三棵针药材的质量控制方法研究
作者：刘鹏翰 ， 韦庚龙， 陆来祥， 赵典丰， 潘声遣
《时珍国医国药》 2006年 第11期
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【关键词】 三棵针；,,盐酸小檗碱；,,薄层色谱；,,高效液相色谱法
摘要：目的制定三棵针药材的鉴别及含量测定方法。方法采用薄层色谱法定性鉴别；高效液相色谱法测定三棵针中盐酸小檗碱的含量。高效液相色谱条件为Vp-ODSC18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为乙腈：0.02 mol/L磷酸二氢钾（24：76）；流速为1.0 ml/min；检测波长346 nm；柱温：30℃。 结果薄层色谱鉴别斑点清晰，易于识别；高效液相色谱测定盐酸小檗碱在2.04~20.4 μg/ml范围内呈良好线性关系，平均回收率99.30%，RSD=0.53%。结论该方法简便易行，重线性好，可用于对三棵针药材的质量控制。
关键词：三棵针； 盐酸小檗碱； 薄层色谱； 高效液相色谱法
Studies of Quality Control Method on Radix Berberidis
LIU Peng-han , WEI Geng-long ,LU Lai-xiang ,ZHAO Dian-feng , PAN Sheng-qian
(Guangxi Tiantianle Pharmaceutical Co. Ltd, Liuzhou 545100,China)
Abstract：ObjectiveTo study the methods of identification and assay in Radix Berberidis. MethodsUsing TLC to identify and HPLC to determine the content of berberine hydrochloride in Radix Berberidis. The HPLC system consisted of Vp- ODSC18 column (4.6 mm×150 mm,5 μm) ,acetonitrile:0.02 mol/L KH2PO4 (24∶76) mixture as mobile phase, detection wavelength at 346 nm,flow rate of 1.0 ml/min, column temperature：30℃. ResultsThe spots in the TLC were clear and distinguishable, the linear range of berberine hydrochloride was from 2.04 to 20.4 μg/ml.The average recovery was 99.30%, RSD was 0.53%. ConclusionThe methods are simple and accurate, can be used for the quality control of Radix Berberidis.
Key words:Radix Berberidis； Berberine hydrochloride； TLC; HPLC
三棵针为小檗碱科植物拟猪犭豪刺Berberis soulieana Schneid、小黄连刺Berberis wilsonae Hemsl、细叶小檗Berberis poiretii Schneid或匙叶小檗Berberis vernce Schneid等同属数种植物的根，具有清热燥湿，泻火解毒的功能。本品收录于《中国药典》1977年版Ⅰ部［1］，是双黄消炎片［2］等产品的原料药材，但质量标准中只有性状描述，不利于药材质量的控制，笔者研究制定了三棵针的薄层色谱鉴别及其有效成份盐酸小檗碱的含量测定方法［2，3］，并测定了不同产地三棵针中盐酸小檗碱的含量，取得了满意的效果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-10AT HPLC 色谱仪（日本岛津公司）；AY200型电子天平（日本岛津公司）；ZA-100 Column Heater（Zheng An Instruments）；YOKO-ZF 三用紫外线分析仪（武汉药科新技术开发公司）；YOKO-BF薄层电动涂敷器（武汉药科新技术开发公司）；UV-1201紫外可见分光光度计（北京瑞丽分析仪器公司）；B3500S-MT超声波清洗器（必能信超声上海有限公司）。
1.2 试药三棵针药材（贵州、湖北），硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；羧甲基纤维素钠（上海化学试剂采购站）；盐酸小檗碱对照品（批号110713-200208，中国药品生物制品检定所），甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别 取本品粉末1.5 g，加甲醇10 ml，置水浴加热回流10 min，滤过，滤液作为供试品溶液，另取盐酸小檗对照品，用甲醇配制成每毫升含0.5 mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各1~2 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 GF254薄层板上，以正丁醇：醋酸：水（2∶0.5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图1。
