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       【摘要】 
       目的研究附子配伍贝母对大鼠心、肝、肾功能和形态学的影响。方法取健康SD大鼠40只随机分为正常组(A组)、附子组(B组)、贝母组(C组)、附子与贝母合用组(D组)，每组10只。各组每日分别按2.5 g/kg灌胃给予生理盐水、附子煎液、贝母煎液、附子与贝母混合煎液，给药组浓度均为200 g/L。第14天停药，称重，采集心脏、肝脏及肾脏标本，计算体质量增长率及心、肝、肾脏指数并观察其形态学改变;心脏取血，测定各组血清LDH，CK，AST，ALT，BUN，Cr含量。结果 体重增长率、肝脏指数各组间均无显著差异;心脏指数D组比A、B、C组有显著升高，肾脏指数D组比C组有显著升高;形态学方面各给药组心肌、肝脏、肾脏均可见不同程度的损伤;AST、ALT的变化各组间无显著性差异，和A组相比，各组LDH明显升高，B组、D组BUN、Cr明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论 给药剂量为2.5 g/kg时，单用附子、贝母对大鼠均有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性;附子与贝母配伍用药后对大鼠心、肝、肾脏毒性较单用组明显提高。
       【关键词】  附子; 贝母; 中药; 十八反; 毒理学
       “十八反”是中药药性理论的重要组成部分，是中医界沿袭数千年的用药禁忌，为历代医家所推崇，目前仍被《中国药典》和各类教科书所遵循。但近年也有学者报道，部分相反、相畏中药在临床实践中使用后并未发现明显毒副作用，反而有相反相成的作用。因此，“十八反”也是现代药性理论研究争议的焦点问题。目前关于半蒌贝蔹及攻乌的研究较多[1～4]。附子(Radix Aconiti lateralis Preparata)为毛莨科植物乌头(Aconitum carmchaeli Debx)的子根加工品，朱林平[5]认为附子与乌头同出一源，故其也不宜与此5味药物配伍。
       本实验通过观察附子与贝母(Fritillary)单用及配伍应用后大鼠体重增长率的变化、心、肝、肾脏器指数及形态学改变，检测心肌酶谱、肝功能、肾功能部分生化指标，从而对附子与贝母配伍是否具有毒性及毒性作用的靶器官进行探讨。
       1 材料
       1.1 动物健康雄性SD大鼠，SPF级，体质量180～200 g，购自华中科技大学同济医学院实验动物学部，合格证号scxk(鄂)2004-0007。
       1.2 仪器及设备BM-Ⅷ生物组织包埋机、冷冻台(孝感市宏业医用仪器有限公司);DMR+Q550型病理图像分析仪(德国Leica公司);日本Olympus万能显微镜;日立7179全自动生化分析仪。
       1.3 药物白附片、贝母，购自河南省宛西制药股份有限公司仲景大药房，由南阳医学高等专科学校生药学袁国卿副教授鉴定。附子单煎40 min，贝母单煎20 min，附子与贝母配伍用药时先将白附片煎20 min后加入贝母合煎20 min。药物浓度均为200 g/L，晾凉后置于冰箱冷藏室中备用。
       1.4 试剂LDH(乳酸脱氢酶，批号：071121)、CK(肌酸激酶，批号：080391)、ALT(丙氨酰氨基转移酶，批号：080375)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶，批号：080381)、BUN(血清尿素氮，批号：071275)及Cr(血肌酐，批号：080375)，均为中生北控生物科技股份有限公司生产。
       2 方法
       2.1 分组取SD大鼠40只，随机分为正常对照组(A组)、附子组(B组)、贝母组(C组)、附子与贝母合用组(D组)，每组10只，称重，标记。各组每日分别用灌胃法给予2.5 g/kg生理盐水、附子煎液、贝母煎液及附子与贝母混合煎液，各给药组浓度均为200 g/L。于4，8，12 d各称重一次并调整给药剂量。第14天停药，禁食不禁水12 h后，称重，用100 g/L的水合氯醛麻醉后，解剖、暴露出心脏，自左心室取血5 ml制备血清，测定各组血清LDH，CK，AST，ALT，BUN，Cr含量;分离心脏、肝脏及肾脏，用生理盐水冲洗后称重，用中性缓冲福尔马林溶液固定，通过脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡HE染色、脱水透明、封固，于光学显微镜下观察形态学改变。
       2.2 统计方法实验数据采用SPSS13.0统计软件分析处理，结果以±s表示，组间比较采用F检验进行整体方差分析，方差齐者用q检验，方差不齐者用秩和检验，P<0.05有显著性差异，P<0.01有极显著性差异。
       3 结果
       3.1 体质量及脏器指数(见表1)从表1可见，体质量增长率、肝脏指数各间均无显著差异(P>0.05)，D组心脏指数显著高于B、C组(P<0.01)，D组肾脏指数明显高于C组(P<0.05)。
