文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  山绿茶；,,总黄酮；,,芦丁；,,紫外分光光度法,,
       摘要：目的建立山绿茶不同炮制品的质量研究方法。方法以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定山绿茶不同炮制品中总黄酮的含量。结果芦丁浓度在8.112～48.672（μg/ml）之间与吸光度值呈良好的线性关系，回归方程为C=85.224 5A+0.642 7，r=0.999 0。平均回收率为101.24%，RSD=2.73%。结论 该测定方法灵敏，简便，重现性好，可用于山绿茶不同炮制品的质量控制。
       关键词：山绿茶；  总黄酮；  芦丁；  紫外分光光度法 
       Determination of Total Flavonoids in Different Processed Products of Ilex hainanensis Merr
       CHEN Yong, XIE Zhen, LI Yanling
       (Guangxi TCM College,  Nanning,  Guangxi  530001,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the evidence for quality of different processed products of Ilex hainanensis Merr.MethodsRutin as the standard and using ultraviolet spectrophotometer to determine the content of total flavonoids in Ilex hainanensis Merr. ResultsThe linear relateionship of rutin was good from 8.112 (μg/ml) to 48.672 (μg/ml), C=85.2245A+0.6427, r=0.999 0. The average recovery was 101.24%(RSD＝2.73%).ConclusionThis method is accurate, simple and reproducible, and can be applied to the quality control of the different processed products of Ilex hainanensis Merr.
       Key words：Ilex hainanensis Merr.;  Total flavonoids;  Rutin;  UV
   
　　山绿茶为冬青科冬青属植物海南冬青Ilex hainanensis Merr的干燥叶,含黄酮类、三萜酸类、绿原酸、鞣酸及山绿茶苷等成分［1，2］，具有清热解毒、平肝潜阳、活血化瘀的功效，临床上用于治疗高血压病［1，2］，文献报道，山绿茶降压片治疗原发性高血压病的总有效率明显高于复方罗布麻片［3］。山绿茶在广西中药材标准（1990年版）中收载的炮制方法有两种，一种为按绿茶加工方式进行，即将鲜叶尽快地用260～280℃翻炒杀青，接着在揉搓台上用手揉搓，然后复炒复揉2～3次，至叶色呈暗绿色，带有银灰绿色，略有光泽为度，取出，放凉；另一种方法为原药材鲜叶直接晒干。黄酮类成分能保持毛细血管正常的抵抗力，减少血管的通透性，可使毛细血管恢复正常弹性，故有软化血管、增加血管弹性，对动脉硬化有软化作用，对高血压病、糖尿病、视网膜炎有防治作用。为了控制山绿茶不同炮制品的质量，对山绿茶不同炮制品中的总黄酮进行了含量测定，现报道如下。
       　　1  仪器与试药
       Agilent8453紫外分光光度计（美国安捷伦科技有限公司）；BP211D电子分析天平（德国赛多利斯）；AE100S电子分析天平(梅特勒托利多仪器上海有限公司)；SB3200T超声波清洗器（上海必能信公司）；101A2型电热鼓风干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号0080-9705，供含量测定用）；山绿茶不同炮制品为：上林药材（传统工艺炮制）、80℃干燥2 h药材、80℃干燥1.5 h药材、80℃干燥1 h药材、70℃干燥2 h药材、70℃干燥1.5h药材、70℃干燥1 h药材、60℃干燥2 h药材、60℃干燥1.5 h药材、60℃干燥1 h药材、晾干药材、自炒药材，以上原药材均购于上林县，并经广西中医学院陈勇教授鉴定符合广西中药材标准（1990年版）山绿茶项下药材品种，确定为冬青科冬青属植物海南冬青Ilex hainanensis Merr.的干燥叶，所用试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品约25 mg，置25 ml量瓶中，加70%乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10 ml，置50 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含无水芦丁0.2028 mg）。