1~3.样品 4.盐酸小檗碱对照品
图1 三颗针药材的薄层色谱图（略）
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件色谱柱为 Vp-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：乙腈：0.02 mol/L磷酸二氢钾（24∶76）；流速1.0 ml/min；检测波长346 nm；柱温：30℃。 在此条件下，对照品及样品的色谱图见图2。
a-盐酸小檗碱对照品 b-贵州省样品 c-湖北省样品
图2 盐酸小檗碱对照品和三颗针药材高效液相色谱图（略）
2.2.2 测定波长的选择取盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配制成每毫升含8 μg的溶液，用紫外可见分光光度计进行扫描，盐酸小檗碱在265 nm，346 nm处均有最大吸收，结合其它中药产品中盐酸小檗碱含量测定［3，4］方法，选择346 nm为三棵针药材中含量测定波长。
2.2.3 提取溶剂的选择以不同浓度的甲醇及甲醇盐酸为溶剂，分别采用加热回流提取法和超声提取法测定同批样品，使用甲醇为溶剂超声提取效果最好。
2.2.4 提取时间的选择以甲醇为溶剂，分别超声提取15，30，60，120 min，测定同批样品，超声30 min效果最好。
2.2.5 对照品溶液的配制精密称取在60℃减压干燥4 h的盐酸小檗碱对照品4.08 mg，加甲醇定容至100 ml，摇匀。
2.2.6 供试品溶液的配制精密称取三棵针药材粉末0.1 g于100 ml磨口三角瓶中，加甲醇100 ml，精密称重，超声处理30 min，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜过虑，即为供试品溶液。
2.2.7 线性关系考察精密量取2.2.5项下的对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl溶液注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，以峰面积（Y）对浓度（C）进行回归分析，得回归方程：Y=37 266.470 6C+3 513.400 0，r=0.999 9。
2.2.8 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液，重复测定6次，盐酸小檗碱含量的 RSD为0.48%。
2.2.9 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8，12，16，20，24 h后测定，盐酸小檗碱含量的 RSD为0.89%，供试品溶液在24 h内稳定。
2.2.10 重现性实验取同一批样品，按2.2.6项下的方法制备6份供试品溶液，依法测定，盐酸小檗碱含量的 RSD为0.73%，方法重现性较好。
2.2.11 加样回收率实验取已知含量的三棵针样品6份，分别加入对照品溶液204 μg，依法进行样品处理和测定，计算加样回收率，结果如表1，盐酸小檗碱的加样回收率为99.30%， RSD为0.53%，方法的回收率较好。见表1。
表1 回收率实验结果（略）
2.2.12 样品含量测定按2.2.6项下的样品处理方法及2.2.1项下的色谱条件，每次进样10 μl，分别测定了产自贵州、湖北的三棵针药材样品6批。结果见表2。
表 2 样品测定结果（略）
3 讨论
从本研究建立的薄层色谱及HPLC测定方法来看，薄层色谱展开系统分离效果好，斑点清晰，不拖尾；含量测定方法简单，重线性好，可用于药品生产企业及 GAP生产基地对三棵针药材的质量控制。从对不同批次产于贵州、湖北等地三棵针药材中盐酸小檗碱含量的测定结果来看，药材中有效成分盐酸小檗碱的含量有一定的地域性差别，同一地区的药材批间也有差异，这可能与生长环境，采挖时间及种系不同等有关系。
参考文献：
［1］ 中华人民共和国药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，1977：23.
［2］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部标准・中药成方制剂，第2册［S］.1990：65.
［3］ 魏有良，刘 青，董建平.HPLC法测定大败毒胶囊中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药品标准，2004，5（4）：54.
［4］ 陈立明，吕 红，徐天玲，等.前列通栓中盐酸小檗碱的含量测定［J］.中成药，2005，27（5）：619.
(广西天天乐药业有限公司，广西 柳州 545100)