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       【关键词】  回归平衡胶囊；,,正交实验法；,,龙胆苦苷
       摘要：目的研究影响回归平衡胶囊制备的各种因素，确定最佳工艺条件。方法用正交实验 L9（34）设计安排实验，分别以干膏收率；龙胆苦苷含量为考察指标，优选回归平衡胶囊提取工艺。结果回归平衡胶囊最佳提取工艺为药材20倍量的水，提取2次，2 h/次。结论该方法可用于回归平衡胶囊的工业化生产。
       关键词：回归平衡胶囊；  正交实验法；  龙胆苦苷
       Studies on Process for Extraction of Huigui Pingheng Capsules by Orthogonal Experiment
       ZHANG Shaowen ,XIE Wen
       (Department of Pharmacy,Wuhan Medical ＆ Health Center for Women and Children, 430016,China)
       Abstract：ObjectiveTo optimize the technological parameters of Huigui Pingheng Capsules through controlling the different factors.MethodsFactors for the water extraction were studied by L9(34) orthogonal test designs using extract dry and gentiopicrin as index respectively.ResultsThe optimum conditions for manufacture of Huigui Pingheng Capsules were to water soluble medicinal materials in 20 times amounts of water soluble medicinal materials for 2 hours.ConclusionThe technology is available for industrial production.
       Key words：Huigui Pingheng Capsules;  Orthogonal Experiment;  Gentiopicrin
   
　　回归平衡胶囊由黄柏、龙胆、熟地、知母、墨旱莲等，为治疗儿童性早熟的中药复方制剂，具有清热降火、滋补肾阴的作用［1］。经多年临床观察应用证明，本品具有明显治疗儿单月经来潮，乳房发育，阴腋毛生长，骨龄提前，发育障碍等儿童性早熟疾病，疗效确切。君药黄柏、龙胆等主含大量亲水性成分，宜采用水煮法。笔者以干浸膏收率和龙胆苦苷含量为指标，采用正交试验法，优选了回归平衡胶囊的提取工艺。
       　　1  仪器与试药
       1.1  药品与试药龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0770-200106）；甲醇（色谱纯，中国上海陆忠试剂厂）；回归平衡胶囊（武汉市儿童药物研究中心制，批号：040416）；水为重蒸水。本品所用中药材均符合《中国药典》2000年版各自项下的有关规定，均以饮片入药；其它试剂均为分析纯。
       1.2  仪器高效液相色谱仪（HP1100），紫外检测器（HP1100），数据处理机（HP1100），79-1型磁力搅拌加热器（湖北黄石市医疗器械厂），AB204型十万分之一电子分析天平（瑞士制造）。
       　　2  方法与结果
       2.1  正交设计确定提取工艺因素与水平影响水煮法提取工艺的因素主要有：加水量、煎煮时间、煎煮次数等因素；将因素设3个水平，按L9（34）设计正交实验。因素水平设计见表1。
