文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的探讨益气养阴消癥通络中药对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响，以分析其对糖尿病肾病治疗作用机理。方法将SD大鼠随机分为6组：肾切组，模型组，厄贝沙坦组，中药低、中、高剂量组，按各组相应药物剂量灌胃。于第6周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(U Pro)量及肾功能水平;肾皮质丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果厄贝沙坦、中药低、中剂量组与模型组比较Upro量、MDA含量显著下降(P<0.05)，SOD活性显著升高(P<0.05);各治疗组与模型组比较肾功能明显改善(P<0.05)。结论益气养阴消癥通络中药可能通过抑制氧化应激反应，发挥对糖尿病大鼠的肾脏保护作用。
       【关键词】  益气养阴消癥通络中药; 糖尿病肾病; 氧化应激
       Protective Effects of Supplementing “Qi” - Nourishing “Yin” and Disperse Blood Stasis - Dredge Collateral Herbs on Kidney of Diabetic Rats
       ZHAO Wenhong1,CHEN Zhiqiang1*, SUN Yufeng2, ZHANG Jianghua3，WANG Yuehua1,SHANG Yaru1
       (1. TCM Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,Hebei,China;2. The Second Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000,Hebei,China;3. Research Station of Chinese Combined with Western Medicine, Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,Hebei,China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of supplementing “qi” - nourishing “yin” and disperse blood stasis - dredge collateral herbs on oxidative stress in the kidney of diabetic rats and its mechamisms. MethodsSD rats were randomly divided into 6 groups:Nephrectomy group,model group,irbesatan group, TCM low dose group, TCM middle dose group,and TCM high dose group,and were adminstered with the medicine respectively. In the sixth week, 24 h urine protein (U Pro),renal function,the content of MDA,and the activity of SOD were detected. ResultsIn irbesatan, TCM low dose and middle dose groups, the levels of UPro and MDA were significantly decreased(P<0.05) ,and the activity of SOD was significantly enhanced as compared to model group (P<0.05). In all treated groups renal function was also improved(P<0.05). ConclusionSupplementing "qi" - nourishing "yin" and disperse blood stasis - dredge collateral herbs can protect the kidney of diabetic rats effectively by anti- oxidative stress.
       Key words： Supplementing "qi" - nourishing "yin" and disperse blood stasis - dredge collateral herbs ; Diabetic nephropathy ; Oxidative stress
       糖尿病肾病(DN)已成为糖尿病严重微血管并发症之一，目前认为氧化应激与DN密切相关[1]，氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生过多，氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致组织损伤。活性氧簇(ROS)可通过诱导多条信号通路及细胞因子的表达，最终引起细胞外基质(ECM)大量积聚，导致肾小球硬化的发生，可见抑制氧化应激反应可有效减轻糖尿病肾损害。益气养阴消癥通络法为我们治疗DN的基本法，用之临床疗效显著[2]。本实验旨在研究益气养阴消癥通络中药对氧化应激的干预作用，以探讨其临床疗效作用机理。
       1 材料
       1.1 药物及试剂链脲佐菌素(STZ，美国Sigma公司，S01303)。益气养阴消癥通络中药(黄芪、熟地、茯苓、地龙、水蛭、鳖甲、积雪草、丹参、大黄、砂仁)生药由河北医科大学附属中医院提供，中药汤剂由本实验室制备，浓缩至含生药1 g·ml-1，分装灭菌，4℃保存备用。厄贝沙坦片(安博维)，150 mg/片，杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司生产，批号0809155。SOD、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
       1.2 动物及模型制备SD大鼠110只，雄性，SPF级，体质量(250±20)g，由河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证编号：905042。大鼠适应性饲养1周后，分别测定血糖、尿蛋白阴性后行左肾摘除术。2周后除肾切组外，剩余大鼠腹腔注射STZ(40 mg·kg-1·d-1)1次，72 h后3次连续测血糖均≥16.7 mmol·L-1为糖尿病大鼠。
