文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  温肾
       摘要：目的研究温肾化瘀法治疗高尿酸血症的作用机理。方法将温肾化瘀中药分别用于因酵母膏和氧嗪酸钾盐致高尿酸血症动物模型身上，并与苯溴马隆和别嘌呤醇对照观察其对模型动物血尿酸（UA）、尿素氮（BUN）及血清黄嘌呤氧化酶（XOD）的影响。结果两种方法均可使小鼠血尿酸明显升高（P＜0.05）。在酵母膏致高尿酸血症动物模型中，中药各剂量组及苯溴马隆组有明显改善模型动物血UA、BUN异常升高的作用（P＜0.05），但中药各剂量组对XOD活性的改善与模型组相比无统计学意义（P＞0.05）；在氧嗪酸钾盐致高尿酸血症动物模型中，中药高剂量组、别嘌呤醇组及苯溴马隆组与模型组比较有改善实验小鼠血UA，BUN异常升高的作用（P＜0.05），但中药各剂量组对XOD活性的改善与模型组相比无统计学意义（P＞0.05）。但对XOD活性的改善，高剂量组已接近于阳性组。结论温肾化瘀中药很可能有抑制XOD的活性和促进尿酸排泄的作用。
       关键词：温肾化瘀；高尿酸血症；尿酸；尿素氮；黄嘌呤氧化酶；作用机理
       The Research of the Function Mechanism of Anti-Hyperuricuria Through Warming Kidney and Removing Blood Stasis
       TAN Wanchu, TANG Jianyuan, ZHANG Yi, YANG Wenxuan
       (Clinical Medical College, Chengdu University of TCM, Chengdu, Sichuan 610075, China)
       Abstract:ObjectiveTo research the function mechanism of anti- hyperuricuria through warming kidney and removing blood stasis. MethodsThe herb treat the model of animal which get hyperuricuria owing to yeast grease or potassium oxonate. We observe how it affects the blood uric acid, urea nitrogen and xanthine oxidase of rats.ResultsWe can successfully get the hyperuricuria animal model in both methods. The herb can improve the blood uric acid and urea nitrogen of animal model ascending, but no effect in the xanthine oxidase in the hyperuricuria  mouse experiment because of yeast grease. So dose it in the hyperuricuria mouse experiment because of potassium oxonate. But we can know the high dose of herb is close to positive medicine from herb therapeutic trend.ConclusionThe herb of warming kidney and removing blood stasis possibly inhibit xanthine oxidase activity and uric acid ejection.
       Key words:Warm kidney and remove blood stasis; Hyperuricuria; Uric acid;  Urea nitrogen; Xanthine oxidase; Functional mechanism
