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       【摘要】 
       目的探讨榆黄蘑饮料对小鼠抗疲劳和耐缺氧作用，以及对D-半乳糖诱发的衰老小鼠的抗氧化作用的影响。方法抗疲劳和耐缺氧实验测定小鼠力竭游泳时间和常压缺氧存活时间。抗氧化实验测定衰老小鼠全血GSH-Px和皮肤组织T-SOD活力，以及皮肤组织MDA含量，观察榆黄蘑饮料的作用。结果榆黄蘑饮料组的力竭游泳时间和常压缺氧存活时间较空白组显著延长，全血GSH-Px和皮肤T-SOD活力较模型组显著升高，高剂量组的皮肤MDA含量较模型组显著减少。结论榆黄蘑饮料能够增强小鼠抗疲劳、耐缺氧和抗氧化作用。
       【关键词】  抗疲劳; 耐缺氧; 抗氧化; 榆黄蘑; 小鼠
       蘑菇类因具有抗肿瘤、免疫调节、抗动脉粥样硬化、降血脂、抗炎和保肝等药理活性作用而受到重视。榆黄蘑Pleurotus citrinopileatus Sing.是担子菌亚门，层菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属。具有滋补强壮和止痢作用[1]，其干燥子实体富含人体必需氨基酸和纤维素，脂类成分较低[2]，同时富含钙、镁、钾、钠等常量元素及锌、铁、铜等人体必需微量元素[3]，有很高的营养价值。新鲜的榆黄蘑子实体由于味道鲜美、无毒而被普遍食用。本文用榆黄蘑的新鲜子实体制成含不同剂量榆黄蘑成分的饮料给小鼠灌胃35 d后，观察小鼠力竭游泳时间、常压耐缺氧时间和抗氧化酶学等的变化，研究榆黄蘑饮料对小鼠抗疲劳、耐缺氧和抗氧化能力的影响。
       1 材料与仪器
       1.1 动物昆明种小鼠，雌雄混用，体质量17～22 g，延边大学实验动物科提供，生产许可证号： SCXK(吉)2007-0003。
       1.2 药物与试剂 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒(均购自南京建成生物工程研究所)，D-半乳糖(上海国药集团化学试剂有限公司，批号：F20080429)。市售榆黄蘑由延边大学药学院吕惠子副教授鉴定为真品。
       1.3 仪器HH-501超级恒温水浴(江苏金坛市恒丰仪器厂)，VIS-723型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，KA-1000低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，DY-Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。
       2 方法
       2.1 榆黄蘑饮料制备 榆黄蘑新鲜子实体在50℃蒸馏水中浸提30min后，脱脂棉过滤，加调味剂和稳定剂(pH 3.6～3.8)，均质，巴氏分段灭菌后制得较浓稠的含榆黄蘑生药质量浓度为660 g/L榆黄蘑饮料。灌胃时用蒸馏水成倍稀释，制成质量浓度为165 g/L和330 g/L浓度的榆黄蘑饮料。参照Hu等[4]采用的榆黄磨用量，本实验采用的3种浓度榆黄磨灌胃量相当于1.65，3.3和6.6 g/kg体重的生药量。
       2.2 小鼠力竭游泳实验小鼠随机分为空白组和3个榆黄蘑饮料组，每组10只。3个榆黄磨饮料组分别用1.65，3.3和6.6 g/kg的榆黄蘑饮料(0.1 ml/10 g体重)灌胃35 d，1次/d，空白组用等量的蒸馏水灌胃。小鼠力竭游泳实验参照周红林等[5]的方法。在最后1次灌胃0.5 h后，将各组小鼠放在水温为(15±0.5) ℃的水槽(水深15 cm，水槽长32 cm，宽27 cm)中无负荷游泳。记录小鼠力竭游泳时间，即小鼠自游泳开始至口鼻没入水面8 s无抬头的时间。
       2.3 小鼠常压耐缺氧实验 小鼠分组和灌胃同力竭游泳实验，参照周红林等[5]的方法。在末次灌胃0.5 h后，将小鼠放入250 ml盛有10 g新鲜钠石灰的广口瓶内，用凡士林封口后，观察并记录小鼠从放入瓶内到最后一次呼吸停止所需时间，定为常压缺氧存活时间。