       2 方法
       2.1 分组及给药动物随机分为肾切组，模型组，厄贝沙坦组，中药低、中、高剂量组。厄贝沙坦组大鼠给予厄贝沙坦15 mg·kg-1·d-1灌胃，中药低、中、高剂量组大鼠分别给予中药5.29，10.58，21.16 g·kg-1·d-1灌胃，余组给予等剂量生理盐水灌胃(本实验药物剂量换算按体表面积换算[3])。实验期间每天测量1次尾静脉血糖，血糖≥26.0 mmol·L-1的大鼠皮下注射适量长效胰岛素(0.5~4 U)，使血糖维持在16.7 mmol·L-1以上，并避免酮症减少死亡。于第6周末收集24 h尿液，双缩脲法检测各组大鼠24 h尿蛋白(UPro)量，称体质量，股动脉采血，全自动生化分析仪(美国贝克曼公司)检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;处死大鼠，右肾称重，分离皮髓质，肾皮质液氮速冻后存放于-70℃冰箱，备用。肾皮质组织匀浆及MDA、SOD测定均按试剂盒说明书方法进行操作。
       2.2 统计学处理数值采用±s表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用t检验，由SASv8统计软件分析。
       3 结果
       3.1 实验大鼠一般状况比较肾切组大鼠精神良好，饮食正常，反应灵敏，皮毛光泽，肌肉丰满，粪便呈麦粒状，尿量正常。其余组注射STZ后，均出现明显的多饮、多食、多尿症状，并逐渐出现精神萎靡，反应迟钝，少动抱团，其中12只大鼠血糖未达标准，剔除。上述症状以模型组最为显著。治疗期间造模各组均有大鼠死亡情况，其中中药低剂量组死亡3只，中药高、中剂量、厄贝沙坦组各死亡4只，模型组死亡10只，死亡原因估计为高血糖引起的代谢紊乱，最终导致多脏器衰竭。
       3.2 一般指标及生化指标比较与肾切组比较，模型组、各治疗组体质量均减轻(P<0.01，P<0.05);厄贝沙坦组肾重减轻(P<0.01)，其余各组肾重无统计学意义(P>0.05);模型组、各治疗组肥大指数升高(P<0.05);U Pro升高(P<0.05);模型组Scr、BUN值升高(P<0.01)，各治疗组Scr值无统计学意义(P>0.05)，BUN值升高(P<0.01)。结果见表1。
       与模型组比较：中药低、高剂量组体质量增加(P<0.01)，厄贝沙坦、中药中剂量组无统计学意义(P>0.05);中药高剂量组肾重增加(P<0.05)，其余治疗组肾重无统计学意义(P>0.05);厄贝沙坦、中药低剂量组肥大指数下降(P<0.05)，其余治疗组肥大指数无统计学意义(P>0.05);厄贝沙坦、中药低、中剂量组U Pro下降(P<0.05)，中药高剂量组U Pro无统计学意义(P>0.05)，厄贝沙坦、中药低、中剂量组之间无统计学意义(P>0.05);各治疗组Scr 值下降(P<0.05)，中药低、高剂量组BUN值下降(P<0.05)，余组BUN值无统计学意义(P>0.05)。见表1。
       3.3 肾皮质MDA含量、SOD活性比较与肾切组比较：模型组、各治疗组MDA含量升高、SOD活性下降(P<0.05);与模型组比较：厄贝沙坦、中药低、中剂量组MDA含量下降、SOD活性升高(P<0.05)，中药高剂量组两项指标均无统计学意义(P>0.05);厄贝沙坦、中药低、中剂量组之间两项指标均无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。
       4 讨论
       中医认为糖尿病肾病(DN)的病机特点为气血阴阳、五脏亏虚，淤血、痰湿、浊毒内生，淤阻脉络而致气滞血淤，久酿成癥瘕[4]，发为本病。其中以气阴两伤为发病基础，淤阻肾络致癥瘕贯穿本病始终，故拟益气养阴消癥通络法为治疗DN的基础方法，其中黄芪、茯苓、熟地气阴双补、利水消肿;丹参、地龙、水蛭、鳖甲共奏活血化淤、消癥通络之效，鳖甲兼具滋阴之功;大黄同煎可行血中淤滞，与积雪草同用又可清热燥湿化浊，砂仁行胃化湿以助药力，全方攻补兼施，以通为主，用之临床，疗效可靠。我们前期也做了一些相关的临床和实验研究，证明此方可延缓DN的病程进展[5～8]。表1 各组体质量、肾重、肥大指数、24 h尿蛋白、肾功能水平比较　表2 各组肾皮质MDA含量、SOD活性水平比较
       研究表明高血糖症、糖基化终末产物、细胞因子(如TGF-β1、TNF-α等)、血管紧张素II等可诱导肾脏内的氧化应激反应，导致ROS增多[9]，ROS既可直接激活相关的转录因子(如NF-κB、AP-1等)，导致肾小球系膜细胞(GMC)增殖及ECM积聚，又可作为类似于第二信使的信号分子，激活多条氧化应激敏感性信号通路，如PKC、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPKs)等，这些通路被激活后使氧化还原敏感性丝氨酸/苏氨酸激酶信号级联活化，造成细胞损伤[10]。Kwan等[11]在培养大鼠系膜细胞时发现，在高糖环境下PKC途径与ROS之间存在着一个正反馈效应，从而加剧了DN的发生发展。p38 MAPK为MAPKs家族成员之一，激活后可通过上调TGF-β/Smad等多条信号转导途径[12，13]，导致ECM成分如ColⅣ、FN、LN增多。BMK1/ERK5亦为MAPKs家族成员，近年发现，在糖尿病病理生理状态下，ROS能够导致肾组织BMK1/ERK5蛋白水平的改变，进而促进肾小球内皮细胞、系膜细胞增殖[14，15]。可见，ROS在DN的发生发展中具有重要作用，故本研究以此为切入点，初步探析益气养阴消癥通络中药对DN的治疗作用机理。
       实验结果显示，治疗组大鼠一般状况较模型组有所改善;中药低、中剂量可显著减少糖尿病大鼠尿蛋白量(P<0.05)，中药各剂量均能改善肾功能水平(P<0.05)，与厄贝沙坦比较降尿蛋白作用相当，改善肾功能略好，但无统计学意义(P>0.05);丙二醛(MDA)为脂质过氧化产物之一，超氧化物歧化酶(SOD)为机体重要的抗氧化酶，二者联合检测可反映细胞氧化应激状态，本实验模型组、治疗组与肾切组比较肾皮质MDA含量升高，SOD活性下降，说明糖尿病时肾脏存在氧化应激反应，厄贝沙坦、中药低、中剂量对此有所缓解，可见本方对肾脏具有抗氧化作用;本实验中药低、中剂量治疗效果优于高剂量，提示中药短期干预无剂量依赖性，其长期疗效研究有待进一步完善。
       【参考文献】
         　[1] Soo Min Nam,Mi Young Lee,Jang Hyun Koh, et al. Effects of NADPH oxidase inhibitor on diabetic nephropathy in OLETF rats: The role of reducing oxidative stress in its protective property[J], diabetes research and clinical practice,2009，83:176.
       
