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       【摘要】 
       目的研究白芍与当归或玫瑰花配伍对其芍药苷煎出量的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定芍药苷的含量。色谱柱:XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：甲醇-水(40∶60)，检测波长230 nm，流速1.0/min，柱温25℃。结果白芍与当归、玫瑰花配伍后芍药苷的煎出量较单味药均显著提高(21%;69%)。结论当归或玫瑰花与白芍配伍，对其芍药苷煎出量均有显著促进作用，尤其是白芍配伍玫瑰花明显。
       【关键词】  白芍; 配伍; 芍药苷; 高效液相色谱法
       白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactifora Pall.的干燥根，味甘、酸、苦，微寒，归肝、脾经，具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳的功效。临床常用于治疗血虚或肝气不调所致的月经不调，经行腹痛、胁痛、四肢挛痛，及肝阳上亢头痛眩晕等[1]。白芍为中医临床常用药，通过与不同药物配伍，可广泛用于多种疾病的治疗[2]。现代药理研究表明，白芍主要有效成分芍药苷具有镇静镇痛、解痉解热、抗菌抗炎、保肝及增强免疫等作用[3]，与其传统功用十分相吻合。为了进一步研究配伍对其芍药苷煎出量的影响，本实验采用高效液相(HPLC)色谱法测定当归、玫瑰花药物与白芍配伍后其芍药苷煎出量，以期更好指导临床合理配伍用药。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器高效液相色谱仪(安捷伦)，色谱柱XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);真空泵：SHZ-D循环水式真空泵;分析天平(Sartorius CP225D)。
       1.2 试药芍药苷标准品，购自中国药品生物制品检定所(批号：110736-20073)。药材白芍、玫瑰花、
       当归均购于石家庄乐仁堂药店(经鉴定均符合2005版《中国药典》标准)。甲醇为色谱纯，水为双蒸馏水，其余试剂、试药均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件色谱柱为XDB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(40∶60);流速1.0 ml/min;检测波长230 nm;柱温25℃;进样量为10 μl;理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2 000[4,5]。
       2.2 对照品溶液制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷标准品10.00 mg置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成浓度为0.10 mg/ml的对照品溶液。
       2.3 供试品溶液的制备称取白芍10 g左右3份。按配伍比例(白芍∶当归=1∶1;白芍∶玫瑰花=1∶1)称取玫瑰花、当归，与其中两份白芍配伍。4种供试品均加入15倍水浸泡1 h，用武火煮沸后，改用文火，持续加热45 min，倒出药液;再加10倍水，用武火煮沸后，改用文火，持续加热30 min，后合并两次药液，浓缩至100 ml，加入1.5倍95%乙醇醇沉4h后抽滤，留取滤液，回收乙醇，将药液放凉。然后依次用石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取至无色，萃取液倒入蒸发皿中水浴挥干。残渣用甲醇溶解，置10 ml容量瓶中定容至刻度，从所得溶液中各取1 ml分别置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液(1号供试品为白芍，2号供试品为白芍配当归，3号供试品为白芍配玫瑰花)。冷藏，待用。
       2.4 阴性对照液制备精密称取当归10.079 g，玫瑰花10.097 g，按供试品制备方法进行制备，从所得溶液中取1 ml置500 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得阴性对照液。冷藏，待用。
       2.5 线性关系考察精密量取芍药苷对照品溶液2，3，4，5，6，7，8 ml分别置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。进样10 μl，在上述色谱条件下测定峰面积。得到对照品不同浓度的色谱峰峰面积，以芍药苷溶液浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=37 560 310.104X+408 791.582，r=0.999 6(n=7)。结果表明芍药苷在0.02～0.08 mg/ml浓度范围内线性关系良好。
