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       【关键词】  复方
       摘要：目的探讨含复方阿胶浆鼠血清对肺癌PG细胞周期和凋亡率作用影响。方法采用血清药理学方法，开展了复方阿胶浆含药血清对肺癌高转移株PG细胞体外培养，通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率(APO)的变化。结果复方阿胶浆含药血清可显著提高肺癌细胞凋亡比率，中、高剂量组与对照组相比有非常显著性差异(P＜0.01)，阻滞细胞分裂停止于G0期，各剂量组与空白组相比有非常显著性差异(P＜0.01)。结论复方阿胶浆含药血清可显著诱导肺癌细胞凋亡，阻滞细胞分裂中止，因而具有抗肺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用，可改善肺癌等实体瘤患者的预后。
       关键词：复方阿胶浆；血清药理；肺癌；诱导凋亡
                                                             
　　复方阿胶浆是东阿阿胶股份有限公司出品，为国家中药保护品种，药物组成为阿胶、党参、红参、熟地、山楂等。方剂取材于明代医家张景岳“两仪膏”，具补气养血之效，临床主要用于治疗气血两虚证，如贫血、白细胞减少及免疫力低下等，临床疗效显著。东阿阿胶股份有限公司作为全国阿胶生产厂家的龙头企业，近几年联合国内知名院校开展了“阿胶二次开发”的科研攻关，力求用现代的医学理论和技术来阐述并开发阿胶及其复方的治疗作用、应用范围。我们开展了复方阿胶浆对肺癌高转移株PG细胞诱导分化和凋亡的药理实验。现将结果报告如下。
       　　1 实验器材
       1.1 药物复方阿胶浆(山东东阿阿胶股份有限公司，批号2004081602)。
       1.2 动物Wistar大鼠，购自山东大学实验动物中心，批号 SCXK(鲁)20030004。
       1.3 瘤株肺癌PG株，购自山东省医学科学院药理室。
       1.4 器材流式细胞仪(FAC Scan型)；美国B.D公司生产。
       　　2 实验方法
       2.1 动物含药血清制备取健康雄性的wistar大白鼠，体重在（200～240）g，随机分成空白血清组(对照组)6只，复方阿胶浆组12只。每鼠灌药1次/d，4 ml/d灌胃。空白组每日给予等量生理盐水灌胃，于给药第7天，最后灌药后1 h(灌药前禁食12 h)乙醚麻醉后无菌剖腹经腹主动脉无菌采血，每鼠人约可采血6～8 ml，置无菌离心管离心10 min (1 500 r/min)无菌分离血清。用0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，分装入小瓶，每一小瓶5～10 ml，置-20℃冰箱保存备用。   
       2.2 细胞培养参照刘文哲等［1］人介绍的方法［1］。复苏人肺癌细胞株PG，接种于50 ml培养瓶，加入RPMI 1640培养液(含10％小牛血清，青、链霉素各100 u／m1)8 ml，置于37℃、饱和湿度含5％CO2的CO2细胞培养箱中无菌培养。细胞呈贴壁生长，每2～3 d传代。
       2.3  分组分4组，正常大鼠对照组(空白组)，复方阿胶浆低剂量(5％)含药血清组，复方阿胶浆中剂量(10％)含药血清组，复方阿胶浆高剂量(15％)含药血清组。
       2.4 实验方法与操作取对数生长期的肺癌PG细胞，经消化、离心，计数，以2×105／ml的量接种于小培养瓶中，37℃ 5% CO2含10％新生牛血清的RPMI l640培养基中培养48 h，至细胞生长旺盛后，去掉上清液，分别加入以上各组不同浓度的含药大鼠血清培养细胞，于培养箱中继续培养48 h，然后收集细胞，分别离心，用PBS液洗涤3次，将细胞沉淀充分打散、混匀，70％冷乙醇4℃固定24 h以上。上机前离心去除乙醇固定液，PBS清洗1次，离心，倒掉PBS后，使管内剩余约5 ml PBS，指肚轻轻敲打，使细胞悬浮，加入20 μl  lmg／ml的RNase酶，37℃水浴反应30 min，各管加入1 ml的0.5 μg/ml碘化丙锭(PI)溶液，避光染色30～45 min，400目网过滤后上机检测。流式细胞仪(FACScan)计数104个细胞，激发波长488 nm，分析不同DNA含量的细胞分布，Mac软件进行数据处理，低于G1期的细胞为凋亡细胞，其占细胞总数的比例为凋亡细胞比例［2］。共分4组，每组4瓶。记录打印出结果并统计。
       　　3  结果
       见表1，从表1中可以看出：阿胶可以诱导肺癌PG高转移株细胞凋亡率增高，使细胞周期阻滞在G0G1期的比例增多，与空白组相比有显著性差异。表1 含药血清培养后的细胞周期及凋亡率变化（略）
       　4  结论
       复方阿胶浆由阿胶、熟地、红参、党参等组成，功效补气养血，主治气血两虚证，临床用于贫血和白细胞减少症等，疗效显著。在癌症放化疗期间合用复方阿胶浆可明显改善副作用，提高生存质量延长病人的生存期［3］。为此我们开展了复方阿胶浆辅助放化疗治疗癌症的实验研究，动物实验证实：复方阿胶浆对S180肉瘤、Lewis肺癌、H22肝癌等有明显的抑瘤作用，协同放化疗具明显的增效减毒作用。因此我们开展了复方阿胶浆针对肺癌高转移细胞株PG的诱导凋亡实验研究，采用含药血清培养肿瘤细胞，通过流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率的变化，来反映复方阿胶浆诱导凋亡及对肿瘤进展预后方面的影响。  细胞周期分析结果显示：15％复方阿胶浆含药血清组肺癌细胞凋亡率明显增高，统计学处理有显著性差异，表明复方阿胶浆含药血清可促使肿瘤细胞凋亡，并可使细胞分裂阻滞在G0期，提示复方阿胶浆主要是阻滞细胞分裂，诱导细胞凋亡发挥作用。与对照组对比具有非常显著性差异(P＜0.01)，提示复方阿胶浆可通过改变细胞基因表达而启动细胞凋亡程序，达到诱导肺癌细胞凋亡的作用。本文承蒙南京中医药大学蔡宝昌导师指导，谨致谢意!
       参考文献：
       ［1］刘文哲，李金瀚，胡义德，等.顺铂诱导人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成［J］.中国肿瘤临床与康复，1999，6（1）：13.
       ［2］郭军，王宝成，尹格平，等.耐药基本在肺癌组织与外周血淋巴细胞中的表达［J］.中华结核和呼吸杂志，1999，22（5）：315.
       ［3］胡文平，于兆要.复方阿胶浆配合化疗对晚期非小细胞肺癌患者生存质量的影响［J］.中华中西医结合杂志，2004，4（8）：15.
                                                                                 　　作者简介：刘培民(1974)，男(汉族)，山东枣庄人，现任山东东阿阿胶股份有限公司博士后，博士学位，主要从事阿胶及其复方的研究和新药开发工作.
       (山东东阿阿胶股份有限公司，山东 聊城252201)
       收稿日期：20050314；