       2.2  检测波长的测定精密量取上述对照品溶液2 ml于25 ml量瓶中, 加水至6 ml，分别加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，静置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以相应试剂作空白，照分光光度法［3］，在400～800 nm测定吸收光谱图，其最大吸收波长为502 nm［3］。光谱图见图1。
       图1  芦丁对照品吸收光谱图（略）
       2.3  标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分别置于25 ml量瓶中，各加水至6 ml，分别加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，静置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，照分光光度法［3］，在502 nm波长处测定吸收度。以浓度（C，μg/ml）为纵坐标，吸收度（A）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为C=85.224 5A+0.642 7，r=0.999 0。结果表明芦丁浓度8.112～48.672 μg/ml之间与吸光度值呈良好的线性关系。标准曲线见图2。
       图2  芦丁对照品标准曲线（略）
       2.4  供试品溶液的制备取本品粗粉约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 ml，置25 ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加水至6 ml”起依法测定吸收度，用回归方程求出供试品溶液中总黄酮的含量(mg)，计算，即得。
       2.5  精密度实验 取同一供试品溶液重复测定6次，平均吸收度为0.344，RSD为0.27%（n=6），表明精密度良好。
       2.6  稳定性实验 对同一份供试品每间隔6 min测定吸光度，在30 min内平均吸收度为0.302,RSD=1.63%（n=6），说明在30 min内显色基本稳定。
       2.7  重复性实验取同一批药材，平行测定6次，平均含量为77.35 mg/g，RSD为1.87%，表明重复性良好。结果见表1。
       表1  重复性实验结果（略）
       2.8  加样回收率实验取已测知含量的样品约0.05 g，精密称定，分别加入一定量的芦丁对照品，照供试品溶液制备方法处理并测定含量。结果见表2。
       表2  总黄酮回收率测定结果（略）
       2.9  样品测定取药材粉末0.1 g，精密称定，照供试品溶液的制备方法处理并测定。结果见表3。
       　　3  讨论
       3.1  在提取过程中，曾用醋酸乙酯-石油醚30～60℃（3∶1）混合溶液进行超声脱脂处理，发现总黄酮的含量较低，可能在脱脂过程中会提取去部分黄酮类成分，后改用直接进行超声处理总黄酮的提取较完全。
       表3  样品中总黄酮测定结果（略）
       3.2  通过对山绿茶总黄酮的提取溶剂、提取时间等因素考察，确定合适的提取条件为用70%乙醇超声提取1 h。
       3.3  初步实验表明：不同炮制方法，常导致总黄酮含量有较大变化。山绿茶不同炮制品中总黄酮含量结果有不同变化，以自炒药材含量最高；其次是晾干药材、上林药材（传统工艺炮制）、80℃干燥2 h药材、80℃干燥1.5 h药材、80℃干燥1 h药材、70℃干燥2 h药材、70℃干燥1.5 h药材、70℃干燥1 h药材、60℃干燥2 h药材、60℃干燥1.5 h药材、60℃干燥1 h药材。自炒药材可能因为炒制时间比较短，另外较高的温度还可以破坏药材中大部分酶，故药材中黄酮类成分含量最高。而晾干药材因未受热黄酮类成分基本不受破坏，但药材中酶未被破坏，仍有部分黄酮类成分被分解，故含量次高，而采用60～80℃干燥，因受热温度不高但时间较长，使酶活性增强加速黄酮类成分的分解破坏，因此认为山绿茶的炮制方法以自炒（清炒）为佳。山绿茶不同炮制方法与总黄酮含量的变化关系还有待进一步考察研究。
       3.4  根据含量较多的3，5位羟基黄酮类化合物可与硝酸铝试液显色后，在一定波长下有最大吸收峰的特点［4］，在供试品溶液中加入亚硝酸钠试液显色后，采用紫外分光光度法对其进行含量测定，对照品选用芦丁，但该方法必须在显色后30 min内测定，因在30 min后，其吸光度会随时间急剧下降，影响样品测定的准确。
       3.5  山绿茶不同炮制品中的黄酮类成分含量都比较高，将其作为降压、降血脂、减肥类药品或保健品值得进一步研究开发。
       　　参考文献：
       ［1］  《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编［M］.北京：人民卫生出版社，1973：194.
       ［2］  方  鼎，沙文兰，陈秀香，等.广西药用植物名录［M］.南宁：广西人民出版社,1984：281.
       ［3］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：248，177，附录VB.
       ［4］  王光宁，赵新慧，李泽友，等.荷叶药材标准的初步研究［J］.中药新药与临床药理,2005,16(1):68.
       基金项目：广西科技厅科技攻关资助项目（No.0322024－4B）
       (广西中医学院,广西 南宁  530001)