       2.6 精密度实验精密量取芍药苷对照品溶液(0.05 mg/ml)10 μl，重复进样5次，在上述色谱条件下测定峰面积。结果为RSD=0.7%，小于3%，说明仪器精密度良好。
       2.7 稳定性实验精密量取3号供试品溶液10 μl，每隔4 h测定1次，共测定5次，在上述色谱条件下测定峰面积。峰面积的平均值为2 265 471，RSD=1.1%，结果表明样品溶液在16 h内稳定。
       2.8 重复性实验
       精密称取同一批白芍样品，按供试品溶液制备方法制备5份平行样品，进样10 μl。在上述色谱条件下测定峰面积。由峰面积得出芍药苷浓度，计算芍药苷浓度的RSD值为1.5%，结果表明本方法重复性良好。
       2.9 加样回收率实验采用加样回收率测定法，精密量取“2.3”项中1号供试品溶液5 ml，置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。精密量取1 ml，共9份，每3份1组，每组分别加入对照品溶液0.04 mg/ml)0.8，1，1.2 ml。进样10 μl，在上述色谱条件下测定峰面积，计算回收率。计算公式为：回收率(%)=(测得量-供试品含量)/加入量×100%。回收率都在95%～105%之间，平均回收率为99.51%，RSD值为2.6%，结果表明本方法回收率较高。
       2.10 样品含量测定
       将1～3号供试品溶液进样10 μl，重复进样4次。在上述色谱条件下测定峰面积，计算其中的芍药苷含量。煎出量为：单味白芍组19.8 mg/g。白芍+玫瑰花组33.4 mg/g，白芍+当归组24.6 mg/g。色谱图见图1～5。
       3 讨论
       白芍始载于《神农本草经》：“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛，利小便，益气。”在古方中，白芍充分发挥了滋阴补血、柔肝止痛、敛汗摄精、潜阳敛火等功用。究其传统方剂、临床多与肝经药物配伍，或气分药如柴胡，或血分药如玫瑰花等，以相须为用增强疗效。其功用是否与芍药苷煎出量有关，目前尚不十分清楚，故本实验选用归肝经药物当归、玫瑰花等，采用高效液相法检测其芍药苷的煎出量，以此完善或指导临床合理配伍用药，提高疗效。图1 对照品溶液高效液相色谱图图2 白芍供试液高效液相色谱图　　图3 白芍配玫瑰花供试液高效液相色谱图
       3.1 配当归对芍药苷煎出量的影响肝体阴用阳，为藏血之脏。白芍酸甘补血敛阴，调经止痛;其性酸敛，守而不走。当归补血行血，为调经良药;其性辛香性散，走而不守。二药合用，一补一敛，散敛结合，补血而不滞血，行血而不动血，养血和血之功最良[4]。本实验检测结果也证实当归对白芍中芍药苷煎出量有明显促进作用，较单味药白芍明显提高21%。图4 白芍配当归供试液高效液相色谱图　图5 阴性对照液供试液高效液相色谱图
       3.2 配玫瑰花对芍药苷煎出量的影响肝藏血，“喜调达恶抑郁”。白芍酸敛微寒，入肝走血，善补血养阴柔肝;玫瑰花味辛气香，入肝走气，善于疏达肝气而活血调经。二药配伍，养血调肝，有助药效增强。本实验结果显示该组药液中芍药苷煎出量为33.4 mg/g，较单味药白芍明显提高69%;较白芍与当归组提高27%。
       文献报道芍药苷的测定方法还有分光光度法[6]、薄层扫描法[7]、毛细管电泳法等，但均不如高效液相法准确，精密度高，应用范围广。
       综上所述，白芍经过与肝经药物配伍后，其芍药苷煎出量显著提高，其中以白芍配玫瑰花组最高，反映了中药配伍增效作用具有一定的科学性。但其不同配比及其它药物对白芍中芍药苷煎出量是否有相同作用尚有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 袁争鸣.张锡纯运用白芍经验浅析[J].中国中医急症,2005,14(10):994.
       
       [2] 彭 平,程 玲.浅论符合肝“体阴用阳”特性的配伍柴胡和白芍[J].现代中西医结合杂志,2005,14(14):1879.
       
       [3] 谭同来,眭湘宜,张咏梅,等.中药配伍十法[M].太原：山西科学技术出版社，2006：210.
       
       [4] 匡宏枫,张艳海,吴瑶庆.HPLC法测定乳腺冲剂中芍药苷的含量[J].中医药学报,2006,34(2):24.
       
       [5] 尹小娥，张 丽.HPLC测定复方赤芍片中芍药苷的含量[J].现代中医药，2004，4：56.
       
       [6] 吴英华，任凤莲，蔡小华，等.紫外分光光度法测定白芍总苷含量[J].应用化工，2007，36(8)：822.
       
       [7] 林治秘，李强容.薄层扫描法测定小建中片中芍药苷含量[J].山东医药工业，2003，22(6)：13.