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       【摘要】 
       目的研究六月青皂苷(LYQS)对四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)所致大鼠肝纤维化的治疗作用，并探讨其作用机制。方法Wistar大鼠随机分成两组，模型组大鼠采用50%CCl4花生油溶液灌胃造模，共7周，空白对照组用生理盐水代替。将病理检查确认肝纤维化形成的 Wistar 大鼠 50 只，随机分成5组，分别给予相应药物进行干预，1次/d，连续4周。末次给药24 h后处死大鼠，采集血清及肝组织，检测大鼠血清中ALT、AST，肝组织中Hyp、SOD、MDA和GSH-Px的水平。结果各剂量的六月青皂苷及阳性药能显著降低大鼠血清中CCl4所致异常升高的ALT(P<0.01);高、中剂量六月青皂苷及阳性药可降低大鼠血清中CCl4所致异常升高的AST(P<0.01);同时，各剂量的六月青皂苷能显著提高肝组织中异常降低的SOD、GSH-Px水平(P<0.05或P<0.01)，并显著降低异常升高的Hyp、MDA含量(P<0.05或P<0.01)。随着药物浓度的增加，其作用逐渐增强，呈现明显的量效反应关系。结论六月青皂苷对大鼠化学性肝损伤具有一定程度的治疗作用，其机制可能与其清除自由基，抑制脂质过氧化有一定的关系。
       【关键词】  六月青; 皂苷; 肝纤维化
       六月青是广西民间草药，系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡笼(顶头马兰)Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu [Strobilanthes affinis (griff) Y.C. Tang]的干燥地上部分[1]。《本草拾遗》记载，该药能活血，凉血，疏肝泻湿，消肿止痛，主要用于急慢性肝炎，黄疸等[2]。本课题组经过多年研究发现，以六月青为君药的复方六月青对四氯化碳、对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺等所致小鼠急性化学性肝损伤均有明显的保护作用[3];在体外对血清中HBsAg和HBeAg均有明显的抑制作用[4]。此外，研究者在对六月青的初步研究中发现，六月青的石油醚部位和60%乙醇部位对小鼠的免疫功能有明显的增强作用[5]。本实验就该药对CCl4造成大鼠的肝纤维化的影响进行初步研究。
       1 材料
       1.1 动物健康雄性Wistar大鼠90只，SPF级，体质量150～200 g，由广西医科大学实验动物中心提供。实验动物生产许可证：SCXKG桂2003-0003，实验动物使用许可证：SYKG桂2003 -0005。常规鼠饲料喂养，自由饮水。
       1.2 药物及试剂六月青皂苷(LYQS)：由本实验室自行提取完成;花生油：市售;四氯化碳(分析纯)：成都市科龙化工试剂厂，批号：20070910;秋水仙碱片：西双版纳药业有限责任公司，批号：080706。AST、ALT、Hyp、SOD、MDA、GSH-Px试剂盒：南京建成生物工程研究所产品，批号均为：081230。
       2 方法
       2.1 动物造模Wistar大鼠随机分成两组：空白对照组及肝纤维化模型组。肝纤维化模型组75只，采用花生油配成体积分数为50%的CCl4溶液，按CCl4 1 ml/kg体质量每周灌胃2次，称质量1次/周，按实际体重调整给药剂量[6]。正常对照组15只，采用生理盐水灌胃，剂量同50% CC14花生油溶液，2次/周。分别于造模后第5周、第6周及第7周抽取肝纤维化模型组大鼠2只及正常对照组大鼠1只，进行病理学检查，监测肝纤维化形成的情况。
       2.2 动物分组及用药将病理检查确认形成肝纤维化的Wistar大鼠50只，随机分为5组，加上空白对照组10只，共计6组，分别为：空白对照组，给予生理盐水10 ml/kg;模型对照组，给予生理盐水10 ml/kg;阳性组，给予秋水仙碱0.2 mg/kg;LYQS高、中、低剂量组，分别给予16.67，8.33，4.16 g生药/kg。各组动物在同样条件下饲养，均以1次/d，空腹灌胃，连续给药4周。以上各组除空白对照组外，其余各组均继续给予50%CCl4花生油溶液，2次/周。每周称重，并相应调整CCl4造模剂量及用药剂量。
