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       【摘要】 
       目的探讨败酱草对离体状态下内毒素(LPS)活化Wistar大鼠腹膜巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1(IL-1)、组织纤维蛋白溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制因子(PAI)的调控作用。方法取10只健康Wistar大鼠进行腹膜巨噬细胞的提取与体外培养，以败酱草作为干预因素，测定活化巨噬细胞分泌TNF、IL-1、t-PA及PAI水平的变化。结果LPS刺激引起巨噬细胞活化后，可增加炎性细胞因子TNF、IL-1的分泌水平，同时t-PA分泌呈现上升趋势，PAI分泌水平增加显著。而败酱草能减少其分泌TNF、IL-1及PAI。结论败酱草可以明确下调活化的巨噬细胞分泌炎性因子和PAI的水平，成为预防腹膜粘连发生发展的可行手段。
       【关键词】  败酱草; 巨噬细胞; 肿瘤坏死因子; 白细胞介素-1; 纤溶酶原激活剂抑制因子
       腹膜粘连因其发病率高、治疗困难，一直是临床外科医疗过程中的难题。巨噬细胞作为机体的重要防御细胞，参与了腹膜粘连形成过程中的炎症反应、纤维蛋白沉积、溶解以及机化和浆膜修复等多个环节[1]。败酱草作为败酱科多年生草本植物，具有清热解毒、消痈排脓、祛淤止痛之功效。本研究观察了离体状态下，败酱草对LPS刺激下Wistar大鼠腹膜巨噬细胞(即活化的巨噬细胞)分泌肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1(IL-1)、组织纤维蛋白溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制因子(PAI)的变化，探讨败酱草对腹膜粘连的干预作用，从而试图寻求防治腹膜粘连的药物。
       1 材料
       巨噬细胞培养自健康Wistar大鼠10只(购自军事医学科学院实验动物中心)，雌雄各半，周龄3～4周。培养所得细胞平均分为4组， 分别为：RPMI-1640组、RPMI-1640+LPS组、RPMI-1640+败酱草组以及RPMI-1640+LPS+败酱草组。以上4组在不同反应体系中均检测TNF，IL-1，t-PA及PAI的分泌水平。
       实验所用败酱草由天津医科大学药学院提供，制作浓度为1 g生药/ml。
       2 方法
       2.1 细胞培养实验所需动物以颈椎脱臼法处死，用75%乙醇浸湿全身。然后将其仰卧四肢展开固定于鼠板上。在腹股沟区做一横切口，撕裂皮肤以完全暴露腹壁。用注射器事先抽1 ml无菌气体和4 ml预冷的4℃培养液，从腹部左侧向腹腔中注射。按揉或扣打腹壁2 min，促使巨噬细胞从腹膜的浆膜表面释放，形成细胞悬液，抽出悬液。移入离心管内1 500 r/min离心15 min液，去上清液。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液调细胞数达到1×105/ml，细胞加入96孔板，每孔细胞2×104个，共27个孔，分为3组，每组3个复孔，重复3次。LPS终浓度为10 μg/ml，反应体系200 μl;中药的生药浓度为20 mg/200μl，培养6 h，收集上清-20℃冻存，供TNF，IL-1检测用。
       2.2 检测指标及方法TNF及IL-1检测采用MTT法;t-PA及PAI-1的检测采用酶联免疫吸附双抗体夹心法。
       2.3 统计学方法计量资料以±s表示，采用方差分析进行统计学处理，P<0.05表示差异有统计学意义。
       3 结果
       巨噬细胞在LPS作用下进入活化状态，分泌TNF，IL-1 水平增加(P<0.05)，而t-PA分泌水平有增加趋势，而PAI分泌水平增加显著(P<0.05);在未活化巨噬细胞中，单独加入败酱草对其分泌TNF，IL-1，t-PA和PAI的水平没有显著影响(P>0.05);在活化巨噬细胞基础上，加入败酱草后TNF、IL-1分泌水平显著下降，同时PAI分泌水平下调(P<0.05)，但对t-PA的分泌没有显著影响。见表1。
       4 讨论
