文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的优选复方贞术调脂胶囊水提液最佳絮凝澄清工艺。方法采用正交实验法，以丹酚酸B、总多糖、总酚酸含量及总固体得率为指标，考察壳聚糖用量、药液浓度及pH值对絮凝澄清工艺的影响。结果壳聚糖用量对丹酚酸B、总多糖、总酚酸的含量及总固体得率有显著性影响(F <0. 05)，药液浓度、pH无显著性影响。结论生药∶药液= 1∶3,，pH=4.0，壳聚糖加入量为0.24 ml/g生药为最佳絮凝澄清工艺。
       【关键词】  复方贞术调脂胶囊; 壳聚糖; 澄清工艺
       复方贞术调脂胶囊为多年临床经验方，用于高脂血症及脂代谢紊乱相关疾病的治疗，疗效显著，已获国家发明专利。该方由丹参、白术、佛手等中药组成，具有健脾益肾、舒肝化痰、理气凉血、祛瘀解毒之功效。前期研究结果显示，丹参、白术、佛手中水溶性组分具有调节血脂，抗脂质过氧化，抗动脉粥样硬化等作用[1～3]。因此，丹参、白术、佛手等药材以水为提取溶剂进行提取，但在有效成分被提取出的同时，大量水溶性杂质也被提出。为去除杂质，富集有效成分，提高制剂的稳定性，在前期实验研究确定采用壳聚糖絮凝法精制的基础上，本实验进一步采用正交实验法，以丹酚酸B、总酚酸、总多糖含量及总固体得率为指标，优选最佳的絮凝澄清精制工艺条件。
       1 仪器与试药
       DIONEX ultimate3000(德国);UV-1101型分光光度计(上海天美);RE-52AA旋转蒸发器(上海嘉鹏科技有限公司);BS423S型电子分析天平(北京赛多利斯);KQ-250型医用超声波清洗机(昆山超声仪器有限公司，功率250W)。壳聚糖(上海华凯科技贸易公司);原儿茶醛对照品(110810-200205，供含量测定用)，丹酚酸B对照品(111562-200706，供含量测定用)均购自中国药品生物制品检定所。
       2 方法与结果
       2.1 提取液的制备 按处方量称取丹参、白术、佛手等药材，加水7倍量，提取3次，1 h/次。滤布(50 μm)滤过，浓缩，定容至3 000 ml，作为样品溶液。
       2.2 壳聚糖絮凝剂的制备称取壳聚糖1 g，加入2%的醋酸溶液100 ml，搅拌，静置24 h，搅拌均匀，配制成1%的溶液。
       2.3 精制工艺实验根据预实验结果，选出壳聚糖用量、药液浓度、pH值3个试验因素，每因素3水平(见表1)。按 L9(34)正交实验表进行实验安排，在一定温度(50℃)下，加入壳聚糖絮凝剂，搅匀(50r·min-1)，静置，离心，取上清液，定容，作为样品溶液。分别测定各样品溶液中总多糖、总酚酸、丹酚酸B的含量及总固体得率。表1 因素水平
       2.4 总多糖含量测定
       2.4.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的无水葡萄糖0.055 6 g，加水溶解并定容50 ml量瓶中，制成每毫升含1.112 mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml至50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取上述各浓度溶液2 ml，分别加入2%苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5 ml，摇匀，静置5 min，至沸水浴中加热15 min，取出，快速用冷水冷却至室温。以水为空白，同样显色操作制备空白对照，于紫外可见分光光度计490 nm波长处测其吸光度。以葡萄糖毫克数为横坐标，以吸光度为纵坐标，得回归方程Y =2.8122X+0.140 6，r=0.999 3。葡萄糖在0.022 24～0.133 44 mg范围内与吸光度呈良好线性关系。
       2.4.2 供试品溶液制备分别精密量取各正交实验所得浓缩液各100 ml，加乙醇使含醇量达85%，静置，滤过，滤渣分别用无水乙醇、丙酮洗涤，干燥，加水溶解并定容至25 ml，作为供试品溶液。
       2.4.3 稳定性考察精密量取供试品溶液100 μl，置25 ml刻度试管中，按“2.4.1”项下方法操作，测定吸光度，然后每隔30 min测定1次(n=6)，150 min内吸光度基本不变，表明供试品在150 min内基本稳定。
       2.4.4 含量测定 精密量取各供试品溶液100 μl，置25 ml试管中，按“2.4.1”项下方法操作，测定吸光度，计算总多糖的含量。结果见表2。
       2.5 总酚酸测定