       2.2  干膏收率和龙胆苦苷含量的测定①按处方称取药材共300 g，根据表1，选择L9（34）正交表进行实验，浓缩浸膏在水浴上挥去水分，再置恒温干燥箱90℃烘干，粉碎，称重即得干膏重。每100克生药中干膏重即为干膏收率。②干膏中龙胆苦苷含量的测定［2］。对照品溶液的制备：精密称取恒重的龙胆苦苷对照品，加蒸馏水稀释定容，制成每毫升含龙胆苦苷1 940 μg的溶液作为对照溶液，摇匀，备用。标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液，用水稀释成60.625，121.25，242.5，485.00，970.00，1 940.00 μg/ml的供试液。精密吸取各20 μl分别进样3次，取其峰面积平均值与各溶液浓度进行直线回归，以峰面积值（Y）为纵坐标，对照品进样浓度（X）为横坐标，得回归方程Y=6 753.6116X+115.650 9，r=0.999 9。结果表明：龙胆苦苷在0.054~2.160 μg范围内呈良好的线性关系。龙胆苦苷的含量测定：供试品溶液的制备，精密称取回归平衡胶囊内容物约3.0 g，置100 ml容量瓶中，加50 ml蒸馏水，充分振摇，超声震荡提取30 min，过滤。精密量取滤液30 ml，浓缩至10 ml，转移到分液漏斗中，用5 ml蒸馏水清洗烧杯并转移到分液漏斗中，用正丁醇15 ml萃取，取正丁醇层，将正丁醇蒸干，用蒸馏水10 ml将残渣移至分液漏斗中，用10 ml乙醚萃取，取水层，用正丁醇每次15 ml萃取两次，取正丁醇层蒸干。用甲醇将残渣移至10 ml容量瓶中，用甲醇定容，作为供试液。另取不含龙胆的阴性样品适量，同法制成阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定。结果表明阴性对照品无干扰。
       表1  提取正交实验因素水平（略）
       2.3  正交实验［3］选用L9（34）正交表进行正交实验，按处方量称取各药材，以干浸膏收率和干浸膏中龙胆苦苷含量为考察指标。结果见表2。
       2.4  结果分析从表2中结果可以看出，三因素对干浸膏收率影响大小顺序为 C＞A＞B，进一步进行统计分析见表3，表4。故单从干浸膏收率考虑，最佳提取工艺为 A3C3，而因素B可任取一水平。上表统计结果表明A、B、C三因素对干浸中龙胆苦苷含量无显著性影响。故单从干浸膏中龙胆苦苷含量考虑，A、B、C可任取一水平。结合传统的中药水煎煮提取工艺，综合平衡分析各因素对干浸膏收率和对干浸膏中龙胆苦苷含量的影响，从提高生产效率和节约资源的角度，拟选定最佳提取工艺为A3B2C2。即加药材饮片重量20倍水，煎煮两次，每次煎煮2.0 h，合并两次前煮液。浓缩成稠浸膏，置干燥箱中烘干；粉碎，过100目筛，装入0号胶囊即得。
       2.5  提取次数考察及提取工艺的验证实验按处方称取药材饮片6份，每份药材共重300 g，其中3份按最佳工艺提取两次，另3份按最佳工艺提取两次后，再加6倍量水煎煮1.5 h，分别测定干浸膏的收率和干浸膏中龙胆苦苷的含量及龙胆苦苷的提取率。结果见表5。
       表2  提取正交实验实验结果（略）
       方差分析结果列于表3~4
       表3  提取正交实验干浸膏收率结果（略）
       由表7可知，提取两次干浸膏的平均收率为21.65%，干浸膏中龙胆苦苷平均含量为106.59 mg/100 g生药，龙胆苦苷平均提取率为80.0%。提取3次干浸膏的平均收率为22.37%，干浸膏中龙胆苦苷平均含量为109.30 mg/100 g生药，龙胆苦苷平均提取率为82.2%。两者比较，提取3次的干浸膏收率平均增加2.71 mg/100 g；干浸膏中龙胆苦苷平均含量增加0.72%，龙胆苦苷平均提取率增加2.2%。可以认为两次提取得较为完全，按优选工艺提取其干浸膏收率和干浸膏中龙胆苦苷的含量基本稳定，说明优选工艺基本可行。
       表4  提取正交实验龙胆苦苷含量结果（略）
       表5  提取次数考察及工艺验证结果（略）
       　　3  讨论
       君药龙胆草中主要有效成分龙胆苦苷有清热燥湿，泻肝胆火的功效，故优选提取工艺时，以龙胆苦苷为考察指标，实验结果理想。根据传统中成药制备工艺，煎提前用水浸泡；经过实验可知，药材浸泡1 h后可达饱和吸水量的80%以上（经预实验药材吸水量约为药材重量4倍）。药材溶胀后，有利于有效成分的提取，故煎煮前先将药材浸泡1 h。干浸膏含水量应小于9.0%，否则，浸膏细粉容易粘结，流动性差，不利于胶囊灌装。因此，胶囊灌装前，应控制其含水量。
       　　参考文献：
       ［1］  蔡德培，时毓民.性早熟女童阴虚火旺证本质的探讨［J］.中西医结合杂志，1991，7：397.
       ［2］  国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：64.
       ［3］  刘明芝. 中医药统计学，第1版［M］.湖南科学出版社，1999：299.
