm，宽0.3 cm的螺旋条，两端结扎，下端接标本板，悬吊于含10 ml kerbs液的恒温(37土0.5)℃浴槽中，上端接肌张力换能器，持续通以5%CO2和95%O2的混合气体，加前负荷约2 g，20 min换液1次，稳定3 h后给药，用BL420系统记录肌张力变化，经实验预示后确定实验中所用药物的最佳剂量。实验所用药物浓度按最终浴槽中浓度计算［10］。
       1.5  去甲肾上腺素(NE)量效曲线的制备及砂仁提取液干预 标本平衡后，给予NE 1×10-5 mmol・L-1，待动脉条收缩至坪值后冲洗，平衡1h后，以同法加入同量的NE，重复数次至收缩高度前后两次基本不变，视为动脉条收缩已经稳定，平衡1h后，在浴槽中按0.5对数递增加入NE，1×10-8～1×10-5 mmol・L-1，求得对数量效曲线，然后用Kerbs液反复冲洗，平衡1 h使血管张力达到给药前水平，依次加入砂仁提取液至终浓度为 0.1，0.2，0.4 g/ml，孵育5 min后再以同法加入NE，作量效曲线［10］。
       1.6   高钾量效曲线及砂仁提取液干预先用KCl 50 mmol/L作为血管收缩剂，观察动脉条收缩反应的稳定性，方法同上。然后在浴槽中按0.2的对数递增加入KCl(10～100 mmol/L)，给药后可见血管条呈剂量依赖性收缩，以此为对照。再反复冲洗并平衡1h后，依次加入砂仁提取液，经浓度同1.5，孵育的后5 min后再以同法加入KCl，作量效曲线［11］。
       1.7   砂仁提取液对NE在无Ca2+液中及复Ca2+后的缩血管效应［12］判断动脉条收缩反应稳定性的方法同去甲肾上腺素量效曲线实验。平衡1 h，用无Ca2+ Kerbs液冲洗，稳定3 min，再加入NE 1×10-6 mmol/L，可见动脉条产生迅速而短暂的收缩。待其舒张平稳后，累积加入CaCl2 1.1，2.2 mmol/L。可见随Ca2+ 浓度增加，动脉条再次收缩并达峰值，此为药前对照。然后用正常Kerbs液反复冲洗，平衡1h，加入无钙Krebs液同时加入不同浓度砂仁提取液，稳定5 min，重复上述实验。实验结束前再做一次无Ca2+ NE收缩对照，将收缩高度与给砂仁提取液前基本一致的收入统计资料。
       1.8   统计学方法所有数据资料用SSPS10.0统计软件包进行处理，各组间均数比较用单因素方差分析、实验组与对照组组间均数比较用独立样本t检验。
       　　2  结果
       2.1   砂仁提取液对NE缩血管量效曲线的影响　加入砂仁提取液 0.1，0.2，0.4 g/ml后，去甲肾上腺素量效曲线明显呈浓度依赖性向右下移，最大反应变小(图 1)，随砂仁提取液剂量的增加，其抑制作用越强，最大收缩幅度降低为(85.56±6.72,81.06±5.84,69.58±8.30)，与去甲肾上腺素组比较，差异显著(P＜0.01)。
       图1  砂仁提取液对NE诱导血管收缩量效曲线的影响(略)
       2.2  砂仁提取液对高钾去极化所致主动脉收缩血管量效曲线的影响砂仁提取液 0.1，0.2，0.4 g/ml使高钾引起的主动脉最大收缩幅度明显下降，高钾量效曲线显著右移，最大收缩幅度分别降低(82.66±8.45,62.86±6.17,43.92±6.00)，结果见图2。
       图2  砂仁提取液对高钾去极化所致主动脉收缩血管量效曲线的影响(略)
       2.3  砂仁提取液对NE在无Ca2+液中及复Ca2+后缩血管效应的影响 在无Ca2+ Krebs液中，1×10-6 NE对血管收缩率(%)为(59.54±4.72)；0.2 g/ml砂仁提取液使其收缩率降为(34.99±14.23，与NE组比较，P＜0.05)；0.4 g/ml砂仁提取液使其收缩率降为(22.22±14.99，与NE组比较，P＜0.01)；其结果提示砂仁提取液对NE诱导内钙释放所致的短暂收缩有显著的抑制作用。复Ca2+后，NE诱导的血管收缩，主要是由于受体操纵的Ca2+通道开放，使外钙内流。本实验结果提示，内钙释放在血管收缩占主导地位(内钙: 59.54±4.72,外钙：40.46±4.73)，砂仁提取液对外钙内流具有一定的作用趋势，结果见图3。
       图3   砂仁提取液在无钙与复钙液中对去甲肾上腺素诱导主动脉收缩的影响(略)
       　　3  讨论
       砂仁所含化学成分复杂，具有多种生物活性。近年来，国内外学者分别从不同角度对其药理作用、生物活性及临床方面作了较为深入的系统研究，进一步阐明了化学成分和临床应用的联系，这对指导临床用药和新药开发是非常有必要的。但对砂仁的研究也存在以下问题：对主要化学成分的药理活性研究还不够深入，有关药理活性的作用部位和物质基础不甚明确，有效成分及作用机理未能揭示。现代药理研究证实，大量的行气止痛的药物中黄酮、异黄酮、皂苷等是其主要的心、脑血管活性物质［13,14］，而砂仁中含有大量的该类物质，因此本实验主要研究其对血管平滑的影响。血管平滑肌的兴奋去极化过程主要依赖Ca2+跨膜内流［15］。血管平滑肌细胞膜上有两类Ca2+通道，即：电压依赖性Ca2+通道(potential dependent Ca2+ channel,PDC)和受体操纵的Ca2+通道(receptor operated channel)，对血管的舒缩活动起重要作用。高K+除极时，膜上电位依赖性钙通道PDC开放，Ca2+顺电化学梯度流人细胞内，引发平滑肌收缩［16］。α1受体激动剂通过α1受体激动与其偶联G蛋白激活磷脂酶C(PLC)，后者水解磷脂酰肌醇4,5二磷酸(PIP2)，生成两种第二信使，即1,4,5磷酸肌醇(IP3)和二酰基甘油(DAG)［17］，发挥第二信使作用，促Ca2+自肌浆网释出，胞内游离Ca2+水平提高，Ca2+与平滑肌胞浆内钙调素(calmodulin)结合成复合物进而使肌球蛋白轻链激酶活化，促使肌球蛋白轻链磷酸化，引发肌动蛋白和肌球蛋白相互作用，产生平滑肌收缩［18］。