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       【关键词】  牙舒安片；,,盐酸小檗碱,；,,高效液相色谱；,,质量标准
       摘要：目的建立牙舒安片的质量标准。方法采用薄层色谱法对片剂中的山豆根、白芷、冰片进行定性鉴别；用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。结果薄层色谱中均能检出山豆根、白芷、冰片；盐酸小檗碱在2.1 ~ 33.6μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，相关系数r= 0.999 9，加样回收率为99.01%，RSD为1.37%。结论该方法可用于牙舒安片的质量控制。
       关键词：牙舒安片；  盐酸小檗碱 ；  高效液相色谱；  质量标准
       Study on the Quality Standand of Yashuan Tablets
       PIAO Huishun， KANG Dongzhou， JIN Zaijiu
 
　　(College of Pharmacy of Yanbian University, Yanji 133000, China )
       Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard of Yashuan Tablets．MethodsSophora tonkinensis Gapnep，Angelicac dahurica Benth.et Hook.f，and Cinnamomum camphora(L.) Presl in the tablets of Yashuan were identified with TLC；the contents of berberine hydrochloride was determined with HPLC scanning．ResultsSophora tonkinensis Gapnep，Angelicac dahurica Benth.et Hook.f，and Cinnamomum camphora(L.) Presl could be tested out in HPLC chromatogram；berberine hydrochloride appeared a good linear relationship in the range of 2.l ~33.6 μg /ml，r＝0.999 9, and the average recovery was 99.01%, RSD＝1.37%(n＝5)．ConclusionThis method can be used to contro1 the quality of Yashuan Tablets．
       Key words： Ya shu an tablets；  Berberine hydrochloride；  HPLC；  Quality standard
   
　　牙舒安片由黄柏、山豆根、白芷、冰片等组成。具有清热解毒，消肿止痛功能。用于胃火内盛所致牙痛、齿龈肿痛，牙周炎等症。为有效控制其质量，对制剂中山豆根、白芷、冰片等进行薄层色谱(TLC)鉴别，并用高效液相色谱法对其主药黄柏中的盐酸小檗碱［1］进行了含量测定，以其保证药品的内在质量。
       　　1  仪器与试药
       美国惠普HP1100高效液相色谱仪，HP1100色谱工作站；AS超声波清洗器（天津奥特恩斯仪器有限公司）； UV2201型紫外分光光度仪（日本岛津）。牙舒安片（延吉市中医院制剂室提供）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713200208供含量测定用）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  定性鉴别
       2.1.1  山豆根的鉴别用参照文献［2］方法，取本品10片，研碎，加乙醇10 ml，振摇使溶解，滤过，滤液浓缩至2 ml，作为供试品溶液。取缺山豆根的本品，按供试品制备方法制成阴性对照品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ＶＩＢ）试验。取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液10μl分别点于同一硅胶Ｇ板上，以环己烷丙酮醋酸乙酯浓氨试液（1∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照品在此无斑点。结果见图1。
       2.1.2   白芷的鉴别用参照文献［3］方法，取本品10片，研碎，加无水乙醇20 ml，水浴回流4 h，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解作为供试品溶液。取缺白芷的本品，按供试品制备方法制成阴性对照品溶液。另取白芷对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ＶＩＢ）试验。取上述3种溶液各10μｌ，分别点于同一硅胶Ｇ板上，以氯仿甲醇甲酸（10∶0.4∶0.1）为展开剂，上行展开10 cm，取出，晾干。喷10%香草醛浓硫酸溶液，稍加热，显色。供试品与对照药材色谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照品在此无斑点。结果见图2。
       2.1.3  冰片的鉴别按参考文献［4］方法，取本品5片，研细，加石油醚（60~90℃）5 ml，密塞，振摇数分钟，静止30 min，滤过，滤液作为供试品溶液；同法制得冰片药材对照液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VI B）试验，吸取上述溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷一醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液乙醇（2∶8）的混合溶液，在100℃烘约5~10 min，供试品色谱中在对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照品在此无斑点。结果见图3。