       (武汉市妇女儿童医疗保健中心  430016)
       摘要：目的研究影响回归平衡胶囊制备的各种因素，确定最佳工艺条件。方法用正交实验 L9（34）设计安排实验，分别以干膏收率；龙胆苦苷含量为考察指标，优选回归平衡胶囊提取工艺。结果回归平衡胶囊最佳提取工艺为药材20倍量的水，提取2次，2 h/次。结论该方法可用于回归平衡胶囊的工业化生产。
       关键词：回归平衡胶囊；  正交实验法；  龙胆苦苷
       Studies on Process for Extraction of Huigui Pingheng Capsules by Orthogonal Experiment
       ZHANG Shaowen ,XIE Wen
       (Department of Pharmacy,Wuhan Medical ＆ Health Center for Women and Children, 430016,China)
       Abstract：ObjectiveTo optimize the technological parameters of Huigui Pingheng Capsules through controlling the different factors.MethodsFactors for the water extraction were studied by L9(34) orthogonal test designs using extract dry and gentiopicrin as index respectively.ResultsThe optimum conditions for manufacture of Huigui Pingheng Capsules were to water soluble medicinal materials in 20 times amounts of water soluble medicinal materials for 2 hours.ConclusionThe technology is available for industrial production.
       Key words：Huigui Pingheng Capsules;  Orthogonal Experiment;  Gentiopicrin
   
　　回归平衡胶囊由黄柏、龙胆、熟地、知母、墨旱莲等，为治疗儿童性早熟的中药复方制剂，具有清热降火、滋补肾阴的作用［1］。经多年临床观察应用证明，本品具有明显治疗儿单月经来潮，乳房发育，阴腋毛生长，骨龄提前，发育障碍等儿童性早熟疾病，疗效确切。君药黄柏、龙胆等主含大量亲水性成分，宜采用水煮法。笔者以干浸膏收率和龙胆苦苷含量为指标，采用正交试验法，优选了回归平衡胶囊的提取工艺。
       　　1  仪器与试药
       1.1  药品与试药龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0770-200106）；甲醇（色谱纯，中国上海陆忠试剂厂）；回归平衡胶囊（武汉市儿童药物研究中心制，批号：040416）；水为重蒸水。本品所用中药材均符合《中国药典》2000年版各自项下的有关规定，均以饮片入药；其它试剂均为分析纯。
       1.2  仪器高效液相色谱仪（HP1100），紫外检测器（HP1100），数据处理机（HP1100），79-1型磁力搅拌加热器（湖北黄石市医疗器械厂），AB204型十万分之一电子分析天平（瑞士制造）。
       　　2  方法与结果
       2.1  正交设计确定提取工艺因素与水平影响水煮法提取工艺的因素主要有：加水量、煎煮时间、煎煮次数等因素；将因素设3个水平，按L9（34）设计正交实验。因素水平设计见表1。
