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       【摘要】 
       目的研究拐芹当归种子和根部提取物及不同萃取部位的抗菌活性。方法采用牛津杯法对拐芹当归种子和根部提取物及不同萃取部位进行抗菌活性研究。结果拐芹当归根部甲醇提取物、根部乙醇提取物、根部氯仿相提取物对大肠杆菌、巨大芽孢杆菌有不同的抑制作用，其中对巨大芽孢杆菌作用明显，对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌无明显作用。拐芹当归根部正丁醇相提取物、种子甲醇提取物对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌有明显抑制作用，而对其他两种菌无明显作用。结论拐芹当归不同提取部位具有不同的抗菌活性。
       【关键词】  拐芹当归; 提取物; 抗菌活性; 牛津杯法
       Antibacterial Activity of the Extracts from Angelica polymorpha Maxim
       JIANG Tingyu1,
       YANG Ya2,
       MENG Xiangxian3,
       MENG Fanjun1*,
       CUI Hong4,
       ZHANG Xuejun1
       (1.Marine College, Shandong University at Weihai, Weihai 264209, China;2. School of Science and Technology, Beijing Institute of Technology, Beijing 100081, China;3.Weihai Strongmedical Sci.-tech.Co.,LTD, Weihai 264200,China;4.Weifang Animal Husbandry Monitoring Center,Weifang 261061,China)
       Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial activity of the extracts of seeds and roots of Angelica polymorpha Maxim and the extractive fractions of the roots.
       MethodsThe antibacterial activity of the extracts of Angelica polymorpha Maxim to Escherichia coli, Bacillus megaterium, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus was detected with the method of Oxford-cup tests.
       ResultsThe extracts of the roots extracted by Methyl alcohol and Ethyl alcohol and the chloroform fraction showed antibacterial activity against Escherichia coli and Bacillus megaterium; the nobutanol fraction and the extract of the seeds extracted by Methyl alcohol showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Vibrio parahaemolyticus.
       ConclusionThe different extracts of Angelica polymorpha Maxim have different antibacterial activities.
       Key words：Angelica polymorpha Maxim; Extracts; Antibacterial activity; Oxford-cup tests
       拐芹当归Angelica polymorpha Maxim为伞形科当归属植物,俗称白根独活、拐子芹、倒钩芹等，生于杂木林下、阴湿草丛或山沟溪流旁和灌木丛中。国内分布于东北、西北、华北、华中、西南等地，在山东省的山区、丘陵均有分布[1]。拐芹当归嫩茎叶可食用，根可药用，具有利尿、降压的功效[2]。拐芹当归在山东当白芷用[2]，在陕南安康地区作香独活药用[1]，拐芹当归的根为神农架和土家族地区常用中草药紫金砂，具有温中散寒理气止痛等功效，在治疗胃痛、腹痛、胸胁痛、风湿关节痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等方面有极好疗效[3，4]。拐芹当归主要化学成分有香豆素类、挥发油类、生物碱类、甾醇类等，其中香豆素类具有抗腹泻、抗炎、降压的作用，拐芹当归水提物具有免疫调节作用[4]。熊亚平等[5]对紫金砂的抗菌活性进行了研究。文献显示不同产地的同种植物抗菌活性不同。本实验采用牛津杯法[6～8]对昆嵛山产拐芹当归种子和根部及根部不同的萃取部位进行体外抗菌研究，并探讨了最小抑菌浓度，以期为进一步研究拐芹当归提供科学依据。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器YX-LS50SⅡ立式压力蒸气灭菌器，101-3型电热鼓风干燥箱，SPX-250B-Z型生化培养箱，BCM-1000A生物洁净工作台，电子分析天平。
       1.2 试剂甲醇，乙醇，氯仿，二甲基亚砜，正丁醇，氯化钠，氢氧化钠，庆大霉素，琼脂粉，蛋白胨，酵母膏，牛肉膏(试剂均为分析纯试剂)。
       1.3 药材拐芹当归于2007-11采自山东省烟台市与威海市交界处的昆嵛山动植物实习基地，经山东大学威海分校海洋学院植物生物学教研室赵宏副教授鉴定确认为伞形科(Umbelliferea)当归属(Angelica L.)植物拐芹当归。
       1.4 菌种大肠杆菌(Escherichia coli.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)均由山东大学威海分校海洋学院微生物实验室提供。
       1.5 培养基①牛肉膏蛋白胨培养基(大肠杆菌、巨大芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌);② 2216E培养基(副溶血性弧菌)。
       2 方法
       2.1 样品的制备拐芹当归种子和根部经干燥后用甲醇浸泡，减压旋蒸得浸膏。根部浸膏用适量温水溶解后依次用氯仿、正丁醇萃取，各萃取液浓缩成极性不同的浸膏。将拐芹当归种子浸膏、根部浸膏、氯仿相浸膏、正丁醇相浸膏用二甲基亚砜配制成浓度为100 mg/ml的溶液。
       2.2 培养基的制备
       2.2.1 牛肉膏蛋白胨培养基(大肠杆菌、巨大芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌)牛肉膏3 g;蛋白胨10 g;氯化钠5 g;琼脂15～20 g;蒸馏水1 000 ml ;pH 7.0～7.2。
       2.2.2 2216E培养基(副溶血性弧菌)酵母膏3 g;蛋白胨10 g;磷酸高铁0.01 g;琼脂15～20 g;陈海水1 000 ml;pH 7.6～7.8按以上配比配制培养基，灭菌后倒入培养皿中，凝固后备用。
       2.3 菌悬液的制备取4只经高压蒸气灭菌的试管，编号标记4种菌，分别倒入等量的无菌生理盐水至试管的1/3处，挑选长势良好的试管，用接种环挑取几环长势良好的新鲜菌种放入对应编好的试管中，在无菌蒸馏水中充分混合均匀，制成菌悬液。以上操作均在超净工作台中进行。
       2.4 提取物的抑菌试验[6～8]用无菌移液枪移取0.1 ml上述4种菌悬液添加到平板培养基上，用无菌玻璃涂布棒涂布均匀，待菌悬液干燥以后用无菌镊子夹住灭过菌的牛津杯轻轻放在培养皿中，在水平放置的培养皿中均匀放入3只牛津杯。
       用无菌移液枪吸取100～150 μl的样品溶液加入牛津杯中，不应让溶液溢出牛津杯外。每个样品浓度做两个平行，同时做二甲基亚砜的阴性对照和青霉素以及庆大霉素的阳性对照。
       分别将添加过样品的培养皿轻轻放入培养箱内培养。将培养大肠杆菌，金黄色葡萄球菌和巨大芽孢杆菌的培养皿放入37℃的培养箱内培养24 h，副溶血性弧菌的培养皿放入25℃培养箱内培养48 h。培养后观察抑菌效果，用游标卡尺采用十字交叉法测量抑菌圈大小。
       2.5 最小抑菌浓度的测定[9～11]将所得浸膏用二甲基亚砜配制成一系列浓度不同的溶液，按照“2.4”方法操作，培养后观察抑菌效果。
       3 结果
       3.1 5种提取物抑菌效果见表1。实验结果表明，拐芹当归根部甲醇提取物、根部乙醇提取物、根部氯仿相提取物对大肠杆菌、巨大芽孢杆菌有不同的抑制作用，其中对巨大芽孢杆菌作用明显，对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌无明显抑制作用。拐芹当归根部正丁醇相提取物、种子甲醇提取物对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌有明显抑制作用，而对其它两种菌无明显抑制作用。表1 5种提取物对4种菌的抗菌活性mm
       3.2 5种提取物的最小抑菌浓度见表2。由表2可知拐芹当归根部甲醇提取物、根部乙醇提取物、根部氯仿相提取物对巨大芽孢杆菌作用明显，最小抑菌浓度为3 mg/ml;对大肠杆菌只有在较大浓度时才有抑菌效果。拐芹当归根部正丁醇相提取物对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的最小抑菌浓度为60，9 mg/ml，且对副溶血性弧菌的抑制效果明显。种子甲醇提取物对金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌最小抑菌浓度分别为36，60 mg/ml。熊亚平等[5]研究发现的紫金砂提取物的抗菌作用与本实验结果存在差异，其结果可能是由于生长环境不同、采集时间不同等因素导致的。表2 最小抑菌浓度实验结果mg·ml-1
       4 讨论
       拐芹当归不同部位抑菌作用不同，为合理利用拐芹当归提供了一定的科学依据，同时也为拐芹当归中天然产物的提取分离和抗菌药物的筛选提供一定的理论依据。本实验结果表明拐芹当归种子甲醇提取物和根部正丁醇相提取物对海洋菌副溶血性弧菌有抗菌活性，从而为研究抑制海洋菌的天然药物提供了依据。
       【参考文献】
         　[1] 陈江弢,杨崇仁.当归属植物的研究进展[J].天然产物研究与开发,2004,16(4): 359.
       