       高尿酸血症是痛风发作的病理基础，其生化标志是血尿酸浓度超过正常上限。正常人血尿酸浓度(血清，尿酸酶法)波动在较窄的范围，男性为0.15～0.38 mmol/L(2.4～6.4 mg/dl)，女性更年期以前为0.1～0.3 mmol/L(1.6～5.2 mg/dl)，女性更年期后其值接近男性。这是由于雌激素对肾脏排泄尿酸有促进作用。流行病学研究提示，血尿酸超过0.42 mmol/L时，发生痛风性关节炎或肾尿酸结石的危险性增加。但高尿酸血症者只有10%左右发展为痛风，出现痛风的临床症状。有一种人有持续血尿酸水平增高而无痛风发作，称之为特发性高尿酸血症。因此，有高尿酸血症不等于就是痛风，但其在该病的发生发展过程中不可忽视。
       四川省名老中医王再谟教授总结其40余年的临床经验，认为高尿酸血症是痛风性关节炎的重要生化基础，因此，降低血尿酸是治疗痛风的关键。高尿酸血症中医责之为湿浊、痰瘀、浊毒等病理产物作祟，导致营血成分发生变化，从而影响血脉运行，瘀滞经脉关节而成痛风性关节炎。由于痛风性关节炎乃浊毒瘀滞使然，系本虚标实之证，以脾肾亏虚，致瘀浊内盛为主要病机，其脾肾亏虚在前，浊毒瘀滞在后，主要当以温肾化瘀予以治疗。由于目前众多医家仍沿袭故法主要采取“祛风散寒，除湿止痛，活血化瘀”等来治疗，王老则独辟蹊径提出采用“温肾化瘀法”来治疗高尿酸血症及痛风性关节炎。现报道如下。
       　　1 实验材料
       1.1 动物昆明种小鼠，体重18～20g，由成都中医药大学动物实验中心提供，四川省动物生产合格证号：04-11。
       1.2 仪器TMS1024i全自动生化分析仪、上海核所日环光电仪器有限公司生产SN-695B型智能放免γ测量仪。
       1.3 实验用药
       1.3.1 中药处方依据王再谟教授经验方（刺五加、杜仲、赤芍、丹参、土茯苓、威灵仙等），上述药材购自于成都市中药材公司，为方便实验需要，将上述药材水煎后浓缩成浸膏并干燥，每克浸膏粉相当于5.03 g原生药材。
       1.3.2 阳性药别嘌呤醇:重庆青阳药业有限公司生产，生产批号：040104。苯溴马隆/立加利仙:江苏昆山龙灯瑞迪制药有限公司，生产批号：0301993。
       1.4 造模剂酵母膏:北京奥博星生物技术有限责任公司，生产批号：20040302，规格：500 g。97%氧嗪酸钾盐:美国SIGMA-ALDRICH公司，生产批号：03510DO-483。
       1.5 统计学处理选用SPSS11.0统计软件，采用ONEWAY ANOVA方差分析。
       　　2  方法与结果
       2.1  温肾化瘀中药对小鼠因酵母膏致高尿酸血症的影响［1］取KM雄性小鼠84只，随机分为空白组、模型组、阳性A组（别嘌呤醇）、阳性B组（苯溴马隆）、中药高、中、低剂量组。除空白组外，其余各组以酵母40 g・kg-1・d-1灌胃，连续1周，第6天、第7天阳性A组和B组分别给予别嘌呤醇（40 mg・kg-1）和苯溴马隆（20 mg・kg-1），中药各剂量组从5d开始予以中药，连续3 d，第8天眼眶取血，测定小鼠血BUN和UA，经单因素方差（ONEWAY  ANOVA）分析，组间比较选用LSD或S-N-K分析。结果见表1～2。表1 各组小鼠血BUN情况比较（略)表2 各组小鼠血UA情况比较（略）
       2.2 温肾化瘀中药对因酵母致高尿酸血症小鼠血清XOD的影响XOD主要存在于哺乳动物的乳汁或肝脾中，属需氧脱氢酶类。在体内，腺嘌呤核苷次黄嘌呤核苷次黄嘌呤黄嘌呤尿酸尿囊素，尿酸经肾小管分泌排出体外。故增加体内尿酸、尿酸前体(次黄嘌吟、黄嘌吟)的量或抑制肾小管尿酸的分泌均可导致体内血尿酸含量的增高导致高尿酸血症。取KM雄性小鼠84只，随机分为空白组、模型组、阳性A组（别嘌呤醇）、阳性B组（苯溴马隆）、中药高、中、低剂量组。除空白组外，其余各组以酵母40 g・kg-1・d-1灌胃，连续1周，第6天、第7天阳性A组和B组分别给予别嘌呤醇（40mg・kg-1）和苯溴马隆（20mg・kg-1），中药各剂量组从第5天开始予以中药，连续3 d，第8天眼眶取血，血浆需以3 000～3 500 r/min，离心10 min，小心汲取澄清的上清液用放免法进行测定XOD活力（定义：每升血清/浆在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为1个酶活力单位U），结果经单因素方差（ONEWAY ANOVA）分析，组间比较选用LSD及S-N-K分析。结果见表3。表3 各组小鼠血清XOD比较（略)
        
