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       【摘要】 
       目的探讨芦荟多糖软膏治疗浅Ⅱ度烫伤小鼠的效果及对创面愈合过程中胶原合成、TNF-α水平和ALT活性的影响。方法147只昆明种小鼠随机分为芦荟多糖软膏治疗组、基质治疗组和京万红治疗组，每组49只，采用将脱毛区置于70℃恒温水浴中6 s的方法制成10%体表面积浅Ⅱ度烫伤模型，伤情经病理切片证实。各组创面分别用芦荟多糖软膏纱布(1ml/cm2)、基质纱布(1 ml/cm2)、京万红纱布(1 ml/cm2)覆盖包扎固定后放回笼中饲养，换药1次/d，观察愈合时间，于伤后12 h，第1，3，5，7和9天，分别处死各组小鼠7只，取创面组织检测含水量、羟脯氨酸含量及TNF-α水平，取血检测ALT活性，另取7只做为正常对照。结果①创面愈合时间：芦荟多糖软膏组为(12.1±1.5)d、基质组为(15.2±3.2)d、京万红组为(12.5±1.9)d，芦荟多糖软膏组比基质组明显缩短(P<0.05)。②创面含水量：伤后第1，3，5天芦荟多糖软膏组[(76.2±2.3)%、(65.7±3.1)%、(61.2±1.8)%]创面含水量显著低于基质组[(80.7±2.1)%、(70.8±3.1)%、(66.1±1.7)%(P<0.05)]，伤后7～9 d，各组均基本恢复到正常水平。③创面羟脯氨酸含量：伤后3，5，7，9 d芦荟多糖软膏组羟脯氨酸含量显著高于基质组和京万红组(P<0.05)。④创面组织TNF-α水平：伤后12h，1d TNF-α水平达高峰，随后下降，至伤后第5天仍高于正常对照组(P<0.05)。伤后12h、1d，芦荟多糖软膏组和京万红组TNF-α水平明显低于基质组(P<0.05)。⑤ALT活性：各组小鼠各时相点血中ALT活性与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)，芦荟多糖软膏组ALT水平与基质组和京万红组比较无显著性差异(P>0.05)。结论芦荟多糖软膏能有效减少烫伤后早期创面组织TNF-α释放，减少渗出和水肿，增强创面胶原合成来促进创面愈合。
       【关键词】  芦荟多糖软膏; 浅Ⅱ度烫伤; TNF; 羟脯氨酸
       烧烫伤是日常生活中常见的创伤性疾病，芦荟作为促创面愈合药在民间使用已有一千多年，其疗效早已得到公认，民间使用时常常将芦荟的凝胶直接敷于创面，这样做既不科学，又不符合现代药物治疗学的原则。已知芦荟多糖是芦荟中促创面愈合的主要活性成分，而临床常用的促创面愈合外用药多为软膏剂，故将芦荟多糖加工成软膏剂使用较为合适。芦荟多糖软膏[1]是以芦荟多糖为主加工制备而成的软膏剂，为进一步评价芦荟多糖软膏的疗效，我们在小鼠身上复制浅Ⅱ度烫伤模型，以制作芦荟多糖软膏所用的基质为对照，以京万红为阳性对照，观察了芦荟多糖软膏用于治疗烫伤的疗效并探讨了可能的作用机制。
       1 材料与仪器
       1.1 动物及主要试剂昆明种3月龄小鼠，雌雄各半，体质量28～36 g/只，本院动物实验中心提供;芦荟多糖软膏及基质按文献[1]方法配制;京万红软膏(天津达仁堂制药二厂生产);谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、羟脯氨酸检测试剂盒(南京建成生物工程公司);其他试剂均为国产分析纯。
       1.2 主要仪器UV-Vis分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);Medal680酶标仪(美国Bio-Rad公司);HH-2型数显恒温水浴锅(国华电器公司)。
       2 方法
       2.1 动物模型制作及分组[2]将小鼠背部用8%的Na2S水溶液脱毛，脱毛后适应1 d，禁食，乙醚麻醉，脱毛区放入70℃恒温水浴中6 s，制备10%浅Ⅱ度烫伤模型，造模成功标准以病理切片下见真皮乳头层有明显充血、水肿和白细胞浸润，胶原纤维肿胀、离散为准。将各烫伤小鼠随机分为3组，即芦荟多糖软膏组(A)、基质组(B)、京万红组(C)，每组49只，各组小鼠分别外用芦荟多糖软膏纱布(1ml/cm2)、基质纱布(1ml/cm2)、京万红纱布(1ml/cm2)覆盖，包扎固定后分笼饲养，每日换药1次，在伤后12 h，第1，3，5，7和9天，分别处死各组小鼠7只，取标本检测，每组中所剩7只用于观测创面愈合时间。另取7只小鼠不烫伤，作为正常对照组。
       2.2 检测指标①创面愈合时间：观察记录创面瘢痕完全脱落所需时间。②创面含水量测定[3]：处死小鼠后，取创面组织约1g，称重，放入80℃烤箱中，烘烤72 h后称重，组织含水量=(湿重-干重)/湿重×100%。③创面羟脯氨酸含量测定[4]：处死小鼠后，取创面组织适量，按文献[4]方法测羟脯氨酸含量。④创面组织TNF-α水平测定：取创面全程皮肤组织0.1g，称质量后置1ml生理盐水中碾磨制成匀浆，4℃，10 000 r/min离心15 min,收集上清液按试剂盒说明ELISA法检测。⑤ALT活性测定：在各时间点通过断尾法取小鼠的静脉血按试剂盒说明检测。