       [2] 郭登洲，王月华，张芬芳，等.活血化淤消癥通络中药治疗糖尿病肾病76例临床研究[J].中国全科医学，2007，10(20):1692.
       
       [3] 孙敬方.动物实验方法学[M].北京:人民卫生出版社， 2001:116.
       
       [4] 戴京璋，吕仁和，赵进喜，等.糖尿病肾病中医证治[J].北京中医药大学学报，2002，25(5):65.
       
       [5] 王月华，陈志强，郭登洲，等.益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病大鼠TGF-β/Smads信号传导系统的影响[J].中草药，2009，40(4):27.
       
       [6] 郭登洲，王月华，边 东，等. 活血化淤消癥通络中药对糖尿病肾病大鼠肾组织血管紧张素转化酶相关羧肽酶表达的影响[J].中国全科医学，2008，11(5A):752.
       
       [7] 王月华，郭登洲，王彦凯，等. 活血化淤消癥通络中药对糖尿病肾病的干预作用[J].中国中西医结合肾病杂志，2009，10(4):345.
       
       [8] 王月华，郭登洲，刘晓明，等.活血化淤消癥通络中药对糖尿病肾病患者Ⅳ型胶原及层黏连蛋白的影响[J].临床荟萃，2008，23(21):1573.
       
       [9] Renu A. Kowluru，Saiyeda N. Abbas，Sarah Odenbach.Reversal of hyperglycemia and diabetic nephropathy Effect of reinstitution of good metabolic control on oxidative stress in the kidney of diabetic rats [J].Journal of Diabetes and Its Complications，2004,18:282.
       
       [10] Lee H.B，Yu M.R，Yang Y.Q，et al.Reactive oxygen species-regulated signalling pathways in diabetic nephropathy[J].Journal of the American Society for Nephrology，2003，14:S241.
       
       [11] Kwan J，Wang H，Munk S，et al.In high glucose protein kinase C-zetaactivation is required for mesangial cell generation of reactive oxygen species[J].Kidney Int，2005，68(6):2526.
       
       [12] G.Soldatos， M.E. Cooper.Diabetic nephropathy: Important pathophysiologic chanisms[J].diabetes research and clinical practice，2008，82:75.
       
       [13] Li， X. Emodin suppresses cell proliferation and fibronectin expression via p38MAPK pathway in rat mesangial cells cultured under high glucose[J]. Molecular and Cellular Endocrinology，(2009)， doi:10.1016/j.mce.2009.03.006
       
       [14] Kim YK，Bae GU，Kang JK，et al.Cooperation of H2O2-mediated ERK activation with Smad pathway in TGF-β1 induction of p21WAF1/Cip1[J].Cell Signal，2006，18(2):236.
       
       [15] Suzaki Y，Yoshizumi M，Kagami S，et al.Hydrogen peroxide stimulates c-Src-mediated big mitogen activated protein kinase 1 (BMK1) and the MEF2C signaling pathway in PC12 cells:potential role in cell survival following oxidative insults[J].JBiol Chem ，2002，277(11):9614.