       2.5.1 原儿茶醛标准曲线的绘制 精密称取原儿茶醛对照品0.014 22 g于25 ml量瓶中，加水溶解定容至刻度，摇匀，即得。分别吸取原儿茶醛对照品溶液0.5，1，1.2，1.5，2 ml于20 ml量瓶中，分别加入0. 5%亚硝酸钠溶液5 ml，摇匀，放置12 min后，加入10%硝酸铝溶液0. 5 ml，摇匀，放置12 min后，加入1 mol·L-1氢氧化钠溶液5.0 ml，加水稀释至刻度，摇匀，10 min 后，用紫外可见分光光度计于 490 nm波长处测定吸光度[4]，以原儿茶醛毫克数对吸光度绘制标准曲线，结果原儿茶醛在0.284 4～1.137 6 mg范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=0.9314X-0.066 6，r=0.998 8。
       2.5.2 稳定性实验精密量取供试品溶液于20 ml量瓶中，按“2.5.1”项下方法操作，每间隔10 min测定1次，测定结果表明，显色后60 min内供试品基本稳定。
       2.5.3 含量测定 精密量取各供试品溶液100 μl，置25 ml刻度试管中，按“2.5.1”项下方法操作，测定吸光度，计算总酚酸含量。结果见表2。
       2.6 丹酚酸B含量测定
       2.6.1 色谱条件与系统试用性 色谱柱Kromasil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm );流动相 甲醇-乙腈-0.1%甲酸(24∶10∶66);流速 1 ml·min-1;检测波长286 nm;进样10 μl。
       2.6.2 标准曲线绘制精密称取丹酚酸B对照品0.011 590 g，加75%甲醇制成每毫升含0.2318 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液5，10，20，30，40，60 μl注入液相色谱仪，按上述条件测定丹酚酸B色谱峰面积，以丹酚酸B微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。丹酚酸B的回归方程为 Y=8.793 2X-0.188 1，r =0.999 9。表明丹酚酸B在0.464～13.908 μg范围内峰面积积分值与丹酚酸B微克数呈良好的线性关系。
       2.6.3 含量测定 分别吸取对照品溶液、各供试品溶液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液各20 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算样品中丹酚酸B的含量。结果见表2。
       2.7 总固体得率的测定分别精密量取各正交实验样品溶液50 ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105℃干燥5h，于干燥器内冷却至室温，称定，待恒重时，精密称重，计算总固体得率。结果见表2。
       2.8 工艺优选由表2分析可知，影响壳聚糖絮凝澄清工艺的主要因素为C>B>A，即壳聚糖用量>pH>药液浓度，最佳精制工艺为A2B2C2。方差分析(表3)可知，C因素为显著因素，即壳聚糖用量对丹酚酸B、总多糖、总酚酸的含量及总固体得率有显著性影响( F <0. 05)，B因素和A因素即药液浓度和pH无显著影响。由此确定复方贞术调脂胶囊水提液的最佳精制工艺条件为：将药液浓缩至生药∶药液= 1∶3，调节pH为4.0，壳聚糖加入量为0. 24 ml/g生药，搅匀，静置，离心，取上清液备用即可。表2 L9(34)正交实验结果表3 方差分析
       3 讨论
       正交实验中，以pH值为考察因素，因为在酸性条件下，壳聚糖分子链中的胺基在酸性条件下与氢离子结合成 – NH3+ 阳离子，使壳聚糖具有阳离子型絮凝剂的电中和和吸附交联双重作用，澄清效果好。
       在预试验中，发现药液温度对实验结果也有影响。随着药液温度的升高，总固体得率下降，有效成分含量增加;但温度过大时，总固体得率增加，有效成分含量却减少，药液温度50℃为宜。温度过低或过高都不利于澄清，絮凝温度提高，体系内胶体粒子热运动的速度也逐渐增加，与胶体颗粒的碰撞频率增加，电中和、吸附架桥作用比较充分，因此，絮凝比较彻底;当温度过高时，沉降的速度加快，絮凝剂对体系中剩余胶体颗粒的絮凝作用则不够充分。
       采取合适的速度搅拌药液，其目的是增加微粒与絮凝剂的接触碰撞机会;但速度过快，不仅使絮凝剂与杂质形成絮团沉降，而且使有效成分颗粒与絮凝剂形成絮团沉降，从而使有效成分含量下降，以50 r·min-1为宜。
       【参考文献】
         　[1] 唐春萍,郭 姣.调脂灵对高脂血症大鼠脂代谢酶及载脂蛋白的影响[J].广东药学院学报,2007,23(2):175.
       
       [2] 唐春萍,郭 姣,杨超燕,等.调脂灵对高脂血症大鼠脂质过氧化、血液流变学的影响[J].中药材,2007,30(7):837.
       
       [3] 唐春萍,郭 姣.调脂灵对高脂血症大鼠降脂作用实验研究[J].中国实验方剂学, 2007,13(5): 24.
       
       [4] 刘峰群,曹 红,靳守东,等.比色法测定消癌平注射液中总酚酸的含量[J].华西药学杂志，2003 ,18(3)：220.