       1.阴性对照2.苦参碱对照3.供试品       
       图1  山豆根薄层色谱（略）  
       1.阴性对照品2.白芷对照药材 3.供试品      
       图2  白芷薄层色谱  （略）
       1.阴性对照品2.冰片  3.供试品
　　
　　图3  冰片薄层色谱（略）
       2.2  含量测定
       2.2.1   盐酸小檗碱检测波长的确定取盐酸小檗碱对照品溶液（20 μg/ml），照紫外分光光度法，在200~400 nm波长范围内测定光密度，绘制曲线，对照品溶液在345 nm波长处有最大吸收，故选用345 m为其检测波长。
       2.2.2  色谱条件 依利特色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温：35℃，流动相：乙腈0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用10%NaOH溶液调pH=5.0)（28∶72），流速：1.0 ml/min，检测波长：345 nm。
       2.2.3  对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含盐酸小檗碱300 μg的溶液，摇匀，即得。
       2.2.4  供试品溶液的制备取本品5片，研细（过80目筛）,精密称定称取1.0 g，置50 ml量瓶中，加盐酸甲醇（1∶100）溶液40 ml，超声波处理30 min，加甲醇至刻度，滤过，用微孔滤膜滤过，即得。
       2.2.5  阴性对照品溶液的制备 按处方称取缺黄柏的其他药味，按制备工艺制成片剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
       2.2.6  系统适用性实验 取盐酸小檗碱对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液分别进样，结果表明，对照品色谱与供试品色谱在相同保留时间处有一色谱峰，而阴性对照品的色谱图在盐酸小檗碱相应的保留时间附近无干扰 峰。结果见图4~6。
       图4对照品全程图（略）                    
       图5供试品全程图（略）                   
       图6阴性对照品全程图（略）
       2.2.7  标准曲线的绘制精密称取盐酸小檗碱对照品，2.1，4.2，8.4，16.8，33.6 μg/ml，精密吸取10 μl进样, 测定吸收度积分值，以盐酸小檗碱对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=4 275.4X-14.045，相关系数r=0.999 9。结果表明，盐酸小檗碱在2.1~33.6 μg/ml范围内呈较好的线性关系。
       2.2.8  稳定性实验精密吸取同一供试品（050102）溶液，分别于0，1，5，8，24 h注入液相色谱仪各10 ml，依法测定5次，以盐酸小檗碱峰面积积分值为指标，测定其稳定性。结果见表1。
       表1  稳定性实验测定结果（略）
       结果表明，样品在24 h内稳定。
       2.2.9  精密度实验 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液，重复进样5次，每次10 ml，以盐酸小檗碱峰面积积分值为指标，测定其精密度，，结果平均值为346.00，RSD=1.59%，表明，本实验方法精密度较好。
       2.2.10  重现性实验 精密称取同一批（批号050102）供试品5份，按供试品溶液项下制备，依法测定，计算供试品含量，以考察本法的重现性，结果盐酸小檗碱的平均含量为3.251 4(mg/g)，RDS为2.97%，本法重现性较好。
       2.2.11  加样回收率实验  精密称取同一批（050102）已知含量（3.251 4 mg/g）的样品共五份，分别精密加入2.0 mg盐酸小檗碱对照品，依法测定，计算回收率。结果见表2。结果表明，本法平均回收率99.01%，RSD为1.37%，表明本法准确度较好，方法可行。
       2.2.12  样品含量测定取5批样品，按2.3项下的方法制备供试品溶液，每批3份，分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积积分值，计算5批样品的含量，结果见表3。
       表2  回收率测定结果（略）
       表3  样品中小檗碱的含量（略）
       　　3  讨论
       通过实验，确定了牙舒安片中白芷、山豆根、冰片的TLC鉴别方法，并取3批样品（批号分别为：050101、050102、050103）采用本法对处方中上述3种药材进行验证，其它成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强重现性良好，结果可靠。采用高效液相色谱法测定牙舒安片中盐酸小檗碱的含量来控制其内在质量，方法简便，准确。同时，对牙舒安片的各项检查指标，如片重差异、崩解时限、重金属检查及砷盐检查、微生物限度等进行检测，均符合《中国药典》2005年版附录的规定；对本制剂进行稳定性考察，外在及内在质量末见改变，说明该制剂质量稳定。
       　　参考文献：
       ［1］  赵维娟，张  梅，许景峰，等.反相高效液相色谱法测定胃宁胶囊中盐酸小檗碱含量［J］.解放军药学学报，2004，20（6）：462.
       ［2］  国家药品标准（试行）WS11262（ZD1262）2002，牙痛宁滴丸，2002：322.
       ［3］  赵  越，段秀俊.对红花，白芷两种中药TLC鉴别方法的改进［J］.中医药研究，2000，16（2）：54.
       ［4］  崔  波，金佩芬.西瓜霜润喉片质量标准研究［J］.时珍国医国药，1999，10（1）：36.
       (延边大学药学院，吉林 延吉  133000)