文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的考察西南地区不同居群葎草中总黄酮和木犀草素的含量。方法以芦丁为对照品，采用分光光度法测定葎草中总黄酮的含量;采用反相高效液相色谱法测定葎草中木犀草素的含量。结果葎草中总黄酮与木犀草素的含量在不同居群间差异显著，以四川和重庆产含量较高。结论该方法适用于葎草的质量分析，可以为葎草资源开发提供参考。
       【关键词】  葎草; 居群; 总黄酮; 木犀草素
       葎草Humulus scandens (Lour.) Merr.又名拉拉秧、拉拉藤等，为桑科葎草属植物[1]，始载于《唐本草》，名为葛葎蔓，全草具有清热解毒、利尿消肿等功效，民间常用来治疗肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、感冒发热、膀胱炎、肾盂肾炎、泌尿系结石、痔疮等症，外用治疗痈疥肿毒、湿疹、虫蛇咬伤等症[2]。现代研究表明葎草化学成分复杂，具有广泛的生物活性，且已从中分离得到木犀草素和牡荆素多种黄酮类化合物。葎草资源丰富，常作为农业杂草被除去，具有较大的开发前景。我们分析比较了西南地区不同居群葎草中总黄酮与木犀草素的含量，研究葎草的质量控制方法以及不同居群间葎草有效成分的含量变异，为促进葎草资源的开发利用奠定基础。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器 岛津LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站，龙尼柯UV-2102PC紫外可见分光光度计，Millipore溶剂过滤系统，METIER TOLEDO AG204万分之一电子分析天平。
       1.2 试药 芦丁、木犀草素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。实验样品经本校中药教研室王刚副教授鉴定为葎草。
       2 方法和结果
       2.1 木犀草素的含量测定[3,4]
       2.1.1 高效液相色谱条件 色谱柱为C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-2%醋酸(50∶50);检测波长350 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温为室温;进样量20 μl，理论塔板数按木犀草素计不低于4 000，高效液相色谱图见图1。A-对照品 B-葎草 a-木犀草素图1 样品高效液相色谱图
       2.1.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的木犀草素6.5 mg，置50 ml容量瓶中，加80%乙醇溶解并定容，摇匀，即得对照品储备溶液。
       2.1.3 样品溶液的制备将不同居群葎草样品粉碎，过筛(40目)，精密称取葎草细粉4 g，置100 ml圆底烧瓶中，加80%乙醇50 ml，加热回流2h，过滤，滤液蒸干后，加2%H2SO450 ml，酸水解1 h，放冷后，分别用40 ，40，20 ml的醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收醋酸乙酯至浸膏。浸膏用80%乙醇50 ml溶解，过滤，取续滤液10 ml作为供试品溶液。
       2.1.4 线性关系考察 精密量取木犀草素对照品溶液适量，加80%乙醇制成系列标准溶液，进样测定。以色谱峰面积A对进样量M(μg)进行线性回归，结果表明木犀草素在进样量范围内线性关系良好，线性范围为0.26～2.6 μg，回归方程为A=3 888 216 M-538 639，回归系数0.999 3。
       2.1.5 精密度实验在上述色谱条件下，精密吸取木犀草素照品溶液，进样20 μl，重复进样6次，测得峰面积的RSD为1.22%，表明精密度良好。
       2.1.6 稳定性实验在上述色谱条件下，精密吸取同一供试品溶液20 μl，分别间隔2 h进样，重复5次，并测定峰面积，计算RSD为1.83%。
       2.1.7 重复性实验对同一批样品按样品溶液的制备方法平行制备6份，分别进样20 μl，依照样品测定方法测定，并计算RSD为2.17%。
       2.1.8 加样回收率实验取已知木犀草素含量的葎草样品细粉9份，每份约0.2 g，精密称定，分别精密加入高、中、低3个质量浓度的木犀草素对照品溶液适量，按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，同一质量浓度制备3份，并在上述色谱条件下测定，结果平均加样回收率为98.9%，RSD为1.45%。
       2.1.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，按上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中木犀草素的含量。结果见表1。
       2.2 总黄酮的含量测定[5]