       2.3 样本制备末次给药24 h后，戊巴比妥钠麻醉，打开腹腔，腹主动脉取血，分离血清于-20℃保存，用于测定ALT、AST;取肝组织做相应浓度匀浆后于-70℃冰箱保存，用于SOD、MDA、GSH-Px及考马斯亮蓝的测定;另取部分肝组织于-70℃冰箱保存，用于Hyp的测定。
       2.4 指标测定血清中ALT，AST和肝组织Hyp，GSH-Px，SOD，MDA的检测，严格按照试剂盒说明书进行操作。
       2.5 统计学处理 应用SPSS13.0软件进行统计分析。数据均以±s表示，各组间比较采用单因素方差分析，经方差齐性检验，方差齐者组间两两比较采用LSD法，方差不齐者组间两两比较采用Dunnett T3法。
       3 结果
       3.1 大鼠血清ALT、AST的变化模型组大鼠血清ALT与AST的含量均显著升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，说明造模成功;阳性组，LYQS高、中、低剂量组血清ALT含量均低于模型组;阳性组、LYQS高、中剂量组血清AST含量均低于模型组，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);LYQS低剂量组血清AST含量与模型组比较无统计学意义。结果见表1。表1 LYQS对肝纤维化大鼠血清中ALT、AST的影响
       3.2 大鼠组织Hyp，GSH-Px，SOD，MDA的变化模型对照组大鼠肝组织中Hyp含量显著升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);阳性组与LYQS高、中、低剂量组均可显著降低肝纤维化大鼠组织中Hyp含量，与模型对照组相比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。模型对照组大鼠肝组织中SOD及GSH-Px活力显著降低(P<0.01)，而MDA含量明显升高(P<0.01);阳性组与LYQS高、中、低剂量组均可显著升高肝纤维化大鼠血清SOD及GSH-Px活力(P<0.01或P<0.05);与模型对照组相比较，阳性组与LYQS高、中、低剂量组均可显著降低肝纤维化大鼠肝组织MDA含量(P<0.01或P<0.05)。结果见表2～3。
       4 讨论
       肝纤维化(HF)是指肝细胞发生坏死、炎症刺激时，肝脏中胶原蛋白等细胞外基质(ECM)的增生与降解失去平衡，进而导致肝脏内纤维结缔组织过度增生与异常沉积的病理过程，轻者称为纤维化，重者进而使肝小叶结构改建、假小叶及结节形成，称为肝硬化[7]。肝纤维化是慢性肝病最重要的病理特征及其慢性肝病向肝硬化发展的必经之路。研究发现，肝纤维化不同于肝硬化，它是一种可逆性病变[8，9]。表2 LYQS对肝纤维化大鼠组织中Hyp、GSH-Px的影响　表3 LYQS对肝纤维化大鼠组织中SOD、MDA的影响
       本实验研究表明，LYQS可有效地保护CCl4所致的大鼠肝细胞的损害，并对大鼠肝纤维化具有较好的逆转作用。表现为LYQS给药组可显著降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST活性;提高SOD、GSH-Px活性，并降低Hyp、MDA含量。随着药物浓度的增加，其作用逐渐增强，呈现量效反应关系，但是与空白对照组相比，这些指标尚未达到正常水平，需进一步研究，更充分发挥LYQS的功效。LYQS可能通过清除氧自由基，抑制肝脏脂质过氧化反应，从而稳定肝细胞膜，减轻细胞损伤发挥作用，达到对肝纤维化的保护和逆转的效果。
       【参考文献】
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       [3] 苏洁寒，荣延平，蒋伟哲，等.复方六月雪对急性化学性肝损伤的保护作用[J].广西医科大学学报，2003，20(4)：497.
       
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