       2.4 小鼠抗氧化实验 小鼠随机分为空白组、模型组和3个榆黄蘑饮料组。参照王红丽等的方法[6]，模型组和榆黄蘑饮料组小鼠每天在背部皮下注射质量浓度为10%的D-半乳糖0.1 ml/10 g体重，1次/d ，连续42 d，诱发小鼠亚急性衰老模型。空白组小鼠每天皮下注射等容积的生理盐水。造模开始1周后，3个榆黄磨饮料组分别用1.65，3.3和6.6 g/kg榆黄蘑饮料灌胃35d，1次/d，空白组和模型组用等量的自来水灌胃。末次灌胃1 h后，摘眼球取血，置于肝素抗凝试管中，按试剂盒说明书的方法测定全血GSH-Px活力。取完血后，颈椎脱臼处死小鼠，取预先用8%硫化钠溶液脱毛的背部皮肤组织约0.4 g，用预冷生理盐水漂洗，去除多余脂肪组织，滤纸拭干，称重，加入9倍于所取组织块重量的预冷生理盐水的试管内，在冰浴中匀浆，3 000 r/min离心5 min，取上清液。按试剂盒说明书的方法测定皮肤组织中的T-SOD活力和MDA的含量。
       2.5 统计学分析实验数据以±s表示，组间比较用单因素方差分析和Dunnet-t 检验。P<0.05时，判定具有显著性差异。
       3 结果
       3.1 榆黄蘑饮料对小鼠耐缺氧能力的影响 灌胃榆黄蘑饮料35 d后，小鼠力竭游泳时间和常压耐缺氧时间的变化见表1。与空白组比较，榆黄蘑饮料组小鼠的力竭游泳时间随着榆黄蘑灌胃剂量的增加而延长，在3.3 g/kg和6.6 g/kg具有显著性差异(P<0.05)。榆黄蘑饮料组小鼠的常压耐缺氧时间也随着剂量的增加而延长，除1.65 g/kg外，均较空白组有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。
       表1 榆黄蘑饮料对小鼠力竭游泳时间和常压缺氧存活时间的影响(±s)
       3.2 榆黄蘑饮料对小鼠抗氧化作用的影响 灌胃榆黄蘑饮料35 d后，小鼠全血GSH-Px和皮肤组织T-SOD活力，以及皮肤组织MDA含量的变化见表2。与空白组比较，模型组小鼠的全血GSH-Px和皮肤组织T-SOD活力明显降低(P<0.01)，皮肤组织MDA含量明显增高(P<0.01)，提示D-半乳糖诱发的亚急性衰老模型小鼠造模良好。与模型组比较，3.3和6.6 g/kg榆黄蘑饮料组小鼠全血GSH-Px显著性增高(P<0.05)，皮肤组织T-SOD活力也显著性增高(P<0.01)，皮肤组织MDA含量在6.6 g/kg显著性减少(P<0.01)。
       表2 榆黄蘑饮料对小鼠全血 GSH-Px活力，皮肤组织T-SOD活力和MDA含量的影响(±s)
       4 讨论
       榆黄蘑饮料灌胃35 d后，小鼠的力竭游泳时间和常压耐缺氧时间较空白组明显延长，尤其在较高浓度具有显著性差异(P<0.05)。文镜等[7]研究发现，榆黄蘑发酵液灌胃25 d小鼠运动停止后血清乳酸清除速率和乳酸脱氢酶活性明显增高。缺氧或剧烈运动可使肌肉局部血流相对不足，能量主要经糖酵解获得。糖酵解产生的过多的乳酸，通过降低肌肉pH值引起一系列生化改变，是导致疲劳的重要原因[8]。乳酸脱氢酶既催化骨骼肌糖酵解中丙酮酸还原成乳酸，又催化肝脏将乳酸氧化成丙酮酸并经线粒体进入三羧酸循环。乳酸脱氢酶的活性增高是小鼠常压耐缺氧能力和力竭游泳时间延长的可能原因。
       与正常组比较，衰老模型小鼠的全血GSH-Px和皮肤T-SOD活力明显降低(P<0.01)，皮肤MDA明显增高(P<0.01)，提示D-半乳糖诱发的小鼠亚急性衰老模型比较理想。与模型组比较，高浓度榆黄蘑饮料组显著提高了小鼠全血GSH-Px和皮肤组织T-SOD活力(P<0.05)，同时减少了皮肤组织MDA含量(P<0.01)，表明榆黄蘑饮料对小鼠具有一定的抗氧化作用，且对皮肤衰老有一定的延缓作用。该结果与Hu等的研究结果相似，即榆黄蘑能够显著性地降低高胆固醇血症大鼠的血清GSH-Px和SOD活性[4]。机体在缺血缺氧或高强度或衰竭运动均可导致自由基代谢增强，榆黄蘑的抗氧化作用也应该是延缓小鼠常压耐缺氧时间和力竭游泳时间的原因之一。研究发现，一些多糖类(包括菌类多糖)具有耐缺氧[9]和抗氧化作用[10]。通过对多糖类药理作用的构效关系研究认为，多糖类的水溶性对药理活性至关重要[11]。因此，榆黄蘑中提取出的有药理活性的水溶性多糖[12，13]可能是增强耐缺氧和抗氧化能力的活性成分。总之，榆黄蘑饮料能够增强小鼠的抗疲劳、耐缺氧和抗氧化作用。
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