　　2.3 温肾化瘀中药对小鼠因氧嗪酸钾盐致高尿酸血症的影响［2］取KM雄性小鼠84只，随机分为空白组、模型组、阳性A组（别嘌呤醇）、阳性B组（苯溴马隆）、中药高、中、低剂量组。除空白组外，其余各组在取血前2 h用氧嗪酸钾盐按300 mg・kg-1剂量ip小鼠，给药组在取血前1 h ip别嘌呤醇（40 mg・kg-1）和苯溴马龙（20 mg・kg-1），中药连续3 d ig给药，眼眶取血，测定小鼠血BUN和UA，经单因素方差（ONEWAY  ANOVA）分析，组间比较选用LSD及S-N-K分析。结果见表4～5。表4 各组小鼠血BUN情况比较（略）表5 各组小鼠血UA情况比较（略）
       2.4 中药对因氧嗪酸钾盐致高尿酸血症小鼠血清XOD的影响XOD主要存在于哺乳动物的乳汁或肝脾中，属需氧脱氢酶类。在体内，腺嘌呤核苷次黄嘌呤核苷次黄嘌呤黄嘌呤尿酸尿囊素，尿酸经肾小管分泌排出体外。故增加体内尿酸、尿酸前体(次黄嘌呤、黄嘌呤)的量或抑制肾小管尿酸的分泌均可导致体内血尿酸含量的增高导致高尿酸血症。取KM雄性小鼠84只，随机分为空白组、模型组、阳性A组（别嘌呤醇）、阳性B组（苯溴马隆）、中药高、中、低剂量组。除空白组外，其余各组以酵母40 g・kg-1・d-1灌胃，连续1周，第6天、第7天阳性A组和B组分别给予别嘌呤醇（40 mg・kg-1）和苯溴马隆（20 mg・kg-1），中药各剂量组从第5天开始予以中药，连续3 d，第8天眼眶取血，血浆需以3 000～3 500 r/min，离心10 min，小心汲取澄清的上清液用放免法进行测定XOD活力（定义：每升血清/浆在37℃每分钟转化1 μmol的底物所需的酶量为1个酶活力单位U），结果经单因素方差（ONEWAY  ANOVA）分析，组间比较选用LSD及S-N-K分析。结果见表6。表6 各组小鼠血清XOD比较（略）
      
　　3 结果与讨论
       本实验为在小鼠身上重现高尿酸血症，采用抑止尿酸排泄和补充大量嘌呤类饮食的两种方法造模。其一小鼠体内有尿酸酶可分解尿酸，而人体是没有这种酶的，故用氧嗪酸钾盐来抑止小鼠尿酸酶分解尿酸。氧嗪酸钾盐是一种尿酸酶抑制剂，作为化学诱导剂可抑制尿酸分解，增加体内血清尿酸水平，造成高尿酸血症动物模型。该法灵敏简便、重复性好，在国际上已普遍用此评价药物的抗高尿酸血症和痛风作用［3～5］，故我们采用该法尽量模拟人体体内的代谢过程。 其二高尿酸血症的发生如今多跟饮食结构有很大关系，大量进食富含嘌呤类的食物，如动物内脏、沙丁鱼、啤酒等，我们采用大量酵母膏喂食小鼠造模，也是尽可能模仿该类患者的生活习惯。这两种造模方法与腺嘌呤、黄嘌呤、乙胺丁醇以及尿酸等造模方法比较有一个显而易见的优势，那就是对模型动物的肾功能影响不明显，对于仅仅是因为高尿酸血症而造成的痛风性关节炎而言，用氧嗪酸钾盐和酵母膏造模更能说明温肾化瘀法治疗痛风性关节炎是否与降低高尿酸血症的作用有关。
       别嘌呤醇(Allopurinal)可抑制黄嘌呤氧化酶，减少UA生成。苯溴马隆/立加利仙主要抑制肾小管回吸收UA的作用强，从而促进尿酸排泄。
       从实验中以酵母膏造模是成功的，模型组血尿素氮（BUN）（P＜0.01）和尿酸（UA）（P＜0.05）均较空白组显著增高。其中模型组（P＜0.01）、别嘌呤醇组（P＜0.05）与空白组BUN比较有显差；空白组、苯溴马隆组、中药高、中、低剂量组与模型组BUN比较有极显差（P＜0.01）；空白组、苯溴马隆组、中药高、中、低剂量组与别嘌呤醇组BUN比较有显差（P＜0.05）；模型组（P＜0.01）、别嘌呤醇组（P＜0.05）与苯溴马隆组BUN比较有显差。
       模型组与空白组UA比较有显差（P＜0.05）；空白组、苯溴马隆组、中药高、中、低剂量组与模型组UA比较有显差（P＜0.05）。
       模型组、苯溴马隆组、中药低剂量组与空白组黄嘌呤氧化酶（XOD）活性比较有显差（P＜0.05）；空白组、别嘌呤醇组与模型组XOD活性比较有显差（P＜0.05）；模型组、苯溴马隆组、中药低剂量组与别嘌呤醇组XOD活性比较有显差（P＜0.05）；空白组、别嘌呤醇组与苯溴马隆组XOD活性比较有显差（P＜0.05）。
