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       【关键词】  不同
       摘要：目的研究不同生长时期的桑叶中黄酮类物质含量差异，以便更有效地利用各生长时期桑叶。方法利用NaNO2Al(NO3)3NaOH分光光度法测定不同生长时期的桑叶中黄酮类物质含量。结果不同生长时期的桑叶中黄酮类物质含量差异很大。结论桑树生长前期的桑叶黄酮类物质含量较低，桑树停止生长后到苦霜前的一段时间桑叶中黄酮类物质含量较高。
       关键词：桑叶；黄酮；生长时期
       Studies on Variation of Flavones Content in Mulberry Leaves from Different Growing Seasons
       YANG Guiming， XUE Qiusheng， ZHEN Zhanxuan, NA Shuzhi
       (Institute of Sericulture,Chengde Medical College, Chengde 067000, China)
       Abstract:ObjectiveStudy the variation of total flavones content in mulberry leaves from different growing seasons in order to use the leaves efficiently.MethodsUsing NaNO2-Al(NO3)3-NaOH spectrophotometry to determine the total flavones content in mulberry leaves from different growing seasons.ResultsThe variation of the total flavones content is remarkable.ConclusionThe total flavones content in mulberry leaves is low when the tree is in growing prophase and high in the period from the date of growth stopped to heavy frost.
       Key words:Mulberry leaves;Total flavones content; Growing season
       桑叶为桑科植物桑Morus alba L.的叶子，以桑叶为主要原料的防病、治病方剂在民间广为流传。桑叶有“神仙叶”之称，含有大量的营养物质及一定量的γ-氨基丁酸（GABA）、植物甾醇、黄酮类物质、1-脱氧野尻霉素（DNJ）等对人体有保健功效的生物活性物质，动物功能性实验表明，桑叶具有降血压、降血脂、降血糖、抗衰老等多种保健功效［1］。国内外对桑叶的药用、食用等进行了一定的研究，并研制出了一些桑叶制品。桑叶中的黄酮类化合物对人体具有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、抗衰老等生物活性和生理活性作用。桑叶早已为多种中药的配方成分，但资料及实际应用中多采用霜桑叶［2，3］。由于产地［4］、部位［5］及采收时期［6～8］等直接影响到中药的药用品质，因此，本文对不同生长时期的桑叶黄酮类物质含量差异进行了研究，以便更为充分、更为有效地对不同生长时期的桑叶加以利用。
       　　1 材料与方法
       1.1  材料
       供试桑树取自本所四号实验桑园，品种有：枝条1和枝条2为9601，枝条3、枝条4和枝条5为铁把，枝条6和枝条7为8803，枝条8、枝条9、枝条10和枝条11为辽44，枝条12为辽桑X。
       1.2仪器730紫外可见分光光度计。
       1.3 取样方法
       1.3.1 同一枝条不同生长时期桑叶取样方法选取头一年夏伐的桑树的枝条，对其进行标记，于取样前10 d打去顶芽，并经常抹芽，不让其长成新枝。分别于6月17日、7月30日、9月18日、10月5日（轻霜）、10月10日（苦霜）进行取样。取样时从整个枝条上均匀摘取叶片（不含叶柄），混合后作为该枝条该时期的样品 。将所取样品风干，60℃干燥，粉碎，待测。
       1.3.2 同一株桑树上的不同枝条在不同生长时期的取样方法选取头一年夏伐的桑树的枝条，其上各枝条长势基本一致，对其进行标记，于取样前10 d打去顶芽，并经常抹芽，不让其长成新枝。对五个枝条于6月17日、7月30日、9月18日、10月5日（轻霜）、10月10日（苦霜）进行5次取样，每次取1个枝条。对枝条上的桑叶按上中下叶位取样，干燥，粉碎，测定黄酮类物质含量。
