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       【关键词】  ZTC1+1
       摘要：目的研究ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂处理玉屏风口服液的最佳工艺。方法以多糖保留率、黄芪甲苷保留率、药液澄清度为考察指标，采用单因素考察法，优选最佳除杂工艺条件。结果优选出的最佳工艺条件是：提取液浓缩至1∶10，5％澄清剂用量，按先B组分后加A组分的次序以100 r・min-1的搅拌速度进行。结论ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂的澄清工艺可作为玉屏风口服液的除杂工艺。
       关键词：ZTC1+1Ⅱ；  天然澄清剂；  玉屏风口服液
       Studies on ZTC1+1 Natural Clarify Agents Used on Yupingfeng Oral Liquid
       ZHAO Shaohua, LIU Wenjuan, YAO Daolu, JING Yuntiao, WANG Yong
       (Hebei Yiling Academy of Medicine, Shijiazhuang 050035, China)
       Abstract：ObjectiveTo study the optimum process of ZTC1+1Ⅱ natural clarify agents used on Yupingfeng Oral Liquid.MethodsUsing the remaining rates of polysaccharide ,astragaloside Ⅳ and the defecation level as the raw material,the optimum process of  removing impurity was investigated with single-factor test. ResultsThe optimum process conditions were: merging the extract solution, condense to 1∶10(hurb:the hurb solution), in the liquid,the concertration of ZTC1+1Ⅱ natural clarify agents was 5%,the adding sequence of ZTC1+1Ⅱ natural clarify agents was clarifier B before clarifier A and the liquid was mixed at 100 r・min-1. ConclusionThe process of  removing impurity with ZTC1+1Ⅱ natural clarify agents can be used as the removing impurity of Yupingfeng Oral Liquid.
       Key words：ZTC1+1Ⅱ；  Natural clarify agents；  Yupingfeng Oral Liquid
   
　　玉屏风口服液是益气固表止汗的经典方剂，对机体免疫功能的调节作用是其主要的药理作用。该方由黄芪、防风、白术三味药组成，多糖为三味药共有的成分，也是提高机体免疫功能的主要药效成分。目前生产上玉屏风口服液常用的除杂方法为醇沉，该方法多糖损失率较大，且存在药液澄明度差、易析出沉淀的不稳定情况，因此，为寻找更好的方法，本文研究了ZTC1+1Ⅱ的处理工艺。
       　　1  仪器与试药
       1.1  仪器电热套981B型（天津市泰斯特仪器有限公司）；挥发油提取器（上海玻璃仪器厂）；旋转蒸发器RE52A（上海亚荣生化仪器厂）；低速大容量多管离心机LXJⅡB；紫外分光光度计UV2550；Hp1100高效液相色谱仪；Alltech 2000 ELSD检测器。
       1.2  试药ZTC1+1Ⅱ（天津正天成澄清技术有限公司，津卫食准字（120号）第35881号）；黄芪购自河北以岭饮片有限公司，经鉴定为豆科植物蒙古黄芪的干燥根；防风购自河北以岭饮片有限公司，经鉴定为伞形科植物防风的干燥根；白术购自河北以岭饮片有限公司，经鉴定为菊科植物白术的干燥根茎；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：0781200109）；葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：08339501）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  含量测定方法
       2.1.1  多糖含量的测定方法［1］采用硫酸苯酚法测定。苯酚试剂的配制：称取苯酚（AR）4.0 g，加水100 ml使溶解，至棕色瓶中，得浓度为4％苯酚溶液，置冰箱中保存。对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖30 mg，至50 ml容量瓶中，加水溶解、稀释至刻度，摇匀，即得。标准曲线的测定：精密吸取对照品溶液0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密吸取上述各溶液2.0 ml，置10 ml具塞试管中，分别加4％苯酚溶液1 ml，混匀，迅速加入硫酸7.0 ml，摇匀，于40℃水溶中保温30 min，取出置冰水浴中5 min，取出，以第1份为空白，照分光光度法（中华人共和国药典2000年版Ⅰ部，附录ⅤA），在490 nm处测定吸收度，经回归得标准曲线方程：Y=11.450 0X－0.035 40，r＝0.999 4样品溶液测定：精密量取一定量样品溶液（按各试验项下的要求取样），加无水乙醇，边加边振摇，使含醇量为80％，2 000 r/min离心20 min，吸取上清液，沉淀以水溶解，转移置50 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得粗多糖溶液。精密吸取上述各溶液2.0 ml，置10 ml具塞试管中，分别加4％苯酚溶液1 ml，混匀，迅速加入硫酸7.0 ml，摇匀，于40℃水溶中保温30 min，取出置冰水浴中5 min，取出。以蒸馏水为空白，同法制得空白对照溶液，在490 nm处测定吸收度，根据回归方程计算总多糖含量。总多糖保留率＝澄清剂处理后提取液中多糖的量（g）／提取液中多糖的量（g）
