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       【摘要】 
       目的观察益母草注射液(LHI)对高分子右旋糖酐(Dextran 500)致播散性血管内凝血(DIC)大鼠肝、肾、心、肺等器官自由基损伤的影响。方法Wistar雄性大鼠18只，随机分为益母草组、模型组和对照组(均n=6)。静脉推注10% Dextran 500(10 ml/kg)复制DIC模型(对照组以等量生理盐水代替)，6 min后，益母草组自颈静脉缓慢推注LHI(5 g/kg)，其它两组以等量生理盐水代替，40 min后，制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆，观察组织匀浆的自由基指标。结果模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆及益母草组心肌组织匀浆MDA含量显著高于对照组，益母草组各器官组织匀浆MDA含量显著低于模型组;模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆SOD活性均显著低于对照组，益母草组各组织匀浆均高于模型组，其它指标与对照组均无统计学意义。结论益母草能明显干预Dextran 500致DIC大鼠的自由基损伤。
       【关键词】  益母草; 播散性血管内凝血; 高分子右旋糖酐; 自由基; 损伤
       微循环障碍是引起器官功能障碍甚至损伤的主要因素之一。研究表明，高分子右旋糖酐(Dextran 500)在导致大鼠微循环障碍及血液流变性异常的同时，可引起大鼠肝、肾、肺等器官组织形态学损伤，可见红细胞淤滞、血栓形成及坏死[1];益母草注射液(Leonurus Hetero Phyllus injection, LHI)可明显减轻Dextran 500致播散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation，DIC)大鼠血液和淋巴微循环障碍的程度[2，3]，而器官功能障碍或损伤是DIC恶化进程中的重要事件，因此，对于DIC发展进程中器官损伤干预治疗的研究成为基础与临床的重点。本文观察LHI对Dextran 500致DIC大鼠肝、肾、心肌、肺等器官自由基损伤的干预作用。
       1 材料与仪器
       1.1 动物与分组应用Wistar大鼠10只，体质量240~300 g(中国医科院实验动物繁育中心提供)，随机分为益母草组、模型组和对照组(均n=6)。前两组以Dextran 500复制DIC模型。
       1.2 药品及仪器LHI(深圳联合制剂公司生产，批号20010715;每毫升含益母草生药5 g)，Dextran 500(瑞典Pharmacia Biotech)，戊巴比妥钠(北京化学试剂厂生产，批号20040605)，肝素钠(北京奥博星生物技术责任有限公司生产，批号001218)。WZF-50F2双道微量注射泵(浙江大学医学仪器有限公司)，FJ-200型高速分散均质机(上海标本模具厂)，Labofuge 400R型高速低温离心机(德国科峻)。
       2 方法
       2.1 DIC模型的复制所有大鼠均以2%戊巴比妥钠溶液(50 mg/kg·bw)肌注麻醉后，行颈部正中手术切口，剥离左颈静脉和右颈总动脉，插管，备注射、输液及放血用。稳定15 min后，益母草组及模型组大鼠，以10%的Dextran 500(10 ml/kg·bw)经左颈静脉缓慢匀速推注，1 min注完，复制DIC模型[2～4];6 min后，益母草组经微量注射泵由颈静脉缓慢推注LHI(5g/kg·bw，以等量生理盐水稀释);模型组输入与LHI等量的生理盐水;输液时间为5 min。对照组以等量生理盐水代替Dextran 500和LHI。
       2.2 组织匀浆标本的制备经LHI治疗或相当于治疗40 min后，分别处死动物。选择固定的肝、肾、心肌、肺组织各0.8~1.0 g，加9倍的4℃无菌生理盐水，应用高速分散均质机低温制备10%组织匀浆，应用高速低温离心机以2 500 r/min离心10 min，取上清液置于-80℃冰箱(美国热电)冷冻备测。
