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       【关键词】  壮尔颗粒；,,免疫；,,吞噬功能；,,溶血素；,,T淋巴细胞
       摘要：目的观察壮尔颗粒对小鼠免疫功能的影响。方法采用氢化可的松造模法制作免疫抑制小鼠模型，进而观察壮尔颗粒对其腹腔巨噬细胞吞噬功能、溶血素形成、淋巴细胞转化的影响。结果壮尔颗粒能明显提高正常小鼠和免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数、血清溶血素含量和淋巴细胞转化率。结论壮尔颗粒对机体免疫功能有显著增强作用。
       关键词：壮尔颗粒；  免疫；  吞噬功能；  溶血素；  T淋巴细胞
       Immunopharmacological Studies of Zhuang"er Granules in Mice
       LI Hong, SONG Tieding,  HONG Qi, DENG Baozhong
       （Liaoning College of TCM,Shenyang 110032, China; The Attached Hospital to Liaoning College of TCM,Shenyang 110032,China）
       AbstractObjectiveTo investigate the immunological effects of Zhuang"er Granules in mice.MethodsThe immunodepression mice models were induced by injection of hydrocortisone.The  influences of Zhuang"er Granules on phagocytic function of macrophage,formation of serum hemolysin,and rymphocyte transformation both in normal and model mice were observed. ResultsZhuang"er Granules could obviosly incease the rate of swallow, swallow index, content of hemolysin and transition rate of lymphocyte.ConclusionZhuang"er Granules can markedly improve the immunity.
       Key wordsZhuang"er Granules;  Immunity;  Phagocytosis;  Serum hemolysin;  T-lymphocyte
   
　　壮儿颗粒由黄芪、生地、太子参等制成的中药制剂，具有益气养阴、扶正补虚之功效，临床应用对小儿气阴两虚型反复呼吸道感染（RRT）有很好的疗效。本实验旨在从免疫学角度对壮尔颗粒治疗 RRT的机制进行探讨。
       　　1  器材
       壮尔颗粒（由黄芪、生地、太子参等中药组成，3.665 g生药/g颗粒），辽宁中医学院附属医院制剂中心生产，批号：040402；益气养血口服液，吉林修正药业集团通化市制药有限公司生产，国药准字 Z22023392，生产批号：20031025；氢化可的松：黑卫药准字（1982）第100267号，0.1 g/20 ml，齐齐哈尔第二制药厂生产，生产批号03040801。植物血凝素（PHA）：上海伊华医学科技有限公司，批号：20030216。OLYMPUS显效微镜：日本产。恒温干燥箱：DH64型，上海医疗器械产生产。分光光度计：UV-765日本岛津。游标卡尺：北京仪器厂生产。昆明种小鼠，雌雄各半，体重20~26 g，普通级，由辽宁中医学院实验动物中心提供。
       　　2  方法与结果
       2.1  分组按性别、体重随机分成6组：正常生理盐水对照组，正常2.0 g/kg壮尔颗粒组，免疫抑制生理盐水对照组，免疫抑制壮尔颗粒2.0 g/kg低剂量组，免疫抑制壮尔颗粒 4.0 g/kg中剂量组，免疫抑制壮尔颗粒8.0 g/kg高剂量组，免疫抑制益气养血口服液2.0 ml/kg阳性对照组，每组10只。
       2.2  造模及给药药物分别配成10%，20%，40%浓度，益气养血口服液使用原浓工，灌胃给药2.0 ml/kg。正常生理盐水对照组，正常给药组连续灌胃给予生理盐水或药物7 d，2次/d，然后各鼠均皮下注射氢化可的松2.0 ml/kg，1次/d，连续5 d，注射氢化可的松的同时，各给药组均继续灌胃给予生理盐水或药物。
       2.3  对小鼠腹腔巨噬功能的影响［1，2］正常生理盐水对照组，正常给药组给药后的第5天，每鼠腹腔注射5%灭菌淀粉溶液1.0 ml，末次给药后1 h，每鼠腹腔注射生理盐水1.0 ml，1 min后剪开腹壁，抽取腹腔洗液涂片；各免疫抑制组于给药后的第6天注射灭菌淀粉溶液和 CRBC悬液，方法和剂量均同前，2 h后处死，涂片。经孵育、染色、晾干后在油镜下每片计数100个巨噬细胞，计数已吞噬 CRBC的总数。按下列公式计算每鼠巨噬细胞的吞噬百分充和吞噬指数并进行组间 t检验。结果见表1。结果显示，壮乐颗粒对正常小鼠具有显著增强巨噬细胞吞噬功能的作用，与正常生理盐水对照组相比，使吞噬百分率和吞噬指数均有显著提高，而且比较有显著性差异（P＜0.05）。氢化可的松可显著抑制巨噬细胞的吞噬功能。各免疫抑制组经壮尔颗粒防治后，被抑制的免疫功能得到显著恢复，其吞噬百分率、吞噬指数与免疫抑制对照组相比均显著提高，而且比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），作用呈量效关系。
       吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数     200个巨噬细胞
       吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数     200个巨噬细胞
       表1  壮尔颗粒增强巨噬细胞吞噬功能作用（略）
       与正常对照组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01，*与免疫抑制对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，n=10
       2.4  对小鼠血清溶血素生成的影响［3］正常对照组，正常给药组连续灌胃给予生理盐水或药物3 d后，每只小鼠腹腔内注射0.2 ml绵羊红细胞（SRBC），注射 SRBC后，再继续给药4 d，于末次给药后1 h，眼眶采血，进行溶血素的测定；各免疫抑制组在注射氢化可的松后的第2天，注射 SRBC，再继续给药4 d，末次给药后1 h，眼眶采血测定血清溶血素。对给药组动物的 HC50值与对照组 HC50组进行组间t检验。结果见表2。结果显示，壮尔颗粒对正常小鼠具有显著提高血清溶血素含量的作用，HC50与正常生理盐水对照组相比显著提高（P＜0.05）。氢化可的松显著抑制小鼠血清血素的生成，HC50显著降低。各免疫抑制组经壮尔颗粒防治后HC50提高，并且与免疫抑制对照组比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），作用呈量效关系。
       表2  壮尔颗粒提高血清溶血素的含量（略）
       与正常对照组比：※P＜0.05，※※P＜0.01，*与免疫抑制对照组比：*P＜0.05，**P＜0.01，n=10
       2.5  对小鼠淋巴细胞转化率的影响［4］正常生理盐水对照组，正常给药组第3天末次给药后1 h，肌肉注射 PHA 6 mg/kg，1次/d，连续3 d，注射 PHA的同时继续胃给药，停用 PHA后再灌胃给药1 d，眼眶采血推片，姬母萨―瑞特氏染色。各免疫抑制组于注射氢化可的松的第2天末次给药后，开始注射 PHA，剂量和方法同前。染色后每片油镜下计数100个淋巴细胞，计算淋巴细胞及过渡型淋巴细胞所占的百分率并进行组间 t检验。结果见表3。结果显示，壮尔颗粒对 PHA诱导的正常小鼠淋巴细胞转化具有协同促进作用，可显著提高淋巴细胞转化的百分率，与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。氢化可的松可显著抑制 PHA所诱导的小鼠淋巴细胞转化，使免疫抑制对照组的淋巴细胞转化的抑制作用，对 PHA所诱导的淋巴细胞转化具有显著的协同提高作用，而且与免疫抑制作用，对 PHA所诱导的淋巴细胞转化具有显著的协同提高作用，而且与免疫抑制对照组比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），作用呈量效关系。
       表3  壮尔颗粒促进淋巴细胞转化作用（略）
       与正常对照组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01，*与免疫抑制对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，n=10
       　　3  讨论
       现代医学认为免疫功能低下是 RRT的主要原因。目前，有众多临床研究显示：体液免疫和细胞免疫功能低下，患儿血清免疫球蛋白 IgA，IgM，IgE及补体 C3水平低于正常；红细胞免疫功能低下可引起 RRTI［5］。因此，治疗和预防 RRT就应该提高患儿机体的免疫功能。巨噬细胞属机体的非特异性免疫细胞，在有异物侵入的时候，从血液中释放出巨噬细胞吞噬异物，红细胞相对小鼠是异体抗原性物质，当被注入小鼠腹腔后，可引起腹腔巨噬细胞聚集并吞噬，这是一项衡量机体非特异性免疫功能的主要指标，因此可用其检测药物对机体防御能力的影响［6］。实验中壮尔颗粒提高小鼠巨噬指数，说明壮尔颗粒具有增强机体非特异性免疫功能的作用，这种增强免疫的作用可增强机体抵抗病原微生物的功能。血清溶血素的含量是反映机体的体液免疫水平的一个可靠指标［7］，壮尔颗粒各组均可以显著增高小 鼠的 HC50含量（P＜0.01），且呈剂量相关性，随剂的增加 HC50的含量亦相应增加，说明壮尔颗粒剂可以提高抗原诱导循环抗体水平，从而实现提高机体的体液免疫力的作用。通过淋巴细胞转化实验测定外周血中 T细胞转化率，可判断机体的细胞免疫力功能水平，壮尔颗粒对 PHA诱导的正常小鼠和免疫抑制小鼠的淋巴细胞转化，均具有显著差异性（P＜0.05），作用呈量效关系，说明壮尔颗粒具有提高机本细胞免疫的功能。综上所述，可以推断壮尔颗粒对气阴两虚型 RRT小儿的治疗作用，可能是通过提高机体的非特异性和特异性免疫功能实现的。
       　　参考文献：
       ［1］  陈  奇.中药药理研究方法学［M］北京：人民卫生出版社，1993：315，982，750，275，78，780，305.
       ［2］  吕昌龙，谢光临.乌贼墨对小鼠免疫功能的影响［J］.中国海洋药物杂志，1994，4（52）：23.
       ［3］  徐学瑛. 一个改进的体液免疫测定方法――溶血素测定法［J］.药学学报，14（7）：7.
       ［4］  吴  铁.用 PHA在小鼠体内诱发淋巴细胞转化的初步观察［J］.上海免疫学杂志，1984，4（1）：57.
       ［5］  刘春援.小儿反复呼吸道感染的病因与治疗［J］.江西中医药，2001，32（5）：53.
       ［6］  徐叔云.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1982：936.
       ［7］  王胜春，胡咏武，李剑锋，等.复方中药五灵胶囊对小鼠免疫功能的影响［J］.第四军医大学学报2002，23（16）：1518.

　　基金项目：辽宁省沈阳市科技委员会基金资助（NO.1032041-1-04）
       (辽宁中医学院，辽宁 沈阳  110032；辽宁中医学院附属医院，辽宁 沈阳  110032)