       中药各剂量组及苯溴马隆组与模型组比较有改善实验动物血UA、BUN异常升高的作用，改善程度接近空白组正常动物的血UA、BUN值，别嘌呤醇对UA、BUN无明显的改善效果。别嘌呤醇组与模型组比较有改善XOD活性的作用，改善程度接近空白组正常动物的XOD活性，而中药各剂量组对XOD活性的改善与模型组相比无统计学意义。但我们可以发现高剂量组对XOD活性的改善程度最接近别嘌呤醇组的水平，且各剂量组对XOD活性的影响呈一个量效关系，说明中药仍有一定的治疗趋势。苯溴马龙对XOD活性无改善趋势，这可能与药物本身作用机理主要以促进尿酸排泄而非涉及XOD活性有关。
       实验结果也显示通过氧嗪酸钾盐造模是成功的，模型组血BUN（P＜0.05）、UA（P＜0.01）均较空白组显著增高。其中模型组与空白组BUN比较有显差（P＜0.05）；空白组（P＜0.05）、别嘌呤醇组、苯溴马隆组、中药高、中、低剂量组（P＜0.01）与模型组BUN比较有显差。
       模型组、中药中、低剂量组分别与空白组、别嘌呤醇组及苯溴马隆组UA比较有显差（P＜0.01）；空白组、别嘌呤醇组、苯溴马隆组、中药高剂量组与模型组UA相比有显差（P＜0.01）。
       别嘌呤醇组、苯溴马隆组分别与空白组及模型组XOD活性比较有显差（P＜0.05），而模型组与空白组XOD活性比较无显差（P＞0.05）。
       中药各剂量组、别嘌呤醇组及苯溴马隆组与模型组比较有改善实验小鼠血UA，BUN异常升高的作用，改善程度接近空白组正常动物的血UA，BUN值。但中药中、低剂量组对UA无明显的改善效果，可中药各剂量组对BUN，UA的疗效呈量效递增关系。别嘌呤醇组和苯溴马隆组对XOD活性的影响有着明显的效果，而中药组与模型组比较却无统计学意义。但同样的，中药各剂量组对模型小鼠XOD活性有一定量效关系的改善趋势，其中高剂量组的改善程度最接近两个阳性药物组。此处苯溴马隆能降低XOD活性可能与因为尿酸排泄增加，而尿酸前体未见增加，随着可催化的底物减少，XOD活性及量也随之下降。
       综上，从两种造模方法来看，温肾化瘀中药有降低血尿酸及尿素氮的作用，这可能与其抑制XOD的活性和促进尿酸排泄有关，从而达到治疗高尿酸血症的目的。但该课题的不足之处在于我们未分别对温肾法和化瘀法进行机理阐释，从而还不能明确的说明在痛风治疗中，是温肾法还是化瘀法只起抑止黄嘌呤氧化酶的作用，还是温肾法或化瘀法只有促进尿酸排泄的作用，还是两者兼而有之，这些都有待于今后进一步的探索。
       　　参考文献：
       ［1］陈光亮，张清林，马晓芹，等.酵母致小鼠高尿酸血症模型［J］.中国药理学通报，2003，19(4)：467.
       ［2］喻志峰，杨澄，仇熙，等.瑞香苷对高尿酸血症小鼠的影响［J］.中国药科大学学报，2002，33(2)：142.
       ［3］James J,Carroll,Holly Coburn,et al. A simplified alkaline phosphotungstate assay for uric acid in serum［J］. Clinical Chemistry.1997，17(3):158.
       ［4］Stavric B, Clayman S, Gradd REA.Some in vivo effects in the rat induced by chlorprothixene and potassium.Oxonate Pharm Res Comm.1975:117.
       ［5］Ferrand G,Dumas H,Decerprit J.Synthesis of new pteridines as hypouricem is agents［J］. Ear J Med Chem.1992，27:309.
       基金项目：四川省中医药管理局2003年立项资助项目(No.2003A 13)
       作者简介：谭万初(1956)，男(汉族)，四川成都人，现任成都中医药大学中医内科教研室副教授，学士学位，主要从事中医脾胃系统和风湿类疾病研究工作.
       (成都中医药大学临床医学院，四川 成都610075)
       收稿日期：20050323；