       2.3 统计学处理所获数据均以 ±s表示，应用SPSS 12.0统计软件进行方差分析，组间，组内比较采用ANOVA分析。
       3 结果
       3.1 创面愈合时间芦荟多糖软膏组小鼠烫伤后创面愈合平均时间为(12.1±1.5) d，与基质组平均时间(15.2±3.2)d明显减少，有统计学意义(P<0.05),与京万红组(12.5±1.9)d比较无差异(P>0.05)。结果见图1。
       3.2 创面组织含水量烫伤后各组小鼠创面组织含水量均较对照组显著增高，伤后12 h达到高峰，其后开始下降。伤后第1，3，5天芦荟多糖软膏组的小鼠创面含水量显著低于基质组(P<0.05)，与京万红组比较无显著差别(P>0.05)，第7天以后各组小鼠创面含水量则没有显著差异。结果见表1。
       3.3 创面羟脯氨酸含量烫伤后各组小鼠创面羟脯氨酸含量进行性增加，但从烫伤后第3天起芦荟多糖软膏组小鼠创面羟脯氨酸含量增加的速度较快，各对应时相点羟脯氨酸含量均显著高于基质组和京万红组(P<0.05)。结果见表2。与基质组比较，*P<0.05图1 小鼠烫伤后创面愈合平均时间表1 各组小鼠创面组织不同时间含水量变化
       3.4 创面组织TNF-α水平各组小鼠创面组织TNF-α水平均高于烫伤前正常对照组(P<0.05)，伤后12 h至1 d达高峰，随后逐渐下降，至伤后第5天仍高于烫伤前正常对照组(P<0.05)。伤后7 d后各组TNF水平基本恢复至正常。烫伤后12 h，1d，3 d，芦荟多糖软膏组和京万红组与基质组比较，创面组织中TNF水平减少(P<0.05);芦荟多糖软膏组和京万红组比较，差异无统计学意义。结果见表3。表3 各组小鼠创面不同时间TNF-α水平变化
       3.5 烫伤小鼠谷丙转氨酶水平各组小鼠各时相点血中ALT活性与烫伤前相比较无显著性差异(P>0.05)，伤后各时相点芦荟多糖软膏组ALT水平与基质组和京万红组比较亦无显著性差异(P>0.05)。结果见表4。
       4 讨论
       渗出和水肿是烫伤的一个重要特征，烫伤后由于血管通透性增高，大量血管内液外渗，导致水肿形成，随着局部水肿的形成，组织内压不断上升，当组织内压超过静脉压时，回流发生障碍，血管渗出更多，水肿加剧，形成恶性循环[5]，故在烫伤后早期有效抑制水肿尤为重要。本实验结果显示烫伤后各组小鼠创面组织含水量均显著增高，伤后12h达高峰，伤后第1，3，5天芦荟多糖软膏组小鼠创面含水量显著低于基质组，表明芦荟多糖软膏能有效降低烫伤后创面水肿，这与Somboonwong J等[6]报道的芦荟能显著减轻创面毛细血管微静脉扩张和降低其渗透性结果一致。表4 各组小鼠伤后不同时间ALT水平变化胶原合成是创面愈合过程的主要特征，在以上皮缺损为主的浅Ⅱ度烫伤创面中，早期成纤维细胞合成胶原增多，晚期随着表皮细胞逐渐覆盖创面，胶原合成受到抑制而逐渐恢复至烫伤前水平，羟脯氨酸是胶原的主要成分，其所占比例相对恒定，测定羟脯氨酸的含量便可反应胶原的水平，本实验中各组小鼠创面羟脯氨酸的含量随着时间的延长均有增加，但第3天开始芦荟多糖软膏组羟脯氨酸的含量就显著高于基质组和京万红组，说明芦荟多糖软膏有促进创面胶原合成的作用。
       炎症反应全程参与了创面的损伤和修复， TNF是参与炎症反应的主要细胞因子之一。烧伤后创面组织细胞和炎症细胞大量释放炎症因子引发局部炎症反应，并同时启动和调控创面修复，使细胞进入增殖修复状态，并在生长因子作用下，促进细胞增殖及细胞间基质蛋白合成。有研究表明，IL-1β，IL-6，IL-8还可以与TNF、HGF等因子协同，刺激创面基底部的自体成纤维细胞的增殖及毛细血管的新生[7]。本研究结果显示，烫伤后创面局部组织中TNF增加，但芦荟多糖软膏组在各时相点尤其是在烫伤后3d内，均能减少创面局部组织中TNF的释放，表明芦荟多糖软膏可以有效减少创面组织中TNF等炎症因子的过度合成和释放，控制炎症反应强度，从而减轻过度的炎症反应对创面的损伤。
       总体来看，芦荟多糖软膏组创面平均愈合时间为12.1 d，比空白对照组的15.2 d显著缩短，推测其机理，可能与芦荟多糖软膏能促进创面胶原合成、减轻创面水肿以及过度的炎症反应有关, 结果还显示芦荟多糖软膏对小鼠的肝功能无显著的影响，表明芦荟多糖软膏是一种值得开发的烫伤治疗外用药。
       【参考文献】
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       [4] 杨秀颖，杜冠华.组织羟脯氨酸含量微量测定方法及应用[J].中国药理学通报，2004，20(7):836.
       
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       [7] Zhao RZ， Chen X， Yao Q， et al. TNF-alpha induces interleukin-8 and endothelin-1 expression in human endothelial cells with different redox pathways[J].Biochem Biophys Res Commun， 2005，327(4):985.