       2.2.1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的无水芦丁8.1 mg，置于50 ml容量瓶中，加80%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
       2.2.2 供试品溶液的制备 将不同居群葎草样品粉碎，过筛(40目)，精密称取葎草细粉0.8 g，置索氏提取器中，加石油醚100 ml，加热回流至提取液无色，弃去石油醚提取液。待药渣挥干后，置烘箱中60℃干燥1 h，然后转移至具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇100 ml，密塞，称定重量，超声60 min，放冷再称定重量，用80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
       2.2.3 测定波长的选择 取芦丁对照品溶液和供试品溶液各2 ml，分别置于25 ml容量瓶中，各加入80%乙醇6 ml，加入2%三氯化铝溶液0.5 ml，摇匀，再加80%乙醇至刻度，即得芦丁对照品三氯化铝溶液和供试品三氯化铝溶液，放置60 min显色，在200～600 nm波长范围内扫描。结果表明，芦丁对照品和葎草样品溶液均在410 nm处有较大吸收，因此选410 nm为测定波长。
       2.2.4 线性关系考察 精密量取芦丁对照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置于25 ml容量瓶中，各加80%乙醇至8 ml，加入2%三氯化铝溶液0.5 ml，摇匀，再加80%乙醇至刻度，放置60 min显色，以第1瓶溶液作为空白，在410 nm处测定各溶液的吸收度，以吸收度A为纵坐标，浓度C为横坐标，得回归方程：A=0.025 4C +0.007 5，r=0.999 1，线性范围为3.24～19.44 μg· ml-1。
       2.2.5 精密度实验精密吸取同一对照品溶液6份置于25 ml容量瓶中，分别按照“2.2.4”项下方法处理显色，在410 nm处测定吸收度，结果测得吸收度的RSD为1.67%。
       2.2.6 稳定性实验 精密吸取供试品溶液2 ml置于25 ml容量瓶中，按照“2.2.4”项下方法处理显色，分别于0，30，60，90，120min测定吸收度，结果吸收度的RSD为2.26%，表明样品溶液在2 h内基本稳定。
       2.2.7 重复性实验 取同一批葎草样品细粉6份，每份分别按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取2 ml置于25 ml容量瓶中，按照“2.2.4”项下方法处理显色，于410 nm处测定吸收度，结果测得吸收度的RSD=2.39%。
       2.2.8 加样回收率实验 取已知总黄酮含量的葎草细粉6份，每份约1 g，分别精密加入芦丁对照品溶液适量，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取2 ml置于25 ml容量瓶中，按照“2.2.4”项下方法处理显色，于410 nm处测定吸收度，计算加样回收率，结果平均加样回收率为98.7%，RSD=2.08%。
       2.2.9 样品的测定 精密吸取供试品溶液2 ml置于25 ml容量瓶中，加80%乙醇至8 ml，加入2%三氯化铝溶液0.5 ml，摇匀，再加80%乙醇至刻度，放置60 min显色，于410 nm处测定吸收度，并计算葎草中总黄酮的含量。结果见表1。表1 样品测定结果mg·g-1
       3 讨论
       近年来研究发现葎草具有多种引人注目的药理活性，特别具有较强的抑菌抗炎作用等。葎草生态适应性广，在我国除新疆、青海之外，南北各省均有分布，资源量巨大，有巨大的资源优势。通过对西南地区不同居群葎草中黄酮类成分分析发现，葎草中总黄酮和木犀草素含量普遍较高，具有一定的开发价值。
       本实验结果表明，不同居群葎草中黄酮类化合物的含量存在差异，包括同一产地的不同居群也存在差异，表明除环境因素外，居群遗传多样性也可能是造成药用植物中有效成分含量差异的原因。
       本实验所建立方法可以快速检测葎草中总黄酮与木犀草素的含量，并对不同居群葎草中黄酮类化合物含量进行了比较，为葎草资源的深度开发提供了参考。
       【参考文献】
         　[1] 侯宽昭. 中国种子植物科属词典[M]. 北京: 科学出版社, 1984: 238.
       
       [2] 朱有昌. 东北药用植物[M].哈尔滨: 黑龙江科学技术出版社, 1989: 234.
       
       [3] 周 萍, 胡碧波, 朱 倩，等. 花生壳总黄酮及木犀草素含量[J].中药材, 2006, 29(8): 769.
       
       [4] 陈伟光, 盛 静, 林 霞，等. 正交设计研究葎草中总黄酮提取工艺[J].时珍国医国药, 2007, 18(3): 551.
       
       [5] 张 凌, 张道英, 刘亚丽，等. 藏药打箭菊中总黄酮及木犀草素的含量测定[J].药物分析杂志, 2008, 28(5): 755.