       1.4 样品提取及测定方法
       1.4.1标准曲线分别吸取200 ppm芦丁对照溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0和7.0 ml于8支25 ml的具塞比色管中，补水至等体积，各加入1.0 ml5%NaNO2溶液,放置5 min，再各加入1 ml 10%Al(NO3)3溶液，放置5 min，各加入4 ml 10%NaOH溶液，摇匀，水定容至25 ml，45 min后，以空白为对照，在510 nm（△λ=1 nm）处测定其透过率，再转换为吸光度。其直线方程为Y=2 208.7 814X+4.868 9 式中Y为有色溶液中黄酮类物质的浓度（ppm），X为有色溶液在510 nm处的吸光度。
       1.4.2 样品中黄酮类物质的提取及测定准确称取0.2～0.3 g桑叶样品，加入25 ml蒸馏水，沸水浴煮沸5 min，取出，冷却，定容至25 ml，过滤。吸取滤液1 ml于盛有3.0 ml对照芦丁溶液的25 ml具塞比色管中，按标准曲线方法显色测定。
       　　2 结果与分析
       2.1 不同生长时期桑叶黄酮类物质含量差异对不同生长时期桑叶进行黄酮类物质含量分析测定。结果见图1。
       统计分析表明，不同生长时期桑叶黄酮类物质含量差异达极显著水平（F=52.57**，df（误）=44；df（处）=4时，F0.01=3.72），桑树生长前期（6月17日及7月30日的两次取样）桑叶的黄酮类物质含量处于较低水平，桑叶经轻霜后，其中的黄酮类物质含量达最高，苦霜后其黄酮类物质含量显著降低。
       2.2 不同生长时期同株桑树的不同枝条上的桑叶中黄酮类物质含量差异同一株桑树上不同枝条上的桑叶在不同生长时期黄酮类物质含量差异见图2。
       从图2可以看出，在桑树生长前期（6月17日及7月30日的两次取样），基部叶和中部叶中黄酮类物质含量很低，而其顶部嫩叶黄酮类物质含量很高，甚至高于轻霜桑叶。但从五次取样的总体来看，轻霜桑叶中黄酮类物质含量仍是最高的。
       　　3 结论及讨论
       对同一株桑树上不同生长时期的桑叶中黄酮类物质含量差异研究，关键是取样技术。本研究中的取样方法，根据研究目的，最大限度地遵守单一差异原则，使测定结果的差异仅与桑叶的取样时间有关，最大限度地消除了误差来源。
       分析测定结果表明，桑叶中的黄酮类物质含量以桑树停止生长后（20020910 左右）至苦霜前的一段时间内的含量为最高。对于同一株桑树上的各枝条来说，生长前期基部叶片和中部叶片低于顶部嫩叶，顶部嫩叶的黄酮类物质含量高出基部叶片和中部叶片很多，这与植物表现的黄酮类物质在幼嫩部位含量较高是一致的。而桑树停止生长后（9月18日及10月5日的两次取样），由于气温降低，桑树本身在日平均气温低于12℃时即停止生长（本地20020910 左右），在这种天气逐渐变凉变冷的状况下，桑树本身停止生长，叶片硬化，次生代谢相对增强，导致桑叶中黄酮类物质的累积增加。苦霜后，桑叶的组织结构受到了破坏，次生代谢终止，并导致原有黄酮类物质的破坏，含量降低。因此桑树在停止生长后到苦霜前的一段时间，桑叶中黄酮类物质含量最高。
       　　参考文献：
       ［1］杨贵明，王军，徐风珍，等.桑叶茶的营养药用功能及品质分析［J］.河北农业科学，2001,5（2）：12.
       ［2］张传慧，周忠泽.霜桑叶的食用价值的研究［J］.食品科学，2001，22（10）：64.
       ［3］唐法娣，王砚，卞如濂，等.桑叶延年益寿的药理学研究［J］.中草药，2000，31（9）：685.
       ［4］刘叔倩，郑俊华，王弘，等.不同气候区银杏叶中黄酮和萜内酯含量的变化［J］.中草药，2000，31（6）：424.
       ［5］任爱农，鞠建明.野菊不同部位的总黄酮含量测定［J］.中草药，1999，30（8）：589.
       ［6］牛晓峰，赵瑞山，李维风，等.叶下珠不同生长期及贮存期总黄酮含量测定［J］.西北药学杂志，2000，15（2）：60.
       ［7］仲英，唐文照，丁杏苞，等.不同树龄的银杏叶在不同生长季节中银杏总黄酮和总内酯的含量变化［J］.中草药，1999，30（12）：909.
       ［8］孙全明，张转平，朱朝德，等.生长期巫山淫羊藿叶中总黄酮及淫羊藿苷含量变化［J］.西北药学杂志，2000，15（6）：259.
　　
　　作者简介：杨贵明(1961)，男(汉族)，河北定州人，现任承德医学院蚕业研究所研究员，硕士学位，主要从事植物营养研究工作.
       (承德医学院蚕业研究所，河北 承德067000)
       收稿日期：20050326