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       【关键词】  鬼针草；,,总黄酮；,,大孔树脂
       摘要：目的研究大孔吸附树脂富集纯化鬼针草总黄酮的最佳工艺条件及参数。方法采用不同浓度的乙醇梯度洗脱,以紫外分光光度法测定鬼针草总黄酮收率和纯度为指标。结果实验条件下，采用D301型大孔树脂进行吸附,20%乙醇100 ml洗脱，经大孔树脂处理后浸膏的总黄酮含量可达60%以上。结论 该法可为鬼针草新制剂的研制与生产提供原料药。
       关键词：鬼针草；  总黄酮；  大孔树脂
       Study on the Isolation and Purification of Total Flavonoids from Bidens bipinnataL. with Macroporous Resin
       WEI Yingqin, MA Yi, WANG Yunyun
       （College of Chemical Engineering, Shandong College of Light Industry, Jinan 250100，China）
       Abstract：ObjectiveTo explore the optimal purification condition of total flavonoids from Bidens bipinnata L. with macroporous resion.MethodsGradient elution was used to elute the components absorpted on macroporous resin guided by the isolation-purification degree and the recovery rate.ResultsThe content of total flavonoids in obtained ointment could reach 60% under the condition that D301 type macroporous resin was used as absorption agent and 100 ml 20% ethanol as elution agent.ConclusionThe method appeared to be feasible to isolate and purify total flavonoids from Bidens bipinnata L..
       Key words：Bidens bipinnata L.;   Total flavonoids;  Macroporous resin
   
　　鬼针草为菊科植物鬼针草的全草，具清热解毒、散瘀消肿之功效［1］，药理和临床报道对原发性高血压有明显疗效，其降压有效成分主要为黄酮类化合物［2］。目前国内上市的有关鬼针草提取物的制剂主要有鬼针草颗粒剂、悦年片、悦年茶等，鬼针草药源充足，价格低廉，开发前景广阔。本实验采用大孔树脂对鬼针草总黄酮进行了分离纯化，工艺简单，切实可行，可为含鬼针草新制剂的研制与生产提供原料药。
       　　1  器材
       UV757CRT紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)；电子精密天平（奥豪斯国际贸易有限公司）。鬼针草Bidens bipinnata L.购自山东建联中药店，经该店姚庭芝主任药师鉴定，芦丁对照品购自中国生物制品检定所，大孔树脂分别购于天津南开大学、成都晨光化工研究院及日本三菱公司。所用试剂均为分析纯。
       　2  方法与结果
       2.1  鬼针草总黄酮的含量测定
       2.1.1  标准曲线制备精密称取经五氧化二磷干燥恒重的芦丁对照品7.00 mg，30%乙醇溶解并定容至25 ml，即得每毫升含无水芦丁0.28 mg的芦丁对照品溶液。分别精密量取0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml芦丁对照品溶液置于10 ml容量瓶中各加30%乙醇至1 ml，加入5% NaNO2 0.5 ml放置6 min后再加入10% Al(NO3)3 0.3 ml，摇匀放置6 min后加入4% NaOH 3 ml，摇匀放置15 min在510 nm处测定。以相应试剂做空白分别测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线，回归方程：Y=2.376X，r=0.999 7。
       2.1.2  鬼针草药材总黄酮的含量测定 精密称取鬼针草3.000 g，加入60%乙醇100 ml，置沸水浴中回流1 h，冷却，过滤，用60%乙醇50 ml洗涤，移液至250 ml容量瓶，用60%乙醇定容至刻线，精密量取鬼针草溶液1.0 ml，至10 ml刻度试管中，按标准曲线制备项下方法测定含量，鬼针草中总黄酮的含量（17.25±0.59） mg・g1（n=4）。
       2.2  大孔树脂纯化工艺的考察
       2.2.1  大孔树脂的预处理将树脂装入吸附柱中，并保持 95%乙醇面高出树脂表面浸泡。95%乙醇洗涤树脂层，至流出液加蒸馏水不呈白色浑浊，再用蒸馏水洗至无醇味即可。用后的树脂以95%乙醇洗涤至洗脱液近无色，再用蒸馏水洗涤树脂层至无醇味，必要时用1～2倍树脂体积的4% ＮaＯＨ溶液洗涤树脂层，而后用蒸馏水洗至pH为7，即可进行下一周期的使用。
       2.2.2  洗脱溶剂的确定取处理好的大孔树脂10 ml填充于 2 cm×20 cm的柱内 ，将鬼针草水提液(相当于原生药 0.5 g・ml1)1.6 ml上柱， 控制流速2.5 ml・min1，分别用60，60，60，60，60，90，90 ml，浓度为10%，15%，20%，25%，30%，40%的乙醇溶液进行梯度洗脱，每隔15 ml收集1次，摇匀，各取1 ml按标准曲线制备项下制备样品，510 nm处测吸光度。结果见图 1。结果表明，100  ml 10 %~15%的乙醇即可将吸附在树脂柱上的鬼针草总黄酮洗脱完全，故本实验选用20%乙醇100 ml进行洗脱。
       2.2.3  上样量考查分别取相当于0.05，0.1，0.5，1.5，3.0 g鬼针草药材的水提液(相当于原生药 0.5 g・ml1)，加至预先处理好的树脂柱上 ( 2 cm×10 cm) ，控制流速进行吸附。用100 ml 20%乙醇洗脱。洗脱液依次用水稀释1，5，10，10，10倍后依标准曲线项下处理并测定。结果见表1。
       2.2.4  分离的鬼针草总黄酮纯度考察取鬼针草药材2.50 g，加 8倍量水加热回流提取3次， 1 h/次，合并滤液，水浴浓缩至5 ml(相当于原生药 0.5 g・ml1)，备用，测得总黄酮含量为8.5 mg・ml1。取该鬼针草水提液3 ml，加于( 2 cm×10 cm)大孔树脂柱上。收集洗脱液匀作两份，一份依标准曲线测定总黄酮的含量，另份水浴蒸干后于105℃干燥 3 h，测定干膏收率，计算总黄酮的纯度。结果见表2。
       图1  鬼针草中总黄酮梯度洗脱曲线图（略）
       表1  上样量对吸附效率的影响（略）
       *相当于原生药；n=2结果显示，该实验条件下，鬼针草水溶液最大上样量相当于原生药1.5 g。从表 2 可看出 ，经大孔树脂处理后的总黄酮含量可达60%以上，且具有良好的重现性。
       表2  总黄酮纯度测定结果（略）
       3  结论
       实验中曾对SP70，D301等多种型号的大孔树脂进行考察，发现D301的吸附分离效果较好。通过对影响大孔树脂吸附及解吸的各种因素系统研究，最后确定了本实验条件下分离鬼针草总黄酮的最佳工艺为：采用D301型大孔树脂，上柱量相当于原生药1.5 g，用20%乙醇100 ml进行洗脱。经过D301树脂处理后，使经树脂处理的鬼针草水提液较未经树脂处理的水提取液出膏率显著降低，所得的固体浸膏中总黄酮含量显著提高，说明D301树脂对鬼针草中总黄酮有很强的吸附能力。该工艺有效地分离纯化了鬼针草总黄酮，去除了杂质，可为鬼针草新制剂的研制与生产提供原料药。
       　　参考文献：
       ［1］  江苏新医学院.中药大辞典（下册）［M］.上海：上海科技出版社，1986：1694.
       ［2］  周志彬.悦年片的疗效观察［J］.中国中药杂志，1989，14（4）：52.
       ( 山东轻工业学院化学工程学院，山东 济南  250100)