       2.3 指标检测应用改良硫代巴比妥酸(TBA)微量法测定各脏器组织匀浆丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(super oxidase dimutase, SOD)活性，严格按照试剂盒说明书要求进行操作(试剂盒购自南京建成生物工程研究所);各脏器组织匀浆蛋白以考马斯亮蓝法进行定量。
       2.4 统计学处理所有数据以±s表示，经SPSS 11.0统计软件包进行单因素方差分析，两组间比较用两样本均数t检验，P<0.05为具有显著性差异。
       3 结果
       3.1 大鼠各器官组织匀浆MDA含量变化模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆MDA含量均显著高于对照组(P<0.01);益母草组各器官组织匀浆MDA含量仅心肌高于对照组(P<0.01)，其它与对照组比较无统计学意义(P>0.05);益母草组各器官组织匀浆MDA含量均显著低于模型组(P<0.01或P<0.05)。结果见表1。
       3.2 大鼠各器官组织匀浆SOD活性变化见表2，给予Dextran 500后，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆SOD活性均显著低于对照组(P<0.01，P<0.05);益母草组肝、肾、心肌、肺组织匀浆SOD活性与对照组均无统计学差异(P>0.05)，且均高于模型组(P<0.01或P<0.05)。表1 LHI对DIC大鼠各器官组织匀浆MDA含量的影响　表2 LHI对DIC大鼠各器官组织匀浆SOD活性的影响
       4 讨论
       Dextran 500所导致的微循环障碍以及凝血功能紊乱是引起肺、肾、肝等多个器官功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)的主要因素之一[1]。研究表明，在Dextran 500引起DIC的发病过程中存在淋巴微循环障碍[5]，而淋巴微循环障碍在多种危重病理过程的发病机制中具有重要作用[6]，静脉推注含有不同生药浓度(2.5，5，10 g/kg)的LHI可减轻Dextran 500导致血淤/DIC大鼠的淋巴微循环障碍，增强肠系膜淋巴管收缩频率及幅度，肠淋巴流量、蛋白输出量明显升高，该作用在5，10g/kg剂量均显著，在一定范围内呈剂量效应关系[7];因此，本研究选择含有5 g/kg生药的剂量，观察LHI对Dextran 500导致DIC大鼠的抗氧化作用，扩展中药益母草的药理学作用，为DIC所致器官损伤的药物治疗提供实验依据。
       自由基损伤在细胞损伤乃至器官功能障碍的发病学中具有重要作用，减轻自由基损伤有利于器官保护[8]。因此，本研究观察了LHI对DIC大鼠各组织器官自由基指标的影响，结果表明，给予Dextran 500后，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆自由基的代谢产物MDA含量均显著升高，具有清除自由基功能的SOD活性降低，结果提示Dextran 500在引起大鼠DIC的同时，由于微循环障碍，也加重了组织细胞的缺氧以及酸性产物潴留，加速了自由基的生成，这是引起自由基产生和释放的重要原因[9];而过多的氧自由基进一步激活补体，补体系统被激活，补体活化产物(C3a，C3b，C5a等)可以刺激巨噬细胞和中性粒细胞释放细胞因子和氧自由基，后者进一步通过膜脂质过氧化作用攻击内皮细胞而加重损伤，形成氧自由基致内皮细胞损伤的连锁反应;加上氧自由基具有强氧化性，几乎可与任何细胞成分发生脂质过氧化、蛋白变性，造成细胞结构、代谢和功能的全面紊乱，从而产生细胞毒作用。输入LHI后，多个器官组织匀浆MDA的含量均显著低于模型组，SOD活性升高，结果提示LHI具有干预DIC大鼠各脏器自由基损伤的作用，有较好的抗氧化作用。究其原因，这主要是由于LHI具有改善微循环的作用，能够减轻Dextran 500导致的急性微循环障碍与血淤[2,3,7]，从而缓解细胞缺氧程度，抑制自由基释放，使机体自由基的产生与清除趋于平衡，减轻自由基对组织细胞的损伤。
       综上所述，LHI对Dextran 500致DIC大鼠的肝、肾、心、肺等器官的自由基损伤具有较好的干预作用，其机制与LHI有效改善微循环流态[2]、改善细胞缺氧状态有关，研究结果提供了新的益母草抗自由基损伤这一药理学作用的实验依据。
       【参考文献】
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