       [2] 夏 冰,陈重明,郭忠仁.民族植物学和药用植物[M].南京:东南大学出版社,2006:151.
       
       [3] 王鋆植,张荣平,叶 红,等.土家族药紫金砂挥发油成分分析和药理作用研究[J].中成药,2008,30(4):596.
       
       [4] 李业娜,杨尚军,白少岩.拐芹的研究进展[J].中外健康文摘,2008,5(3):265.
       
       [5] 熊亚平,但飞君,陈国华,等.紫金砂体外抗菌活性的研究[J].时珍国医国药,2007,18(11):2740.
       
       [6] 沈 萍,范秀容,李广武.微生物学实验[M].北京:高等教育出版社,1999:51.
       
       [7] 周德庆. 微生物学实验教程[M].北京: 高等教育出版社, 2006:199.
       
       [8] 李仪奎. 中药药理试验方法学[M].上海: 上海科学技术出版社,2006:755.
       
       [9] 张显忠,郭爱军,李艳玲,等.中草药提取物的体外抗菌活性研究[J].中华医院感染学杂志,2006,16(5):563.
       
       [10] Jones RN, Pfuller MA, Doern GV. Antimicrobial activity and spectrum investigation of eight broad-spectrum β-lactamdrugs:A 1997 surveillance trial in 102 medical centers in the Unites[J].Diagn Microbial Infect Dis,1998,30(3):215.
       
       [11] 蒋玉燕,毕忆群,汪子伟,等.聚氨基葡萄糖的体外抗菌活性[J].中国抗生素杂志,1996,21(1):54.