       2.1.2  黄芪甲苷的含量测定方法照高效液相色谱法（《中国药典》2000年版Ⅰ部附录VI  D）测定。色谱条件与系统适用性实验：C18柱；以乙腈水（35∶65）为流动相；流速1.0 ml/min蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3 200。对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.4 mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密量取本品50 ml，用水饱合正丁醇振摇提取5次，60 ml/次，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，50 ml/次，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液5，20 μl及供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。黄芪甲苷保留率＝澄清剂处理后提取液黄芪甲苷的量（g）／提取液中黄芪甲苷的量（g）
       2.2  提取液的制备工艺按处方比例称取白术（炒）、防风、黄芪，防风用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余黄芪等二味加水煎煮二次（时间分别为1.5，1 h），合并煎液及防风提油后的水液，滤过，滤液浓缩至适量。
       2.3  澄清剂溶液的配制采用ZTC1+1Ⅱ天然澄清剂。按说明书配制如下：A组分溶液：称取5.0gA组分细粉，先用少量水搅拌成糊状，再加水至500 ml，溶胀24 h。搅拌，双层纱布滤过，即得1％粘胶液。B组分溶液：称取5.0gB组分细粉，用少1％醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1％醋酸至500 ml，溶胀24 h。搅拌，双层纱布滤过，即得1％粘胶液。
       2.4  澄清剂用量考察按处方比例称取处方药材500 g，按提取工艺制得提取液，并浓缩至药材（g）∶药液（ml）为1∶10，得浓缩液5 000 ml。分别取浓缩液500 ml各3份,，加热至70℃左右，按2％，5％，10％量分别加ZTC1+1Ⅱ澄清剂B组分和A组分，边加边以50 r/min匀速搅拌。静置30 min后2 000 r/min离心10 min，取上清液测各指标并观察澄清情况(多糖测定的取样量为5.0 ml)。结果见表1。
       表1  不同澄清剂用量除杂效果比较（略）
       根据上述结果可以看出， 2％用量对总多糖的保留率较好，但离心后药液微有浑浊；10％用量总多糖保留率最低，离心后药液澄清度也不是很好； 5％用量总多糖保留率较2％稍低，离心后药液澄清；3个浓度黄芪甲苷的保留率无差别；综合考虑多糖保留率及药液澄清情况，选择5％用量。
       2.5  澄清剂加入次序的确定根据ZTC1+1Ⅱ澄清剂使用说明，对澄清剂A、B组分的加入次序进行筛选。分别取前述浓缩液（1∶10）500 ml两份，加热至70℃，加A、B组分各25 ml。样品1液先加B组分，后加A组分；样品液2相反。考察两种加入次序澄清效果(多糖测定的取样量为5.0 ml)。结果见表2。
       表2  加入次序对除杂效果的影响（略）
       根据上述结果可看出，ZTC1+1Ⅱ澄清剂A、B组分的加入次序应为先加B组分后加A组分。
       2.6  提取液浓度的考察取浓缩至处方药材重（g）：提取液体积（ml）为1∶2，1∶5，1∶10的提取液各500 ml，70℃左右按5％浓度加入澄清剂，搅拌速度50 r/min观察澄清效果(多糖测定的取样量依次为精密量取1.0 ，2.5，5.0 ml上清液)。结果见表3。
       表3  提取液浓度对除杂效果的影响（略）
       根据以上结果可看出，提取液浓度较稀时，澄清效果较好，同时，浓度较大时，有效成分损失也较大，因此，将药液浓度定为1∶10较合理。
       2.7  搅拌速度的考察取提取液（1∶10）500 ml，分装于5个100 ml的烧杯中，每个烧杯100 ml， 70℃左右依不同搅拌速度加入ZTC1+1Ⅱ澄清剂A、B组分各5 ml，每组均搅拌10 min。停止搅拌，观察絮状沉淀形态和沉降情况。结果见表4。
       表4  搅拌速度对澄清效果的影响（略）
       根据以上结果可看出，当搅拌速度为100 r/min时，很快形成大块的团状沉淀，且很快地沉降到烧杯底部，因此将搅拌速度定为100 r/min较为合理。
       　　3  结果
       根据以上的考察结果，吸附澄清剂最佳使用方法定为：提取液浓缩至1∶10，5％澄清剂用量按先B组分后加A组分的次序以100 r/min的搅拌速度进行。按此工艺生产3批样品（10 000 ml），同时按醇沉工艺生产3批样品进行对比，验证试验结果。结果见表5。
       表5  ZTC1+1Ⅱ除杂工艺与醇沉除杂工艺生产样品的结果比较（略）
       实验结果表明，新工艺较醇沉工艺先进可行，多糖保留率较原工艺明显提高，药液澄明无沉淀，且耗时短，效率高，适合大生产，耗用乙醇量也相应减少。
       　　4  讨论
       药液放置3个月后观察，ZTC1+1Ⅱ工艺的溶液仍澄明，无沉淀析出，而醇沉工艺澄清情况不如ZTC1+1Ⅱ工艺，说明本工艺比原工艺稳定。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：64.
       (河北以岭医药研究院，河北  石家庄  050035)