       腹腔内感染、炎症及腹膜损伤是腹膜粘连形成的重要启动因素，而巨噬细胞是参与腹膜粘连形成的主要细胞成分。腹膜损伤时，局部血管渗透性增强，伴随炎症细胞渗出，最终导致纤维蛋白基质形成。纤维蛋白基质很快机化并被含有成纤维细胞、巨噬细胞的组织代替，纤维蛋白基质连接两个受损伤的腹膜行成纤维索带[2，3]。Saba等在研究中发现，术后早期血清TNF和IL-1高水平与术后腹膜粘连程度显著相关，认为TNF和IL-1术后早期升高可作为人类术后腹膜粘连形成可靠的生物学标志[4]。本实验显示，在巨噬细胞受到LPS刺激时，即感染引起巨噬细胞活化后，炎症细胞因子TNF、IL-1分泌增加，而败酱草可以明确下调活化的巨噬细胞分泌TNF、IL-1的水平。在祖国医学中，败酱草具有清热利湿，解毒排脓，活血化淤作用，是常用的中草药之一[5]。目前发现的败酱草化学成分以三萜皂苷类居多，也有环烯醚萜类、香豆素类、甾醇类、黄酮类、挥发性化合物等[6]。有研究表明，败酱草能增强网状细胞和白细胞的吞噬能力，促进抗体形成及提高血清溶菌酶的水平，从而达到抗菌消炎的目的[7]。
       在腹膜粘连中，腹膜的机械损伤、组织缺血、感染、异物等均可导致腹膜损害，引起一系列多系统、多细胞及多细胞因子参与的反应，其中纤维蛋白的沉积和降解是腹膜粘连形成中最重要的决定因素，腹膜纤溶又在其中起关键作用[8]。当覆盖了纤维蛋白胶元的两块腹膜并列时就形成一条粘连带，因此，粘连是否形成取决于术后5～7d[9]。腹膜纤溶系统可溶解纤维蛋白胶元。但是，手术可减弱溶解纤维蛋白的酶的活性，其途径为：①降低t-PA的水平;②增加PAI的水平，从而造成腹膜之间的粘连。t-PA、PAI两者的平衡决定了纤溶酶原激活剂(PAA)的活性。本实验表明，巨噬细胞经LPS活化后t-PA分泌水平有增加趋势，而PAI分泌水平增加显著。在败酱草的作用下，虽然不能增强活化的巨噬细胞分泌t-PA的能力，但是能够显著抑制PAI的分泌增加，可在一定程度上减少腹膜粘连的发生。表1 各组巨噬细胞分泌TNF、IL-1、t-PA及PAI水平　因此，我们可以推断，在体外培养状态下，感染引起Wistar大鼠腹膜巨噬细胞活化后，炎症细胞因子TNF、IL-1分泌增加，虽然t-PA分泌有增加的趋势， PAI分泌增加显著，而成为腹膜粘连的启动细胞之一。而败酱草干预可以明确下调活化的巨噬细胞分泌炎性细胞因子，并抑制PAI的分泌水平，成为人为干预腹膜粘连发生以及纤维蛋白溶解的可行手段。
       【参考文献】
         　[1] 崔华雷，王晓晔，董 亮，等. 腹膜粘连动态过程的细胞机制研究[J]. 中华小儿外科杂志， 2007，28(9): 490.
       
       [2] Sulaiman H， Dawson L，Laurent GJ，et al. Role of plasminogen activators in peritoneal adhesion formation[J]. Biochem Soc Trans，2002,30(2): 126.
       
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       [4] Saba AA, Godziachvili V, Mavani AK, et al. Serum levels of interleukin 1 and tumor necrosis factor alpha correlate with peritoneal adhesion grades in humans after major abdominal surgery[J]. Am Surg，1998. 64(8): 734.
       
       [5] 刘贤铭. 败酱草及其混淆品的鉴别[J]. 时珍国医国药，2006，17(3): 396.
       
       [6] 张一芳. 败酱草研究进展[J]. 中药材， 2009，32(1): 148.
       
       [7] 时燕平，傅友丰. 中药三联法治疗慢性盆腔炎34例观察[J]. 中国中西医结合杂志，1997，17(2): 99.
       
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