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       【摘要】 
       目的探讨急性脑梗塞患者血清b-FGF变化与血淤证的相关性。方法对来源于中国人民解放军第306医院的128例脑梗塞患者进行中医证候要素评分及血清b-FGF测定。结果血清b-FGF比较，血淤证组与非血瘀证组均无显著差异(P>0.05)。脑梗塞血淤证与血清b-FGF无明显相关(P>0.05)。结论急性脑梗塞血淤证与b-FGF无明显相关，该研究对于从细胞层面研究血瘀证的生物学基础有着重要意义。
       【关键词】  脑梗塞; b-FGF; 血淤证
       Association between Changes of b-FGF Content and Blood Stasis Syndrome in Patients with Acute Cerebral Infarction
       LI Linsen1,2,TIAN Jinzhou1,CAI Yiling3,SHI Jing2
       (1.Insititute of China Minority Traditional Medicine, Beijing,100081,China;2. Dongzhimen Hospital,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing100700,China;3. 306th Hospital , The Chinese People" s Liberation Army,Beijing,100101,China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the blood stasis syndrome (BSS) defined by traditional Chinese medicine in cerebral infarction and its correlations with b-FGF. MethodsAll subjects comprised 128 patients with acute ischemis stroke, which were based on Diagnostic Criteria for Cerebral Vascular Diseases in 2005.Diagnosis for syndromes defined by traditional Chinese medicine were made according to Diagnostic Criteria for Stroke in 1994.Patients were examined with ELISA for MMP-9 and TIMP-1 in blood serum.ResultsThe content of b-FGF had no difference between patients with BSS and CI and those patients without BSS had CI(P >0.05). There had no significant correlation between b-FGF and BSS in patients with cerebral infarction(P>0.05).ConclusionThere is significant correlationship between b-FGF and BSS in patients with cerebral infarction. This preliminary study is of importance for study in biological basis of BSS by cell levels.
       Key words：Cerebral infarction; b-FGF; Blood Stasis syndme
       血淤证(blood stasis syndrome，BSS)是一种病理生理学的诊断，各种致病因子所造成的全身或局部组织器官的损伤应激、血循环障碍等导致各组织器官水肿、炎症渗出、血栓形成是血淤证一系列的病理变化[1]。这些研究揭示血淤证是一种病理生理学的诊断，应有其物质基础，反映血淤证的指标可以是整体系统的，也可以是细胞分子及基因水平的，因此可以从细胞因子水平探讨血淤证的机制。近年来，血淤证的生物学基础研究进行了许多有益的尝试，取得了一定的进展，课题组前期的研究发现血淤证的发生与颈动脉粥样硬化(Carotid atherosclerosis，CA)有密切的关系，且血淤证与颈动脉粥样硬化斑块形态及数目存在正相关，在发生脑梗塞时，血淤证的斑块数目增加，不稳定性增高[2]。尽管前期的研究发现了血淤证与颈动脉粥样硬化的宏观关系，但其内在的微观联系尚不清楚，仍有待于进一步探讨。
       成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)是一类由FGF 基因家族编码的结构相关的蛋白质，碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)最初是由Gospodarowiz[3]于1974年从牛脑和牛的脑垂体中提取出的，因其对3T3细胞有强烈的促进增殖和有丝分裂作用而得名。研究发现bFGF在动脉粥样硬化及颈动脉粥样硬化斑块的形成中发挥了重要作用[4]。bFGF可以导致新生内膜的增厚，并且抑制凋亡，同时bFGF也是潜在的血管生成刺激物，可以刺激毛细血管的生长。因此，bFGF可以作为CA及颈动脉粥样硬化斑块的血清学参考指标之一。本研究拟探讨血淤证与脑梗塞患者血清bFGF的相关性，从细胞因子的层面进一步探讨血淤证与CA的相关性。
       1 资料
       1.1 诊断标准西医诊断标准依据1995年第四届全国脑血管病学术会议制定的《各类脑血管病诊断要点》[5]，中医诊断标准依据国家中医药管理局全国脑病急症科研协作组制定的《中风病诊断疗效评定标准》[6]及《中风病辨证诊断标准》[7]。血瘀证证候要素评分≥7分时证候诊断成立。