       2.2  干膏收率和龙胆苦苷含量的测定①按处方称取药材共300 g，根据表1，选择L9（34）正交表进行实验，浓缩浸膏在水浴上挥去水分，再置恒温干燥箱90℃烘干，粉碎，称重即得干膏重。每100克生药中干膏重即为干膏收率。②干膏中龙胆苦苷含量的测定［2］。对照品溶液的制备：精密称取恒重的龙胆苦苷对照品，加蒸馏水稀释定容，制成每毫升含龙胆苦苷1 940 μg的溶液作为对照溶液，摇匀，备用。标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液，用水稀释成60.625，121.25，242.5，485.00，970.00，1 940.00 μg/ml的供试液。精密吸取各20 μl分别进样3次，取其峰面积平均值与各溶液浓度进行直线回归，以峰面积值（Y）为纵坐标，对照品进样浓度（X）为横坐标，得回归方程Y=6 753.6116X+115.650 9，r=0.999 9。结果表明：龙胆苦苷在0.054~2.160 μg范围内呈良好的线性关系。龙胆苦苷的含量测定：供试品溶液的制备，精密称取回归平衡胶囊内容物约3.0 g，置100 ml容量瓶中，加50 ml蒸馏水，充分振摇，超声震荡提取30 min，过滤。精密量取滤液30 ml，浓缩至10 ml，转移到分液漏斗中，用5 ml蒸馏水清洗烧杯并转移到分液漏斗中，用正丁醇15 ml萃取，取正丁醇层，将正丁醇蒸干，用蒸馏水10 ml将残渣移至分液漏斗中，用10 ml乙醚萃取，取水层，用正丁醇每次15 ml萃取两次，取正丁醇层蒸干。用甲醇将残渣移至10 ml容量瓶中，用甲醇定容，作为供试液。另取不含龙胆的阴性样品适量，同法制成阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定。结果表明阴性对照品无干扰。
       表1  提取正交实验因素水平（略）
       2.3  正交实验［3］选用L9（34）正交表进行正交实验，按处方量称取各药材，以干浸膏收率和干浸膏中龙胆苦苷含量为考察指标。结果见表2。
       2.4  结果分析从表2中结果可以看出，三因素对干浸膏收率影响大小顺序为 C＞A＞B，进一步进行统计分析见表3，表4。故单从干浸膏收率考虑，最佳提取工艺为 A3C3，而因素B可任取一水平。上表统计结果表明A、B、C三因素对干浸中龙胆苦苷含量无显著性影响。故单从干浸膏中龙胆苦苷含量考虑，A、B、C可任取一水平。结合传统的中药水煎煮提取工艺，综合平衡分析各因素对干浸膏收率和对干浸膏中龙胆苦苷含量的影响，从提高生产效率和节约资源的角度，拟选定最佳提取工艺为A3B2C2。即加药材饮片重量20倍水，煎煮两次，每次煎煮2.0 h，合并两次前煮液。浓缩成稠浸膏，置干燥箱中烘干；粉碎，过100目筛，装入0号胶囊即得。
       2.5  提取次数考察及提取工艺的验证实验按处方称取药材饮片6份，每份药材共重300 g，其中3份按最佳工艺提取两次，另3份按最佳工艺提取两次后，再加6倍量水煎煮1.5 h，分别测定干浸膏的收率和干浸膏中龙胆苦苷的含量及龙胆苦苷的提取率。结果见表5。
       表2  提取正交实验实验结果（略）
       方差分析结果列于表3~4
       表3  提取正交实验干浸膏收率结果（略）
       由表7可知，提取两次干浸膏的平均收率为21.65%，干浸膏中龙胆苦苷平均含量为106.59 mg/100 g生药，龙胆苦苷平均提取率为80.0%。提取3次干浸膏的平均收率为22.37%，干浸膏中龙胆苦苷平均含量为109.30 mg/100 g生药，龙胆苦苷平均提取率为82.2%。两者比较，提取3次的干浸膏收率平均增加2.71 mg/100 g；干浸膏中龙胆苦苷平均含量增加0.72%，龙胆苦苷平均提取率增加2.2%。可以认为两次提取得较为完全，按优选工艺提取其干浸膏收率和干浸膏中龙胆苦苷的含量基本稳定，说明优选工艺基本可行。
       表4  提取正交实验龙胆苦苷含量结果（略）
       表5  提取次数考察及工艺验证结果（略）
       　　3  讨论
       君药龙胆草中主要有效成分龙胆苦苷有清热燥湿，泻肝胆火的功效，故优选提取工艺时，以龙胆苦苷为考察指标，实验结果理想。根据传统中成药制备工艺，煎提前用水浸泡；经过实验可知，药材浸泡1 h后可达饱和吸水量的80%以上（经预实验药材吸水量约为药材重量4倍）。药材溶胀后，有利于有效成分的提取，故煎煮前先将药材浸泡1 h。干浸膏含水量应小于9.0%，否则，浸膏细粉容易粘结，流动性差，不利于胶囊灌装。因此，胶囊灌装前，应控制其含水量。
       　　参考文献：
       ［1］  蔡德培，时毓民.性早熟女童阴虚火旺证本质的探讨［J］.中西医结合杂志，1991，7：397.
       ［2］  国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：64.
       ［3］  刘明芝. 中医药统计学，第1版［M］.湖南科学出版社，1999：299.
       (武汉市妇女儿童医疗保健中心  430016)