       表1 各组体质量增长率及心、肝、肾脏指数(±s)
       3.2 形态学观察
       3.2.1 心肌形态学见图1。对照组结构正常;附子组心肌间隙明显宽大，肌束细长，肌纤维粗细不等，少许区域肌浆有融合现象，间质中可见个别炎细胞浸润;贝母组心肌纤维之间间隙明显扩大，肌丝粗细不等，肌浆融合，间质出血，炎细胞浸润明显;附子+贝母组心肌肌束断裂，肌纤维结构消失，部分肌纤维融合，胞浆同质状，周边部蛋白液渗出，炎细胞浸润明显。
       图1 各组心肌形态学改变(HE，400×)
       3.2.2 肝脏形态学见图2。对照组结构正常;附子组肝小叶结构略显紊乱，肝索上细胞排列不规则，可见较多慢性炎症细胞浸润，肝细胞水肿，细胞核大深染，可见双核;贝母组汇管区可见大量炎细胞浸润，部分肝细胞变性;附子+贝母组大部分小叶结构正常，可见2～3个细胞体积大，核大深染，并可见双核肝细胞。
       3.2.3 肾脏形态学 见图3。对照组结构正常;附子组肾近曲小管上皮细胞水肿，界限不清，小血管扩张充血，间质可见蛋白样水肿液，间质炎细胞浸润明显;贝母组肾小球数目减少，管腔扭曲不规则，间质灶性纤维化，结构紊乱，炎细胞浸润明显;附子+贝母组肾小管明显扩张，中央视野可见肾小球玻璃样变性，内有出血，周边部可见少许内皮细胞，间质炎细胞浸润明显。
       图2 各组肝脏形态学改变(HE，400×)
       3.3 生化指标结果见表2。与对照组相比，附子组LDH，BUN，Cr明显升高(P<0.05或P<0.01)。附子、贝母合用组与附子、贝母单用组相比，各检测指标与相应的比较组间均无明显差异(P>0.05)。
       4 结论与讨论
       脏器指数是反映药物对脏器影响，尤其是毒性的重要指标，测量脏器指数旨在从大体上寻求药物是否对心、肝、肾等重要器官有损伤。脏器指数增加表示脏器有充血、水肿、增生、肥大等变化，脏器指数下降则表示脏器有萎缩、退行性变化等[6]。生化检测选取LDH，CK，AST，ALT，BUN及Cr为检测项目，与大体标本形态学及显微镜下形态结构的变化相互印证，寻找药物毒性作用的靶器官。LDH、CK活性常用来反映心肌受损的程度。ALT为肝细胞损伤的灵敏指标，AST升高可提示心脏或肝脏受损。尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一，测定血液尿素的含量可以了解机体肾功能的状况，因1个尿素分子含有2个氮原子，可用BUN(血清尿素氮)表示尿素含量。Cr是肌酸代谢的终产物，由肾脏排出，它从肾小球滤过后不被肾小管再吸收，也不再分泌，其排出量较为恒定，不受食物中蛋白质含量的影响，测定血中Cr的含量能较准确的反映肾脏的排泄功能。血清BUN及Cr升高提示肾脏的排泄功能减退[7]。
       本实验中附子组大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。镜下可见附子组心肌有明显病变，加之LDH活性升高，说明有心肌损伤;肝脏病理改变提示肝细胞有再生现象，但ALT、AST检测值与对照组相比无显著性差异，当肝炎损伤进入修复阶段时，即使尚残存较明显的肝脏病变，ALT及AST可正常[8]，因此可解释为本实验在第14天进行检测时附子造成的肝脏急性损伤还未修复，而生化检测值已恢复正常;肾脏损伤病理改变明显，加之BUN和Cr含量与对照组相比升高较明显，与病理变化具一致性。本实验结果可推测，附子单用有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性，与向丽华等[6]报道一致。
       图3 各组肾脏的形态学改变(HE，400×)
       本实验中贝母单用时大鼠体质量增长率、脏器指数与对照组比较未发现显著性差异。LDH活性与对照组相比明显升高，其他生化指标变化均不明显。但形态学观察发现心肌、肝脏、肾脏均有明显病理改变，据此可推测贝母组也有一定的心、肝及肾脏毒性。关于贝母毒理研究相对较少，检索文献仅见毒性实验研究，对其毒性机制的研究未见报道[9，10]，有待于进一步探讨。
       表2 各组血清生化指标(±s)
       附子与贝母合用组大鼠体质量增长率、肝脏指数与对照组比较未发现显著性差异，心脏指数较其他3组均有显著性提高，与镜下观察到心肌形态学改变一致，且LDH活性较对照组升高，可相互印证;虽ALT及AST活性无变化，但形态学观察可提示有肝细胞有再生现象;肾脏指数较贝母单用有显著性差异，肾脏形态学观察病理改变明显，BUN及Cr含量较对照组明显升高，但与两药单用组差别不明显。因此附子、贝母配伍应用后心、肝、肾毒性较单用毒性明显提高。其机制可能与二药合煎后毒性成分乌头碱、次乌头以及新乌头碱的含量显著提高有关[11，12]，有待于进一步探讨。
       【参考文献】
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