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       【摘要】 
       目的探讨四君子汤预处理对急性心肌梗塞的保护作用。方法四君子汤预处理后，以结扎左冠状动脉制作大鼠急性心肌缺血模型，通过观察四君子汤对急性心肌缺血大鼠心肌梗塞面积、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)含量的影响，探讨四君子汤预处理对急性心肌缺血的保护作用。结果四君子汤预处理可以缩小心肌梗塞面积，降低血浆中LDH、CK、MDA含量。结论四君子汤预处理对大鼠急性心肌缺血具有保护作用。
       【关键词】  四君子汤; 心肌梗塞; 乳酸脱氢酶; 肌酸激酶; 丙二醛
       缺血性心脏病是由冠状动脉供血不足，心肌急剧、暂时缺血缺氧所引起，其中血管狭窄、血栓形成及血管内皮功能异常是其重要的发病原因。缺血性心脏病属于中医“真心痛”“猝心痛”范畴。中医治疗该病具有悠久的历史，并取得良好的临床疗效，方法多以活血祛淤为主。近年来研究发现，“气虚血淤”是心肌缺血的一个主要病因，而行气活血，补气养血等方法也成为治疗心肌缺血、减少心肌梗塞死亡率的有效治则。
       四君子汤始载于《太平惠民和剂局方》，具有益气健脾功能，是中医传统补气方剂。因此，本研究从中医“气”与“血”的关系入手，以改变“气虚血淤”的病理状态为目的，对四君子汤进行了预处理抗急性心肌缺血的探索研究。
       1 材料与仪器
       1.1 药品与试剂四君子汤(人参9 g,白术9 g,茯苓9 g,炙甘草6 g)，由贵阳中医学院制剂室制备;地奥心血康胶囊，成都地奥制药集团有限公司生产;乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒:南京建成生物工程研究所;肌酸激酶(CK)检测试剂盒: 南京建成生物工程研究所;丙二醛(MDA)检测试剂盒：南京建成生物工程研究所;氯化三苯基四氮唑(TTC):中国医药(集团)上海化学试剂公司。
       1.2 动物雄性SD大鼠，50只，体质量220～250 g，由成都中医药大学实验动物中心提供。
       1.3 仪器TGL-16G台式离心机(上海医用分析仪器厂);酶标仪(瑞士 Tecan Systems Inc)。
       2 方法
       2.1 动物分组大鼠随机分为假手术组、模型组、四君子汤(SJZT)高、低剂量组和地奥心血康(DAXXK)组。
       2.2 供试药品制备人参、白术、茯苓、炙甘草共同浸泡、煎煮、去渣，浓缩至药液浓度为1 g/ml(含生药)，4℃保存备用;地奥心血康胶囊，成都地奥制药集团有限公司生产，批号：0408046，每粒含甾体总皂苷100 mg，临用前取胶囊内容物用蒸馏水配成所需浓度混悬液。
       2.3 给药方法造模前7 d连续灌胃给药，四君子汤(SJZT)高、低剂量组分别予7，3.5 g/(kg·d)(相当于人临床剂量10，5倍)，地奥心血康(DAXXK)对照组灌胃剂量为生药量0.06 g/(kg·d)，模型组和假手术组分别给予相同体积的生理盐水。
       2.4 造模方法参照文献[1]并稍作改进。末次给药1 h后，给予水合氯醛溶液(35 mg/kg)腹腔注射麻醉后仰卧固定于实验动物手术台上，行气管插管，接小动物呼吸机，呼吸频率60次/min，潮气量8～12 ml，吸/呼比为1∶1，连接心电监护，记录术前心电图。大鼠胸前左侧至腋窝处手术备皮，常规消毒后，距皮肤中线5 mm纵行切开皮肤，钝性分肌肉，暴露第2到第4肋骨。切断第3肋骨，剪断肋间肌肉组织，用小动物开胸器固定切口，分离心脏包膜，暴露结扎区域，用0号医用缝合针线永久性结扎冠状动脉左前降支。观察心电图变化，显示ST段抬高，并且心脏出现因缺血而致的颜色改变，为手术成功。细密缝合胸腔、皮肤组织，手术区域再次消毒。待动物呼吸频率和心律平稳后，撤掉心电监护和呼吸机，实验动物恢复自主呼吸。同样手术方式，仅穿线但不接扎冠状动脉左前降支，设立假手术组。
       2.5 检测指标
       2.5.1 心肌梗塞范围的检测大鼠麻醉后，取出整个心室组织，放入预冷的生理盐水清洗两次。将清洗后的完整心脏保持原形态放入-20℃预冷冻1 h，置于冰上，沿结扎线下将心脏切成1.5～2 mm厚的冠状切片，在1%(W∶V)的氯化三苯四唑(TTC)溶液孵育15 min(37℃)，然后在4%多聚甲醛中固定30 min。薄片经数码相机拍照后输入计算机。经 Imagetool 图像分析软件计算梗塞区面积及心室面积。梗塞面积的百分比(%)=梗塞面积/左心室肌危险区的面积。其中，白色区域为梗塞区，红色区域为缺血危险区。
       2.5.2 LDH、CK、MDA的测定结扎冠状动脉4 h后，大鼠用35 mg/kg水合氯醛麻醉后，剪开腹部，从腹主动脉处抽取5 ml血液，置于肝素抗凝管中，离心(3 000 r/min,10 min)，取血浆按照试剂盒说明测定血浆LDH、CK、MDA的含量。
       2.6 统计学处理采用SPSS 11.0统计软件，进行实验数据处理。所有数据都用±s表示，各组数据之间使用多组之间单因素方差分析。两组之间以配对t检验分析。
       3 结果