本研究结果证实，砂仁提取液对KCl、去甲肾上腺素引起的主动脉条收缩有明显的抑制作用，而且使量效曲线明显右移，最大反应性降低，呈非竞争性拮抗效应，表明其对主动脉条具有一定的松弛作用；实验结果提示，等量的砂仁提取液对高钾诱导的血管收缩作用强于HE诱导的血管收缩作用。在无钙Kerbs液中HE引起的第一相收缩，是其引起细胞内Ca2+释放所致，在第一相收缩的基础上加入Ca2+，产生进一步收缩，则主要是能促进细胞外Ca2+经ROC内流的结果，砂仁提取液显著抑制内钙释放诱导的第一相收缩，对受体操纵Ca2+诱导的外钙内流所产生的第二相收缩作用相对较弱，说明其对主动脉依内Ca2+性收缩的敏感性大于依外Ca2+性收缩。以上3个实验的结果提示，砂仁提取液对电压依赖的钙通道的作用强于受体依赖的钙通道。综上所述，砂仁提取液对兔主动脉条的收缩有抑制作用，该作用与钙离子密切有关，但作用机制比较复杂，其主要是通过抑制平滑肌细胞膜电压依赖Ca2+通道与内钙释放而发挥作用，对受体操纵的Ca2+通道也具有一定的抑制作用。其作用机制复杂的原因可能与本研究采用的砂仁提取液为粗提物有关，因此，有必要进一步研究其单一的活性物质成分，阐明砂仁作用的物质基础。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：177.
       ［2］  吴  敏, 李  战, 谈  珍. 砂仁挥发油纳米脂质体对厌食模型动物胃肠功能的影响［J］.上海中医药杂志，2004，38(10)：5.
       ［3］  吴哓松,李晓光,肖  飞, 等. 砂仁挥发油中乙酸龙脑酯镇痛抗炎作用的研究［J］.中药材，2004,27(6)：438.
       ［4］  朱金照,桂先勇,冷恩仁.中药砂仁提取液对胃肠激素的影响［J］.华西药学杂志，2001,16(6)：417.
       ［5］  马佳佳,马  恒,王跃民, 等. 葛根素对大鼠腹主动脉的舒张作用及其机制［J］.第四军医大学学报 ，2003,24(24)：2231.
       ［6］  吴师竹.砂仁对血小板聚集功能的影响［J］. 中药药理与临床 1990, 6(5)：32.
       ［7］  孙  兰, 余竞光, 周立东, 等. 中药砂仁中的黄酮苷化合物. 中国中药杂志2002,27(1)：36.
       ［8］  Kitajima J, Ishikawa T. Water-soluble constituents of Amomum seed［J］. chem Pharm Bull 2003,51(7): 890.
       ［9］  胡玉兰,张忠义,林敬明.中药砂仁的化学成分和药理活性研究进展［J］.中药材，2004, 28(1)：72.
       ［10］  Yang WM, Shen ZQ, Chen ZH, et al. Effects of copper aspirinate on contraction of isolated rabbit aortic strips［J］.Acta Pharmacol Sin 2001,22(2)：121.
       ［11］  Liu Y, Liu WW, Li ZW. Coparison of effects of four vasodilators on contractions induced by norepinephrine, KCl, and CaCl2 in isolated rabbit aortic strips［J］. Acta Pharmacol Sin, 1988;9(3)：237.
       ［12］  Ghayur MN,Gilani M, Gilani AH. Ginger lowers blood pressure through blockade of voltage-dependent calcium channels［J］.J Cardiovasc PharmacolTM 2005;45(1)：74.
       ［13］  Matsumoto T, Kobayashi T, Kikuchi, et al. Effects of dual-action genistein derivatives on relaxation in rat aorta［J］. J Smooth Muscle Res 2005,41(1)： 23.
       ［14］  张志军,江文,万群. 人参皂甙Rg1扩张兔基底动脉作用及其机制［J］.心脏杂志，2003,15(4)：313.
       ［15］  Karaki H, Ozaki H, Hor M. Calcium movements, distribution and functions in smooth muscle ［J］.Pharma Rew 1997,49(2)：157.
       ［16］  Lim DY, Lee ES, Park HG, et al. Comparison go green tea extract and epigallocatechin gallate on blood pressure and contractile responses of vascular smooth muscle of rats［J］. Arch Pharm Res 2003, 26(3)：214.
       ［17］  王会玖,黄燮南,蒋青松, 等. 萘哌地尔衍生物BWYJ扩张血管效应及其机理研究［J］.中国药理学与治疗学 ，2004,9(12)：139.
       ［18］  黄先菊,罗顺德. 莲心碱对家兔主动脉条收缩性能的影响［J］.中国药学杂志，2005,40 (2)：109.
       (贵阳医学院，贵州 贵阳  550004)