       1.2 纳入及排除标准 脑梗塞入标准：①符合动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞、腔隙性梗塞的诊断，并具有神经功能缺损的临床表现者;②符合中医中风病诊断;③年龄≥40岁，≤80岁;④发病1周以内的患者。排除标准：①短暂性脑缺血发作(TIA);②脑出血;③发病超过1周;④经检查证实由脑肿瘤、脑外伤、血液病等引起的卒中患者，因风湿性心脏病、冠心病及其他心脏病合并房颤，引起脑栓塞者;⑤合并有肝、肾、造血系统、内分泌系统等严重疾病及骨关节病、精神病者。
       1.3 临床资料 本研究收集的病例为2006-12～2008-01解放军第306医院神经内科住院患者。
       2 方法
       2.1 分组按疾病证候诊断将脑梗塞患者分为血瘀证组及非血瘀证组。
       2.2 血清bFGF测定入院第2天上午五点到七点间抽取脑梗塞患者肘静脉血6 ml，用促凝管收集、立即离心超净工作台分离血清，-80℃冰箱保存。所有过程均严格执行无菌操作，患者采血前均无感染及应用免疫佐剂或免疫抑制剂，所有血清标本统一存放。用酶免疫吸附(ELISA)双夹心抗体法，统一检测样本bFGF的含量。实验所用试剂盒购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司，实验在东直门医院药理实验室完成，所有操作均严格按说明书要求进行。
       2.3 中医证候要素评分 根据本研究的调查量表在患者入院第2天进行中医证候要素评分。
       2.4 统计学方法统计分析采用SPSS11.0统计分析软件。计量资料采用±s进行统计描述，采用t检验或方差分析(ANOVA)或Wilcoxon秩和检验进行比较，病因学分析采用相关性检验的方法。P≤0.05被认为有统计意义。
       3 结果
       3.1 人口学资料2006～12-2008～01期间，来源于中国人民解放军第306医院(以下简称306医院)的脑梗塞患者140例，其中资料不全1例，死亡2例、不符合纳入标准1例，血样不合格8例，最终128例完成本研究。其中男性60例，女性68例，年龄为(64.90±10.22)岁，最大年龄80岁，最小40岁，其中40～50岁14例，51～70岁65例，71～80岁49例。血瘀证组60例，非血瘀证组68例。全部病例在平均年龄(t检验)、年龄分布(χ2检验)、性别比(χ2检验)上均无显著差异(P>0.05)，从基线分析结果看，本研究的观察对象具有可比性。
       3.2 血淤证与非血淤证患者的血清bFGF比较脑梗塞患者血清bFGF比较，血瘀证组与非血瘀证组均无显著差异(P>0.05)。结果见表1 脑梗塞患者血淤证与非血淤证的血清b-FGF含量比较
       3.3 血淤证与非血淤证患者的血清MMP-9动态时点变化比较 在脑梗塞急性期的四个时点中，血淤证患者的血清b-FGF在前3 d呈下降趋势，72 h后呈升高趋势，但各时点比较无显著差异(P>0.05)。非血瘀证患者血清TIMP-1呈现升高-下降-升高的变化趋势，但各时点比较仍无显著差异(P>0.05)。结果见表2表2 脑梗塞患者血淤证与非血淤证的bFGF动态变化比较
       3.4 血清bFGF与血淤证的相关性血淤证与MMP-9的Spearman相关系数为0.072，两者无明显相关(P>0.05)。
       4 讨论
       成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)是一类由FGF 基因家族编码的结构相关的蛋白质，目前已知FGF家族至少包括24个成员。它们在一级的氨基酸序列上有30%～70%的同源性。FGF的生物学效应由4个在结构上相关的酪氨酸激酶受体介导。bFGF最初是由从牛脑和牛的脑垂体中提取出的，由155个氨基酸所组成，等电点(pI)为9.6。其基因位于人类染色体的4q25处，基因长约38 kb，共有个外显子，其间被两个大的内含子所分隔。bFGF的转录产物有4种112 kb、212 kb、317 kb和710 kb，主要表达的是317 kb和710 kb。bFG在体内分布广泛，尤其是在神经组织中含量丰富。其分布于不同部位，可呈现出不同功能。大量研究证实了VSMC增殖是动脉粥样硬化、再狭窄和肺动脉高压等多种心血管疾病的病理基础。FGF在斑块的形成中发挥了重要作用，在FGF等细胞因子的刺激作用下，SMC开始由中膜向内膜迁移，并产生Ⅰ型、Ⅲ型胶原、弹性蛋白和糖蛋白，这些蛋白构成了斑块的基质，使其结构加固[8]。bFGF的生理功能还包括：促细胞分裂、趋化、增加神经元活力、促轴突生长、抑制终末期细胞分化、诱导中胚形成、促进血管形成而加快创面愈合及促进恶性肿瘤的形成及转移、加快胶原降解，恢复凋亡细胞活力等[9]。
       本研究结果显示，脑梗塞患者血清b-FGF比较，血淤证组与非血瘀证组无显著差异。在脑梗塞急性期的四个时点中，血淤证患者的血清b-FGF在前3 d呈下降趋势，72 h后呈升高趋势，但各时点比较无显著差异。非血淤证患者血清TIMP-1呈现升高-下降-升高的变化趋势，但各时点比较仍无显著差异。此外，相关性研究结果显示血淤证与b-FGF无明显相关。以上结果提示脑梗塞血淤证与血清b-FGF无明显相关，其含量变化未显示特异性。尽管研究已证实b-FGF在颈动脉粥样硬化斑块形成中是重要的细胞因子之一，但本研究显示脑梗塞血瘀淤患者与血清b-FGF水平无相关，考虑可能由于血淤证是一个复杂的病理生理状态，再加之AS是一个复杂的疾病，其发生、发展包括了血管内皮细胞功能障碍、SMC增生、血小板和血液凝固状态异常、单核细胞和巨噬细胞浸润等因素[10]，这一病理过程中包括很多种不同的细胞因子，这些细胞因子的作用是不同的，因此仅仅从血清b-FGF水平不能反应两者间的关系。
       综观过去大量研究，结合本次研究结果，发现很多AS相关指标在脑梗塞血淤证中不存在特异性，提示从细胞层面研究脑梗塞血淤证的生物学基础具有很大难度，尽管血淤证的生物学基础研究已经取得了一定的进展，但仍然存在着很多疑问。因此，目前对于血淤证与微观指标相关性研究的探索模式有待于转向或另寻其它出路。
       【参考文献】
         　[1] 时 晶，田金洲，王永炎，等.血瘀证的生物学基础研究[J].中华中医药杂志，2006，21(6)：363.
       