       3.1 四君子汤对大鼠心肌梗塞面积的影响采用TTC染色观察心肌梗塞面积，模型组及给药组均出现心肌梗塞，但与模型组相比，四君子汤高、低剂量组及地奥心血康组均明显缩小，分别为(24.9±1.8)%, (28.7±2.1)%和(20.8±2.6)%，与模型组(36.2±2.4%)相比有统计学意义(P<0.05)。结果见图1及表1。
       3.2 四君子汤对心肌梗塞大鼠血浆LDH、CK、MDA的影响见表2。模型组与假手术组相比，血浆中LDH、CK含量显著增加(P<0.05)。四君子汤高、低剂量组和地奥心血康均可降低血浆中LDH和CK的漏出量，其中高剂量组作用比低剂量组作用更明显，提示存在一定的剂量依赖关系，药物预处理组与模型组有显著性差异(P<0.05)。脂质过氧化产物MDA在心肌梗塞大鼠模型组血浆中的含量明显高于假手术组(P<0.05)，经四君子汤和地奥心血康预处理组血浆中MDA含量较模型组均明显下降(P<0.05)。图1 各组心肌梗塞大鼠心脏肉眼形态学观察(白色为梗塞区域)表1 四君子汤对大鼠心肌梗塞面积的影响表2 四君子汤对心肌梗塞大鼠血浆LDH，CK，MDA的影响
       4 讨论
       急性心肌梗塞(Acute myocardial infarction, AMI)在发达国家和许多发展中国家是心血管系统的常见病。由于其发病率、死亡率高，严重威胁人类健康。而保护心肌缺血损伤是减轻其危害的关键[2]。
       结扎冠状动脉左前降支是复制急性心肌梗塞最常见的模型。冠状动脉左前降支是左心供血的最主要动脉，若将其阻塞可引起室间隔、左室前壁发生心肌梗塞。
       肌酶学指标具有较好的敏感性、特异性，并且可以定量，在心肌缺血研究和临床应用过程中得到广泛的应用，酶学指标水平和心肌细胞坏死程度密切相关，从其水平可以判断心肌细胞损伤程度[3]。
       当缺氧造成体内自由基的生成和清除失衡时，自由基的清除能力下降或产生增多，都会对组织器官造成损伤。通过对细胞膜和细胞器膜中的多不饱和脂肪酸的氧化连锁反应，生成过氧化脂质，使膜的流动性及通透性发生障碍，导致细胞膜的结构和功能损伤,从而加剧缺血心肌的组织损伤及功能障碍[4]并产生代谢产物MDA。心肌细胞内的一些重要酶(AST、LDH、LDH1、CK、CK-MB等)广泛存在于细胞浆膜中,由于缺血引起细胞和线粒体损伤,使细胞膜通透性增加,造成心肌细胞各种酶释放入血,因此血清心肌酶的变化可以间接作为判断心肌受损和受损程度的指标。
       本实验中发现，结扎大鼠冠状动脉左前降支结扎造成大鼠急性心肌缺血后后，血浆中CK和LDH的含量明显增加，说明心肌细胞膜遭到破坏，使得这些酶漏出到血液循环。血浆中MDA含量明显增多反映了心肌膜遭受缺氧损伤后，脂质过氧化产物堆积。四君子汤预处理能够减小梗塞面积，降低心肌细胞CK和LDH的漏出，降低血浆中MDA的水平，这些结果表明四君子汤对大鼠心肌缺血损伤具有明显保护作用。
       冠心病属于中医学的“胸痹”“胸痛”“真心痛”“厥心痛”范畴,其病因病机是一种本虚标实证候,本虚多为气虚，标虚多为“血淤”“痰淤”。但前临床中医药治疗多以活血为主，所用也多以活血祛淤方药为主。对“气虚血淤”“气虚痰凝”的认识不足。四君子汤为中医传统补气方剂，补脾胃之气，但脾胃为后天之本，气血生化之源，因此，可以间接调节气血生化，化生气血，推动血行，改变气虚血淤的病理状态，达到治疗及预防心肌缺血的目的。
       本研究也表明，四君子汤预处理可以减轻心肌梗塞程度，降低梗塞时心肌酶的漏出，具有明显的心肌缺血损伤保护作用，为进一步研究四君子汤抗心肌缺血再灌注损伤奠定了基础。本研究还表明从中医补气角度进行心肌缺血的辨证论治具有可行性，为临床中医药治疗缺血性心脏病提供了新的思路，为四君子汤的现代药理研究补充了新的内容。
       【参考文献】
         　[1] 高秀梅,王 怡,商洪才,等.复方丹参方抗大鼠心肌缺血作用研究[J].天津中医药, 2003, 20(1): 23.
       
       [2] Yang Z, Min Zhou D. Cardiac marks and their point-of-care testing for diagnosis of acute myocardial infarction[J].Clin Biochem,2006,39(8):771.
       
       [3] Prabhu S, Jainu M, Sabitha KE, et al. Role of mangiferin on biochemical alterations and antioxidant status in isoproterenol-induced myocardial infarction in rats[J].J Ethnopharmacol, 2006, 107(1): 126.
       
       [4] Okada DR, Liu Z, Beiu D, et al. Monocationic radiotracer kinetics and myocardial infarct size: a perfused rat heart study[J].Ann Nucl Med,2008,22(7):617.