       [2] 田金洲,时 晶,倪敬年，等.脑梗塞患者颈动脉斑块与血瘀证的相关性研究[J].中华中医药杂志，2007,22(3):149.
       
       [3] Gospodarovvicz D,et al. Fgf proc natl acad sci USA,1984,81:6963.
       
       [4] Li D, Mehta JL. Antisense to LOX-1 inhibits oxidized LDL-mediated upregulation of monocyte chemoattractant protein-1 and monocyte adhesion to human coronary artery endothelial cells[J]. Circulation, 2000, 275: 12633.
       
       [5] 全国第四届脑血管疾病学术会议. 各类脑血管疾病诊断要点[J].中国实用内科杂志，1997，17(5)：312.
       
       [6] 国家中医药管理局脑病急症协作组.中风病诊断与疗效评定标准(试行)[S] . 北京中医药大学学报，1996，19(1)：55.
       
       [7] 田金洲，韩明向，涂晋文，等.血管性痴呆的诊断、辨证及疗效评价标准[J].北京中医大学学报，2001，23(5)：24.
       
       [8] 陈灏珠,杨昌生.实用内科学，第12版[M].北京：人民卫生出版社，2004：1459.
       
       [9] 王素菊,曹景敏.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的生物学特性研究进展[J].医学信息,1999,12(8)：46.
       
       [10] 陈 赞,凌 锋.动脉粥样硬化相关基因的研究进展[J].中国脑血管病杂志，2005，2 (1)：39.